重组乙肝表面抗原真核表达质粒pVAX-S_2S的构建及DNA免疫

目的 :为探索更安全的乙型肝炎病毒 (HBV)DNA疫苗 ,构建编码乙肝表面抗原中蛋白的卡那霉素抗性真核表达质粒 ,并观察其诱导BALB c小鼠产生体液免疫应答情况。方法 :采用限制性内切酶从重组的真核表达质粒pcDNA S2 S中分离出乙肝表面抗原中蛋白 (preS2 +S)基因片段 ,将其亚克隆于pVAX1真核表达载体 ,酶切鉴定 ,按不同剂量一次性肌内注射免疫小鼠 ,ELISA法检测小鼠血清抗 HBs。结果 :酶切鉴定重组质粒pVAX S2 S为正向插入的阳性克隆。HBVDNA疫苗 (pVAX S2 S)高 (10 0 μg 只 )、中 (5 0 μg 只 )、低 (10 μg 只 )三组剂量一次性免疫健康BALB c小鼠 ,均能在 2w诱导抗 HBs产生 ,抗体效价随时间延长而增长。血清抗体水平比较 ,高剂量组 (97 83± 38 78)mU ml较中剂量组 (45 13± 2 1 12 )mU ml、低剂量组 (19 74±11 92 )mU ml差异均具显著性 (P <0 0 5 ) ,以后的 4,8w高、中剂量组间差别缩小 ,但两者较低剂量组差异均具显著性 (P <0 0 5 )和非常显著性 (P <0 0 1)。结论 :卡那霉素抗性的重组质粒pVAX S2 S能有效诱导正常小鼠产生体液免疫应答。

重组乙肝表面抗原真核表达质粒的构建及表达

采用限制性内切酶从重组的真核表达质粒pcDNA S2 S中分离出经过测序鉴定的乙肝表面抗原中蛋白 (preS2 +S)基因片段 ,将其亚克隆于pVAX1真核表达载体 ,构建编码乙肝表面抗原中蛋白的卡那霉素抗性真核表达质粒 pVAX S2 S ,酶切鉴定后将重组质粒体外转染COS7细胞 ,ELISA法检测上清液中的HBsAg呈阳性 ,说明重组质粒pVAX S2 S在体外能够有效表达HBsAg。