抗HBs Ag单链Fab抗体基因酵母表达载体的构建

采用重叠PCR技术 ,以抗乙肝表面抗原 (HBsAg)IgG铰链区基因为Linker将Fab抗体基因的重链和轻链连接起来 ,构成单链Fab基因。通过测序鉴定 ,克隆的单链Fab基因与理论上的完全一致 ,并成功构建含完整单链Fab基因的毕赤酵母 (P pastoris)表达载体。

人源抗HBsAg单链抗体与干扰素嵌合基因的构建及表达

采用重叠PCR技术 ,将人源性抗HBsAg单链抗体基因与干扰素 γ 基因用柔性肽段碱基连接成单一基因 .序列测定结果表明 ,克隆的基因与理论上的一致 ,并将此基因成功构建到酵母表达载体pPICZαA上 ,进而转化到巴斯德毕赤酵母 (PichiaPastoris)X33中 .筛选出的菌落经甲醇诱导培养 ,对上清液进行SDS PAGE和WESTERNBLOT分析 ,在 4 20 0 0处可见蛋白表达带 。

基因工程人抗体Fab片段的纯化及鉴定

目的 通过亲和层析的方法纯化基因工程人抗体Fab(Fragment,antigenbinding)片段。方法 对可以表达人抗体Fab的菌种进行诱导 ,冻融裂菌离心收集上清 ,进行亲和层析并对纯化前后的样品进行电泳分析及Westernblot检测。结果 SDS -PAGE电泳显示纯化品在还原、非还原条件下均为单一条带。Westernblot分析层析前抗体Fab片段还原的分子量在 2 .4× 10 4 左右 ,非还原的分子量约为 4.8× 10 4 ,而经过亲和层析后 ,在凝胶电泳上纯化品在还原、非还原条件下在相应位置上均显示单一蛋白带。结论 我们可以经过亲和层析 。

乳猪皮生物敷料对创面愈合的影响

目的:探讨乳猪皮生物敷料促进创面愈合的机理。方法:用凡士林纱布做对照,将乳猪皮生物敷料覆盖猪皮肤缺损创面,观察创面面积、愈合时间、炎性反应及肉芽生长等组织学改变。结果:乳猪皮生物敷料较对照组凡士林纱布能加速创面愈合(P<0.01),减少炎性细胞浸润和肉芽生长。结论:乳猪皮生物敷料促进创面愈合并提高愈合的质量,并可在常温下较长时间保存,是创面修复的一种较理想的生物敷料。

细胞凋亡与肝胆疾病

细胞凋亡与肝胆疾病刘树人刘定国陆汉明细胞凋亡是细胞死亡的一种方式，其功能是清除组织器官中受损的、衰老的，或者是不需要的细胞，而不破坏细胞生存的微环境。细胞凋亡是一种生理性调节过程，与有丝分裂引起的细胞增生、器官肥大不同，凋亡是引起细胞的减少，组织器官...

人肝再生增强因子的克隆及表达

根据同源克隆的原则，依照大鼠ALRcDNA编码区两端核苷酸序列合成一对引物，以人胎肝细胞mRNA的RT产物为模板扩增出一条380bpcDNA片段，测序结果表明与大鼠ALR有85％同源性，将人ALRcDNA插入PBV220质粒转化E．coliJM109感受态细胞，筛选到的阳性克隆经温度诱导后，SDS-PAGE结果表明目的蛋白含量占菌体总蛋白的25％左右。

HBc颗粒样呈现载体研究进展

HBc核壳是由240或180个HBc单体组成的对称性颗粒,免疫原性强,是机体CTL识别的主要靶抗原之一,且具有高表达率、高效装配的特点,作为颗粒样呈现载体能于颗粒表面呈现融合抗原肽,维持天然构象,并增强其免疫原性,在HIV、HBV、HCV、疟原虫等疫苗研究中得到广泛研究与应用,是具有巨大研究潜力和应用价值的疫苗载体,本文就HBc核壳结构特点及其作为颗粒样免疫载体的应用作一综述。

人肝再生增强因子的分子克隆及生物学活性研究

在众多参与肝细胞再生调控的细胞因子中,如TGF、EGF及大分子HGF等都缺乏器官特异性。

鸡胚培养与嵌合体鸡的制备

目的 探讨自X期鸡胚培养方法 ,制备嵌合体鸡。方法 分离供体麻鸡种蛋的胚盘细胞 ,注入受体来航鸡种蛋胚盘 ,然后用以下两种方法培养鸡胚 :①钝端开窗法 ,沿鸡蛋气室边缘开口 ,内壳膜开小孔 ,注射胚盘细胞后再封口 ,置孵化器内 ,温度 38℃ ,翻蛋角 90° ;②两次倒蛋法 ,胚盘细胞注入受体蛋后 ,倒入代用蛋壳Ⅰ ,置孵化器内 ,温度 38℃ ,翻蛋角 90° ,72h后 ,倒入代用蛋壳Ⅱ ,改翻蛋角 30°。结果 用钝端开窗法注射 83只种蛋 ,出雏 35只 (4 2 2 % ) ,表型嵌合体 7只 ,3只存活 ;用两次倒蛋法 ,注射 72只种蛋 ,出雏 10只 (13 9% ) ,表型嵌合体 5只 ,1只存活。结论 钝端开窗法较经典的两次倒蛋法出雏率明显提高 ,用该方法制备嵌合体鸡更为方便可行。

肝脏细胞胶原合成及其Ⅰ型胶原mRNA的稳定性

目的：为了明确贮脂细胞（ＦａｔＳｔｏｒｉｎｇＣｅｌｌ，ＦＳＣ）和肝细胞（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ，ＨＣ）在肝纤维化胶原合成中的作用。方法：本文在分离培养大鼠ＦＳＣ和ＨＣ的基础上，用＾３Ｈ－Ｐｒｏｌｉｎｅ掺入结合胶原酶消化法和定量斑点杂交法，分析了体外培养的ＦＳＣ和ＨＣ胶原和非胶原蛋白的合成以及Ｉ型前胶原ｍＲＮＡ的稳定性。结果：发现ＦＳＣ合成胶原蛋白的能力较ＨＣ强。

体外表达人重组肝细胞增强因子rhALR的分离纯化

目的：对大肠杆菌表达的人源重组肝细胞生长肽进行分离纯化获得目的蛋白rhALR。方法：其表达产物在大肠杆菌中以不溶性包含体形式存在，经过超声破菌、包含体抽提、洗涤处理、使包含体纯度达75％以上，用8mol/L尿素变性溶解包含体沉淀后上清直接稀释复性，再经浓缩、透析、离子交换凝胶过滤等系列纯化步骤。结果：纯化后目的蛋白纯度达95％以上。回收率达20％。

人乳头状瘤病毒感染及感染拷贝数与食管癌的关系

人乳头状瘤病毒感染及感染拷贝数与食管癌的关系吕丽春沈忠英游绍进沈健蔡唯佳一、材料和方法收集１９９４年～１９９５年我院附属医院外科手术切除、病理确诊的新鲜食管癌标本５５例，每例分别取癌组织、癌旁粘膜和远端切缘粘膜３部分，经ＯＣＴ包埋在一起，常规冰冻切片...

贮脂细胞和肝细胞胶原合成能力的比较

目的为明确肝纤维化过程中细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）的细胞来源以及贮脂细胞（ｆａｔｓｔｏｒｉｎｇｃｅｌ，ＦＳＣ）和肝细胞（ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ，ＨＣ）在肝纤维化胶原合成中的作用．方法用胶原酶和链霉蛋白酶Ｅ消化大鼠肝脏，结合密度梯度离心法分离培养大鼠ＨＣ和ＦＳＣ，在此基础上，用３Ｈ脯氨酸掺入结合胶原酶消化法和斑点杂交法，观察ＨＣ和ＦＳＣ胶原的合成及Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ型前胶原基因的表达．结果发现体外培养的ＦＳＣ合成胶原的能力较ＨＣ强，约为ＨＣ的两倍（Ｐ＜００５）；ＦＳＣ胶原基因表达的水平同样较ＨＣ高（Ｐ＜００５）．结论ＦＳＣ在ＥＣＭ胶原合成中起主要作用，但ＨＣ的作用也不容忽视．

pHGF对Con A诱导肝损伤小鼠的肝细胞Fas抗原表达的影响

目的:探讨pHGF治疗重症肝炎的作用机理。方法:选用Con A诱导肝损伤的小鼠模型,观察pHGF对肝细胞Fas抗原表达的影响。结果:正常对照未见Fas抗原阳性肝细胞;Con A诱导损伤组见大量表达Fas抗原的干细胞;pHGF处理组Fas抗原阳性细胞表达明显减少。结论:pHGF可能通过抑制肝细胞Fas抗原表达来阻断肝细胞的凋亡。

鼠人肝再生增强因子的cDNA克隆及序列分析

目的克隆大鼠及人肝再生增强因子的ｃＤＮＡ．方法按文献报道大鼠及人肝再生增强因子核苷酸序列设计合成引物．利用ｍＲＮＡ抽提试剂盒分别从乳鼠及人胎肝组织中提取ｍＲＮＡ，再逆转录聚合酶链反应扩增出需要的ｃＤＮＡ片段，经克隆入ｐＧＥＭＴ质粒后以Ｔ７ＤＮＡ聚合酶序列分析试剂盒测定ｃＤＮＡ的序列．结果经ＲＴＰＣＲ反应顺利扩增到４７０ｂｐ的鼠肝再生增加因子ｃＤＮＡ及３８４ｂｐ的人肝再生增强因子．

国产胸腺肽对ConA诱导的肝细胞凋亡的影响

采用ConA诱导的实验性小鼠肝损伤模型观察国产大剂量胸腺肽对小鼠肝脏的保护作用及对肝细胞凋亡的影响.结果表明:肝损害组与正常组ALT和TNF-α测定值有显著性差异,光镜检查肝损害组亦有严重的肝损伤;用大剂量胸腺肽腹腔注射一周后可明显减弱ConA对肝组织的损伤;对小鼠肝组织Fas抗原阳性细胞情况研究表明,肝损害组Fas抗原阳性细胞较为普遍,正常组无阳性细胞,胸腺肽组阳性细胞明显减弱.本实验结果提示大剂量胸腺肽对ConA诱导的肝损伤有保护作用;ConA可诱导肝细胞凋亡,大剂量胸腺肽对凋亡有抑制作用.