肝细胞提取物对癌细胞凋亡相关基因表达的影响

<正>研究资料表明,肝细胞提取物(hepatocyteextraction)在诱导BEL-7402细胞凋亡的同时能促进p53和Fas基因表达,而对bcl-2和C-myc表达具有一定的抑制作用.本研究采用免疫组化技术,进一步观察纯化的肝提取肽(S4)对4种肝癌和4种非肝癌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响.1 材料与方法1.1 肝细胞提取物和S4(subfraction 4)的制备参见文献[2].1.2 细胞系及培养条件SMMC 7721、QGY-7703人肝癌细胞、HCT-8结肠癌细胞、GLC-82低分化肺腺癌细胞引自中国科学院细胞所.BEL-7402人肝癌细胞引自北京中日友好医院中西医结合研究所.Hepe小鼠肝癌细胞、CNE-2鼻咽癌细胞引自中山医科大学.SGC-7901胃腺癌细胞由第四军医大学生化室惠赠.实验时将对数生长期细胞用0.25%胰酶加0.025%EDTA消化,配成(2.5～5)×10~4/ml细胞悬液,加入内置盖玻片的24孔Costar培养板中,每孔0,5ml.37℃,5%CO_2条件下孵育24小时后,置4℃水浴1小时后立即升到37℃,将S4以不同浓度加入培养孔,每孔0.5ml,继续孵育.洗涤固定细胞,分别做DNA原位末端标记检测和癌基因免疫组化测定.根据预实验结果,选定S4为5μg/ml,作用48小时为统一条件,以利于结果的可比性及准确性.