防化医学现状及未来展望

化学武器作为大规模杀伤性武器,曾在战争历史中被广泛使用,造成了大量人员伤亡。我国长期面临日本遗弃化学武器的现实危害,同时军事次生化学灾害和化学恐怖袭击也对我国的国家安全和国防安全构成了严峻威胁。防化医学是一门研究化学武器医学防护措施的学科,是军事医学的重要组成部分。本文结合课题组的研究方向及相关进展,系统总结了化学武器的历史、特点和分类,论述了新型化学武器的威胁将长期持续存在,阐述了化学武器的国际军控与履约交流,综述了国际上化学武器防护装备的研究现状,并对未来防化医学的发展方向进行了展望,为促进防化医学尤其是防护装备的发展提供了有价值的参考和借鉴。

基于智慧教室的病例讨论教学在防化医学任职培训中的应用

防化医学是军事预防医学的关键组成部分,也是军医大学重要的任职培训课程。传统课堂理论教学模式不能满足学生任职岗位的内在需求。笔者所在教研室以培养学生的综合素质为导向,通过收集并筛选高质量的病例建立完善的病例库、借助智慧教室的信息化平台,从病例信息解读、学生分组讨论、现场汇报答辩以及课后讲评等流程实施了基于智慧教室的病例讨论教学模式。该模式充分突出学生的课堂主体地位,激发学生的学习兴趣、有效提高学生的综合素质和能力,取得了较好的教学效果。文章从防化医学任职培训教学中应用该教学模式的必要性、课前教学准备、课堂教学实施、课后讲评总结和应用体会进行了系统论述,以期为防化医学任职培训课程的教改提供借鉴。

核医学救援实战化训练智能评估系统的构建与应用

目的论述核医学救援智能评估系统的构建方案及其在实战化训练中的应用。方法基于JAVA语言、B/S架构和MySQL数据库技术,围绕核医学应急救援工作相关4项一级指标和20项二级指标等全要素建立考核标准库模型,对关键技术和考核指标进行量化分制,并开发形成智能评估系统,包括计算机Web端和Pad操作端。结果核医学救援计算机智能评估系统以实战化应用为导向,针对核应急救援队训练结果进行快速准确的数据采集和统计分析,支持现场图像、音频和视频取证,并能快速出具成绩报告和问题反馈,不仅提升了教学训练工作效率,还保证了考评工作的科学性和规范性。结论本系统为核医学救援提供了智能化的评估手段,有助于提升实战化教学和训练质量,对于提升核医学救援队伍建设质量具有重要启示意义。

国际禁化武组织化学危害医学防护与救援培训

目的 为了更好的举办国际禁化武组织(OPCW)化学危害医学防护与救援培训班,进一步帮助和提升禁化武公约成员国履约能力和水平,需要总结前期成功举办培训班的经验和做法。方法 从教学内容、教学方法、师资队伍和考核方式等方面系统的总结国际医学培训班的教学经验和体会。结果 优化教学内容,实践公约宗旨和满足学员诉求;创新教学方法,实现教育理念与国际接轨;精选师资队伍,强化国际视野和政治担当;改革考核方式,突出履约实践能力和过程评价。结论 国际培训的成功实施促进了公约成员国之间的交流与合作,上述经验和体会对今后举办类似国际培训班提供了有益的参考和借鉴。

CBL教学在防化医学教学中的实践

防化医学是一门研究化学武器损伤及其防治措施的学科,是军事医学重要组成部分,其核心教学内容是军用毒剂中毒伤员的临床表现、诊断及救治。以病例为基础的学习(case based learning,CBL)模式是近年来出现的建立在病例病情讨论基础上的全新教学模式,是问题式学习(PBL)模式的发展和创新。CBL教学方式十分灵活,主要以临床病例为基础。以临床问题为切入口的小组讨论式教学法,在临床医学教学中已被广泛采用。文章结合自身在防化医学课程教学中实施CBL教学的经验,探讨CBL教学模式的优势、意义、难点及局限性,以期对后续防化医学教学提供有益的经验和借鉴。

“化学毒剂中毒医学救援”实训教学的微格化探索

随着医疗卫生事业的发展,传统的医学教育教学模式已无法满足新时代医学人才培养的需求。微格化教学训练目标明确、重点突出、反馈及时、评价准确,在越来越多的专业实践教学中得以应用与推广。本文通过分析“化学毒剂中毒医学救援”实训教学的现状与存在的问题,初步探索微格化教学模式在其中的应用。在开展微格化教学后,学生的实践操作考试成绩和总成绩显著高于微格化教学前,学生的学习兴趣、交流能力、解决问题能力及整体素质都得到提升,对课程的满意度普遍较高。总之,微格化教学模式能将复杂的实践技能化繁为简,有层次、多维度地训练学生掌握关键的技能,提升综合能力,从而更加有效地实现教学目标,在“化学毒剂中毒医学救援”技能实训中应用效果良好,值得推广。

军事舞台上化学武器的群魔乱舞与降魔之盾

本文深入探讨了化学武器在军事历史中的应用及其带来的挑战,同时详细分析了为防止和应对化学武器威胁所采取的策略和技术。化学武器,以其独特的杀伤方式和残酷的后果,曾在世界军事舞台上“群魔乱舞”。然而,随着科技的发展和国际社会的共同努力,一系列防护措施和应对策略逐渐形成,构筑了“降魔之盾”。该文回顾了化学武器的历史和应用,揭示了其在战争中的破坏性和人道主义危机。然后,阐述了国际社会如何通过法规和国际公约来限制和禁止化学武器的使用,特别是《化学武器公约》的签订和实施。降魔之盾主要由两个方面构成:一是防护技术和装备的发展,包括个人防护装备、集体防护设施以及医疗救治体系的完善;二是检测和销毁技术的创新,包括化学战剂的快速检测技术、化学武器库存的销毁技术以及应对化学恐怖主义的能力建设。尽管国际社会在禁止和防范化学武器方面取得了显著成就,但仍面临诸多挑战。非国家行为体获取和使用化学武器的风险、化学工业与民用化学品可能被滥用的问题,以及科技进步可能带来的新型化学威胁等,都需要国际社会持续关注和合作解决。通过对化学武器及其防护的全面研究,希望提高人们对这一问题的认识,促进国际社会在禁止和防范化学武器方面的进一步合作和努力。只有将科技与国际法规相结合,构筑起坚实而多面的“降魔之盾”,人类才能有效应对化学武器的威胁,维护世界和平与安全。

智能化学伤模拟人教学训练系统的构建与应用

目的 探讨智能化学伤模拟人的构建方法及其在防化医学实战化教学中的应用。方法 以生理驱动型战创伤模拟人为基础,构建化学中毒后的伤情动态演化数据库和救治干预反馈数据库,开发学生和教师应用的可视化操作系统,形成可应用于防化医学救援训练的智能化学伤模拟人。结果 构建了一套“伤情与救治一体化,训练与考核一体化”的智能化学伤模拟人,不仅能够逼真再现多种复杂的化学中毒伤情,还可与常见临床救治设备实现联动,具有高度的仿真性、智能性和便捷性,极大地提升了防化医学实战化教学质量。结论 智能化学伤模拟人训练系统为化学中毒救治实战化训练提供了有力工具,为培养防化医学人才提供了新思路。

化学武器医学防护面向实战化教学改革研究

化学武器医学防护教学改革对新形势下培养实战型军事医学人才具有重要作用。为研究化学武器医学防护教学改革,提升教学质量,为未来化学战做准备,分析了化学武器医学防护在课程设置、试题库和实践训练中存在的问题,提出合理设置课程体系、建立试题库和增加实践训练是提升教学质量的有效方法。

肝细胞核因子-1b在糜烂性毒剂2-氯乙基乙基硫醚诱导急性肺支气管上皮细胞损伤中的作用及其机制

目的:探讨肝细胞核因子-1b(HNF-1b)在糜烂性毒剂2-氯乙基乙基硫醚(CEES)诱导人源性肺支气管上皮细胞(BEAS-2B)损伤中的作用及其机制。方法:用不同浓度(0、0.4、0.6、0.8、1.0和1.2 mmol/L)的CEES染毒BEAS-2B细胞24 h,使用CCK-8法检测细胞活力,光镜下观察细胞形态,分别采用DCFH-DA和MitoSOX荧光探针检测细胞总活性氧(ROS)和线粒体ROS水平。Western blot检测BEAS-2B细胞中HNF-1b蛋白的表达。再利用慢病毒感染技术构建过表达HNF-1b的BEAS-2B细胞系,用1 mmol/L CESS处理24 h后,分别采用CCK-8法测定细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,MitoSOX和DHE荧光探针检测线粒体ROS和细胞总ROS水平,JC-1染色法检测线粒体膜电位。结果:与对照组比较,0.6~1.2 mmol/L CEES染毒后细胞活力均降低(P<0.01);细胞形态发生损伤性改变;0.8~1.2 mmol/L CEES染毒后细胞总ROS和线粒体ROS水平均增加(P<0.01);CEES染毒组细胞HNF-1b蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。慢病毒转染后,与对照组正常细胞相比,CEES染毒组HNF-1b过表达细胞的细胞活力显著增加(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.01),线粒体膜电位的损伤缓解,且线粒体ROS和细胞内总ROS水平显著降低(P<0.01)。结论:糜烂性毒剂CEES能够导致肺支气管上皮细胞中HNF-1b表达降低,过表达HNF-1b能够减轻CEES诱导的细胞损伤和凋亡,抑制线粒体功能障碍,其机制可能与抗氧化有关。上述结果提示HNF-1b可能是糜烂性毒剂导致肺损伤的新靶点,激活HNF-1b可能是糜烂性毒剂毒性靶点治疗的新策略。

雾化吸入NaClO致小鼠肺损伤模型的构建及机制研究

目的:建立次氯酸钠(NaClO)消毒剂诱导小鼠肺损伤模型,探讨其吸入毒性机制。方法:将0、75、150、300μg/L的NaClO溶液雾化成细微液滴给小鼠静态吸入染毒5 min,染毒后24 h使用肺功能仪检测小鼠肺功能,眼眶取血,收集肺泡灌洗液(BALF)和肺组织。采用HE染色观察肺组织结构,透射电镜观察肺组织细胞内线粒体等细胞器形态,TUNNEL染色观察肺组织细胞凋亡情况。BCA法测BALF蛋白浓度,流式细胞术检测BALF中细胞数量,Western blot检测肺组织抗氧化酶、凋亡及自噬相关蛋白的相对表达量,ELISA试剂盒检测血清、BALF和肺组织匀浆中炎症相关蛋白含量,qPCR检测肺组织匀浆炎症和抗氧化酶相关基因的mRNA表达水平,试剂盒检测肺组织匀浆中MDA含量和SOD酶活性。结果:与对照组相比,75μg/L NaClO染毒组小鼠肺BALF中蛋白浓度变化不明显,150和300μg/L NaClO染毒组BALF中蛋白浓度明显升高且细胞数量明显增多(均为P<0.05),故后续选择150μg/L NaClO作为研究浓度。与对照组相比,150μg/L NaClO染毒组肺功能损伤明显(P<0.05),肺组织匀浆中抗氧化酶SOD2和Nrf2的蛋白表达水平降低(P<0.05),SOD2、Nrf2、CAT mRNA的表达水平降低(P<0.05),肺组织中IL-1β和TNF-α在血清、BALF和肺组织匀浆中的浓度均升高(P<0.05),肺组织匀浆中IL-1β和TNF-αmRNA相对表达量升高(P<0.05),凋亡细胞数量明显增加,Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05);且肺组织细胞线粒体明显肿胀,有自噬溶酶体出现,Beclin1蛋白表达水平升高(P<0.05),P62蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论:成功建立了NaClO诱导小鼠肺损伤模型,并发现NaClO可诱导小鼠肺组织发生凋亡、氧化应激、炎症和自噬。

盐酸右美托咪定对2-氯乙基乙基硫醚致人支气管上皮细胞损伤的保护作用及机制

目的:研究盐酸右美托咪定(DEX)对糜烂性毒剂2-氯乙基乙基硫醚(CEES)诱导的人支气管上皮细胞损伤的潜在保护作用及机制。方法:使用浓度为1.2 mmol/L的CEES处理BEAS-2B细胞24 h,构建糜烂性毒剂导致细胞损伤的模型。使用不同浓度(0.1~1000μmol/L)的DEX预处理BEAS-2B细胞2 h后加CEES染毒24 h,再用CCK-8法检测细胞活力。选择DEX最佳保护剂量,在光镜下观察细胞形态,使用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率,DHE、MitoSOX和RHOD123荧光探针分别检测细胞内总活性氧(ROS)、线粒体ROS(mtROS)和线粒体膜电位水平,通过试剂盒检测总超氧化物歧化酶(SOD)、CuZn-SOD、Mn-SOD酶活性和谷胱甘肽(GSH)含量变化。结果:与对照组相比,CEES染毒组细胞活力均明显降低(P<0.01),凋亡细胞数显著升高(P<0.01),细胞内总ROS、mtROS水平均明显升高(P<0.01),线粒体膜电位显著降低(P<0.01),总SOD、CuZn-SOD、Mn-SOD酶活性均升高(P<0.01),GSH含量降低(P<0.01)。与CEES染毒组相比,0.1~1000μmol/L DEX干预组细胞活力均升高(P<0.01),其中10μmol/L DEX干预组细胞活力升高最明显(P<0.01),后续用10μmol/L作为DEX干预组的最佳剂量。使用10μmol/L DEX干预显著抑制了CEES诱导的细胞凋亡(P<0.01),DEX干预组ROS和mtROS均降低(P<0.01),线粒体膜电位升高(P<0.05),总SOD、CuZn-SOD酶活力升高(P<0.01),GSH含量升高(P<0.01)。结论:DEX对CEES导致的人支气管上皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能与调控线粒体稳态、降低mtROS的产生及增强细胞抗氧化水平有关。

间充质干细胞在光气致肺损伤治疗中的应用展望

光气是窒息性化学战剂的代表,在工业生产中广泛使用,吸入暴露后主要导致急性肺损伤(ALI),容易进展为肺水肿和呼吸窘迫综合征,死亡率较高,国际上仍缺乏有效救治手段。间充质干细胞(MSC)具有高度分化潜能,可发挥免疫调节、抗炎、抗氧化和损伤修复等多种生物学功能,在疾病治疗和再生医学领域被广泛应用。最新研究发现,MSC移植后主要定位于肺组织,具有极强靶向性,可能对急慢性肺损伤治疗具有天然优势。本文主要阐述MSC生物学功能及其在肺疾病治疗中的应用现状,并对MSC在光气导致ALI研究进行总结和展望,为国防军队和国家经济建设提供有力保障。

谷氨酰胺代谢在机体免疫调控中作用的研究进展

谷氨酰胺(Gln)是机体内含量最丰富和用途最广泛的氨基酸,对于维持机体健康具有重要意义。研究表明,Gln是一种具有免疫调节特性的非必须氨基酸,可作为淋巴细胞、巨噬细胞和中性粒细胞的“重要燃料”,参与调控此类细胞的增殖、吞噬与炎症过程。正常情况下机体可通过饮食对Gln进行补充,而严重疾病和过度运动时体内Gln过度分解,因含量无法满足需求而导致免疫功能紊乱。本文主要综述了Gln的生物学功能、代谢与机体免疫调控,以及在感染、脓毒症、肿瘤发生中的作用机制等的最新研究进展。

线粒体抗氧化剂MitoQ减轻氮芥诱导小鼠急性肝损伤

目的探讨线粒体抗氧化剂甲磺酸米托醌(MitoQ)对氮芥(HN2)诱导小鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及相关机制。方法将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:对照组、MitoQ对照组、HN2染毒组、MitoQ+HN2组(MitoQ治疗组)。检测指标如下:体质量;血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性;肝组织Bcl-2、Bax蛋白表达、caspase-3活性、凋亡细胞比例;肝组织HE染色检测病理结构变化;血清血糖水平、血清和肝组织三酰甘油(TG)水平;油红O染色检测肝中性脂肪含量;肝组织丙二醛(MDA)含量、还原型谷胱甘肽和活性氧(ROS)水平;血清炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)浓度。结果2 mg/kg的HN2腹腔染毒可以成功诱导小鼠发生ALI,同时伴有糖脂代谢紊乱。与HN2染毒组小鼠相比,MitoQ治疗组小鼠血清ALT和AST活性降低(P<0.05),肝病理损伤程度显著减轻,Bax/Bcl-2比值、caspase-3活性和凋亡细胞比例降低(P<0.05),肝组织TG含量明显升高(P<0.05),同时肝组织MDA含量和ROS水平显著降低(P<0.05)。此外,MitoQ干预后小鼠血清TNF-α和IL-6浓度较HN2染毒组显著降低(P<0.05)。结论MitoQ通过抗凋亡、抗氧化和抗炎作用发挥拮抗HN2诱导小鼠ALI的作用,可能是HN2中毒的潜在候选药物。该研究为糜烂性毒剂中毒的临床救治提供了新思路。

氧化应激致自噬在光气诱导的急性肺损伤中的作用

目的:探讨大鼠光气暴露模型中肺组织氧化水平的变化,以及氧化应激是否通过调控自噬缓解光气诱导的大鼠急性肺损伤(ALI)。方法:将50只大鼠分为对照组、光气染毒后6、12、24和48 h组。对照组大鼠鼻吸入空气,光气染毒组大鼠鼻吸入41mg/m^(3)的光气,动态染毒30 min。检测相关指标后,选择染毒后12 h组作为本研究动物模型(后称光气组)。另将40只大鼠分为对照组(腹腔注射0.9%生理盐水)、光气组(41 mg/m^(3)的光气染毒30 min)、RPM处理组(光气染毒后腹腔注射5 mg/kg的RPM)和RPM对照组(腹腔注射5 mg/kg的RPM)。再取40只大鼠分为对照组(腹腔注射0.9%生理盐水)、光气组(41 mg/m^(3)的光气染毒30 min)、NAC处理组(光气染毒后腹腔注射200 mg/kg的NAC)和NAC对照组(腹腔注射200 mg/kg的NAC)。观察大鼠肺组织病理学改变;检测大鼠肺功能、肺湿质量、肺系数和肺泡灌洗液(BALF)总蛋白浓度;测定大鼠肺组织ROS水平、肺组织脂质过氧化水平、抗氧化酶(SOD、CAT)活性以及GSH含量;检测氧化还原及自噬相关分子mRNA和蛋白表达水平。结果:与对照组相比,大鼠光气染毒后不同时间组织病理学观察可见肺泡融合,炎性细胞增多;肺功能明显下降(P<0.05或0.01);肺湿质量、肺系数和BALF总蛋白浓度显著升高(P<0.05或0.01);大鼠肺组织中ROS和脂质过氧化水平升高(P<0.01);各抗氧化酶活性和表达水平发生变化(P<0.05或0.01),以暴露后12 h组变化最为显著;与对照组相比,光气组自噬相关蛋白Beclin-1、LC3II/LC3I表达水平降低,P62表达水平上升(P<0.05或0.01);与光气组相比,RPM处理组和NAC处理组自噬水平上调(P<0.05)并缓解光气诱导的ALI;同时,NAC处理组降低了肺组织ROS水平(P<0.05或P<0.01)。结论:光气染毒后不同时间点大鼠肺组织氧化水平升高,同时氧化应激能够调控自噬水平,给予NAC可缓解氧化应激,从而上调自噬水平,改善光气所致的大鼠ALI。

齐墩果酸-壳聚糖纳米颗粒的制备及其对BRL-3A细胞氧化应激水平的影响

目的研究自组装颗粒物理性征及其对BRL-3A细胞毒性作用及氧化应激水平的影响。方法将壳聚糖制备成纳米颗粒储备液(10μg/ml)并行倍比稀释后检测其对BRL-3A细胞活力影响,以壳聚糖纳米颗粒为载体与齐墩果酸自组装,同时观察齐墩果酸自组装后物理性征变化。将BRL-3A细胞分为齐墩果酸(OA)组及齐墩果酸-壳聚糖纳米颗粒(nanoOA)组,分别施加0,6.25,12.5,25,50,100μg/ml OA和nanoOA。检测干预3,6,12,24 h后细胞相对活力变化,及各组作用24 h后细胞活性氧水平(ROS)和丙二醛(MDA)含量变化。结果壳聚糖纳米颗粒对BRL-3A细胞相对活力无影响(P<0.05),自组装后可明显提高OA溶解度。与0μg/ml组相比,高浓度OA组(50,100μg/ml)BRL-3A细胞相对活力明显降低(P<0.05),细胞ROS和MDA水平明显增加(P<0.05),且呈时间依赖性。而不同浓度nanoOA作用后BRL-3A细胞相对活力没有明显改变,ROS水平增加(P<0.05),MDA水平未见明显增加(P>0.05),且除0μg/ml外,与同浓度OA组相比ROS、MDA水平较低(P<0.05)。结论壳聚糖纳米颗粒具有生物安全性,自组装后可改善OA的水溶性,并减少OA对细胞活力和氧化应激指标的影响。

己酮可可碱对叔丁基过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨己酮可可碱(PTX)对叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激和线粒体功能的影响。方法利用t-BHP诱导建立HUVECs损伤模型,PTX预处理筛选合适的干预剂量;Mito Tracker Green、Mito SOX和Rho 123探针分别检测线粒体质量、活性氧(ROS)和膜电位的改变;设置对照组、t-BHP组、PTX预处理组和单纯PTX组,对照组细胞不做处理,t-BHP组细胞用105μmol/L t-BHP处理,单纯PTX组用1 mg/L PTX处理,PTX预处理组用105μmol/L t-BHP和1 mg/L PTX共同处理。采用MTT法检测细胞的活力;试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、还原型谷胱甘肽(GSH)和三磷酸腺苷(ATP)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力;Western blotting法检测细胞中SOD1、SOD2和核转录因子相关因子2(Nrf-2)蛋白表达水平;定磷法检测HUVECs细胞Na^(+),K^(+)-ATPase和Ca^(2+),Mg^(2+)-ATPase的活力。结果霍恩氏法计算并测得HUVECs在t-BHP暴露6 h的半数致死量为105μmol/L;PTX预处理12 h、浓度大于1 mg/L即可升高HUVECs细胞活力(P<0.05);与对照组相比,t-BHP处理后,Mito Tracker Green和Rho 123绿色荧光强度下降,Mito SOX红色荧光强度升高;与t-BHP组相比,PTX预处理组能提高HUVECs细胞活力,降低细胞培养上清中LDH、MDA和GSSG水平,细胞中SOD活力以及Nrf-2蛋白表达水平(P<0.05),升高HUVECs培养上清中GSH水平和GSH/GSSG比值、细胞中SOD1蛋白表达水平、ATP水平以及Na^(+),K^(+)-ATPase和Ca^(2+),Mg^(2+)-ATPase活力(P<0.05)。结论PTX对t-BHP诱导的HUVECs氧化应激和线粒体损伤有保护作用。

糜烂性毒剂氮芥染毒诱导急性肝损伤中自噬的变化及作用

目的建立糜烂性毒剂氮芥(nitrogenmustard,HN2)诱导小鼠急性肝损伤模型和HN2染毒HepG2细胞(人源性肝癌细胞系)损伤模型,探讨自噬在糜烂性毒剂致急性肝损伤中的作用及机制。方法体内模型中,将20只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组和HN2染毒组;HN2染毒组小鼠给予腹腔注射盐酸氮芥(2mg/kg),正常对照组小鼠给予腹腔注射等体积的生理盐水。染毒3天后收集血清和肝组织,测定血清天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)活性,进行肝组织苏木精-伊红(hematoxy-lin-eosin,HE)染色病理检测,电镜观察线粒体等细胞器形态,Westernblot检测肝组织自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值和p62的蛋白表达。体外模型中,HepG2细胞分为正常对照组和HN2染毒组;正常对照组细胞给予含二甲基亚砜(dime-thylsulfoxide,DMSO)(0.1%)的无血清培养基处理36h。HN2染毒组细胞给予盐酸氮芥(8μmol/L)处理36h。采用细胞计数试剂盒(cellcountingkit8,CCK-8)检测细胞活性,单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)探针法检测线粒体自噬改变,自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)检测肝细胞自噬流的改变;在细胞模型中,给予自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)预处理干预,检测细胞活力水平。结果在体内模型中,与正常对照组比较,HN2染毒组小鼠血清ALT和AST活性显著升高(P均<0.05),同时肝组织存在大量炎细胞浸润并伴有肝实质细胞损伤;肝实质细胞内出现大量自噬体,肝组织LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高(P<0.05),同时p62的蛋白表达显著下调(P<0.05)。在体外模型中,与正常对照组相比,HN2染毒组细胞活性显著降低(P<0.05),MDC荧光强度显著升高,自噬体数量增加(P均<0.05)。在HN2染毒细胞模型中,给予自噬激动剂RAPA预处理后细胞活力显著升高(P<0.05),而给予自噬抑制剂3-MA预处理后细胞活力显著降低(P<0.05)。结论HN2染毒能够诱导肝细胞发生自噬,细胞自噬可能是糜烂性中毒的关键性保护性反应,本研究为糜烂性毒剂诱导急性肝损伤的有效防治提供了新方向。

糜烂性毒剂氮芥染毒对肝细胞线粒体结构和功能的影响

目的:探讨体外和体内模型中糜烂性毒剂氮芥(HN2)染毒对肝细胞线粒体结构和功能的影响。方法:体外模型中,HepG2细胞分为正常对照组和HN2染毒组,正常对照组给予含0.1%DMSO的无血清培养基处理36 h,HN2染毒组给予8μmol/L氮芥染毒36 h,分别采用CCK-8法检测细胞活性,JC-1探针法检测线粒体膜电位,NADPH速率法检测细胞匀浆ATP含量,Seahorse细胞能量代谢分析仪检测线粒体功能;体内模型中,20只C57BL/6小鼠分为正常对照组和HN2染毒组,HN2染毒组按2 mg/kg腹腔单次注射盐酸氮芥,正常对照组注射生理盐水,染毒后3 d后采集血清和肝组织,测定血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性,进行肝组织HE染色病理检测和电镜观察,并测定肝组织ATP含量和线粒体酶复合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的活性。结果:在体外模型中,与正常对照组相比,HN2染毒组细胞活性降低了约16.2%(P<0.05),线粒体膜电位下降了约33.2%(P<0.05),线粒体能量代谢明显异常。在体内模型中,与正常对照组比较,HN2染毒后,血清ALT和AST活性显著升高(P<0.05),同时肝组织存在大量炎症细胞浸润并伴有肝实质细胞损伤,肝细胞内线粒体形态发生显著异常,表现为数量增多、体积缩小、线粒体嵴缺失或断裂,线粒体酶复合体Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的活性均显著降低(P<0.05)。结论:HN2染毒能够导致肝细胞发生线粒体结构损伤和功能异常,线粒体可能是HN2诱导肝损伤的主要毒作用靶点之一,本研究结果为糜烂性毒剂诱导急性肝损伤的防治策略提供了新思路。