白介素-1β诱导和激活许旺细胞的实验研究

目的研究白介素-1β对许旺细胞的诱导和激活及其最佳作用浓度.方法取3～4d SD乳鼠坐骨神经,纯化培养许旺细胞,A组加入含10%胎牛血清的DMEM/F 12培养基,B组加入自体神经匀浆激活的巨噬细胞条件培养基;C组加入细胞培养级生物制剂白介素-1β(2.0 ng/ml),分别培养许旺细胞6 d.倒置显微镜观察许旺细胞的形态,抗S-100蛋白免疫组化染色鉴定许旺细胞,MTT法筛选出白介素-1β促许旺细胞分裂增殖作用的最佳浓度,methyl-3H掺入法检测A、B、C组对许旺细胞的促增殖情况,ELISA法检测A、B、C组对许旺细胞NGF分泌量影响.结果 B、C组均比A组更能促进许旺细胞发生分裂增殖并高表达NGF,但以C组的作用最强.结论许旺细胞自身能够表达NGF,而2.0 ng/ml白介素-1β能更好的促进许旺细胞的分裂增殖促进对NGF的高表达.

成纤维细胞条件培养基对雪旺细胞生长和增殖的影响

目的:观察成纤维细胞条件培养基对雪旺细胞增殖分化的影响,探讨两者之间的协同作用,为组织工程化神经桥接体的构建奠定实践基础。方法:取20只出生四五天的SD乳鼠的臂丛和坐骨神经,运用双酶结合单酶消化法培养雪旺细胞和成纤维细胞,纯化和培养雪旺细胞并制备两种条件培养基:A组:成纤维细胞+DMEM/F12;B组:成纤维细胞+雪旺细胞+DMEM/F12;C组:DMEM/F12(对照组)。将A,B,C3组分别加入种植有纯化雪旺细胞的96孔板中,MTT检测雪旺细胞增殖情况,S-100蛋白免疫组化染色鉴定雪旺细胞。结果:B组对雪旺细胞的增殖和分化有明显的促进作用;A组次之;C组最差(P<0.001)。结论:成纤维细胞条件培养基可促进雪旺细胞的增殖和分化。

平行结构支架材料对大鼠成肌细胞α-肌动蛋白的影响

目的:根据大鼠成肌细胞骨骼肌α-肌动蛋白mRNA的表达变化,初步探讨借助支架材料的有序排列构建具有理想方向性组织工程化骨骼肌的可行性。方法:将医用可吸收缝合线平行折叠并制备成类圆柱体状,与大鼠成肌细胞L6体外复合培养。以18sRNA为内参照,运用半定量RT-PCR检测大鼠成肌细胞骨骼肌α-肌动蛋白mRNA在体外培养早期的变化。结果:随着体外培养时间的延长,大鼠骨骼肌α-肌动蛋白的mRNA表达水平逐渐升高,并于体外培养第4d,维持在相对稳定的水平。结论:大鼠成肌细胞与具有平行结构支架材料体外复合培养早期,骨骼肌α-肌动蛋白的基因表达与骨骼肌再生有一定程度的吻合。

β-淀粉样蛋白(1-42)对PC12细胞的氧化损伤

目的:探讨Aβ(1-42)对PC12细胞的氧化损伤作用。方法:利用不同浓度的Aβ(1-42)处理PC12细胞,采用MTT法、抗氧化酶活性测定以及RT-PCR分析观察Aβ(1-42)对PC12细胞的影响,分析Aβ(1-42)与SeGPx、MnSOD基因表达的关系。结果:随着Aβ(1-42)浓度的增加,SeGPx的表达不断下降;0·1μmol/L Aβ(1-42)能诱导MnSOD的活性增加,Aβ(1-42)对PC12的损伤作用能被acetovanilon(一种抑制内源性自由基产生的化合物)所抑制。结论:Aβ(1-42)能介导PC12细胞内源性自由基的产生增多。