分子生物学技术诊断病毒性肝炎进展

分子生物学技术为诊断慢性病毒性肝炎提供了一种强有力的手段。可以利用它们检测血液及血液制品病毒分子 ,了解病毒活动感染情况 ,为临床的准确诊断、合理用药、判定预后提供切实可信的依据。

非缺失型α-地中海贫血分子缺陷的初步研究

α-地中海贫血(简称α-地贫)是以α-珠蛋白链合成缺如(α~0-地贫)或减少(α^+-地贫)为特征,具有高度异质性的单基因遗传病。α-地贫分子缺陷有基因的大片段缺失和非缺失型突变两大类。α-珠蛋白基因缺失是导致α-地贫的主要原因。非缺失型突变是指α-珠蛋白基因的点突变或少数几个碱基的改变,主要发生于α2珠蛋白基因。该类突变导致的α-地贫称为非缺失型α-地贫。

生物芯片在功能基因组学研究中的应用进展

目前 ,结构基因组学研究方兴未艾 ,功能基因组学研究又成为生命科学新的研究热点。作为世纪之交发展起来的一项集分子生物学、电子学、信息学为一身的生物高技术—生物芯片技术已日益成熟和完善 ,且其应用领域不断拓展 ,已成为后基因组时代功能基因组学研究中最重要的技术之一。本文就生物芯片在突变及多态性检测、基因表态及调控研究。

霍乱弧菌的致病性与流行性研究进展

综述了近年来霍乱弧菌的致病性和流行性的研究进展 ,并讨论了流行性和致病性的关系 .编码霍乱毒素CT的基因ctxAB并不是霍乱弧菌基因组自身的成分 ,而是CTXΦ噬菌体基因组的一部分 .CTXΦ能特异性地感染并整合至霍乱弧菌的基因组 ,成为CTX原噬菌体 ;携带有CTX原噬菌体的霍乱弧菌在环境因素的诱导下 ,也能向外界分泌CTXΦ噬菌体 .RS1基因元件与CTX基因元件在染色体位置上紧邻 ,它们在功能上也紧密相关 ,RS1元件能利用CTXΦ的基因形成一个丝状噬菌体RS1Φ ,并能向细胞外分泌 ,进行水平传播 ;VPI来源于VPIΦ ,VPIΦ能在霍乱弧菌的菌株之间传播 ;VPI是霍乱弧菌获得CTX基因元件的桥梁 .最近 ,又发现了两个与霍乱大流行相关的两个基因区域 ,VSP Ⅰ和VSP Ⅱ .

人乳头瘤病毒(HPV)基因芯片的研究

探讨将基因芯片与限制性显示技术相结合对HPV进行基因检测和分型的方法。分离HPV6,1 1 ,1 6和 1 8型的基因片段作为探针 ,纯化后应用PixSys 5 5 0 0点样仪将其打印在氨基包被的玻片上制作HPV基因芯片 ,对HPV样品进行荧光标记后与芯片杂交 ,经清洗和干燥后对芯片进行扫描和结果分析。对HPV基因检测芯片的制作与检测的实验条件进行了初步研究 ,并对应用HPV基因芯片进行分型做了初步探讨。建立的检测芯片实验方法可行 。

DNA芯片技术研究进展

DNA芯片技术是近年来发展迅速的生物高技术 .其基本过程是采用寡核苷酸原位合成或显微打印手段 ,将大量探针片段有序地固化于支持物如硅芯片的表面 ,然后与扩增、标记的生物样品杂交 ,通过对杂交信号的检测分析 ,即可得出样品的遗传信息 .该技术不仅可以对遗传信息进行定性、定量分析 ,而且扩展到基因组研究和基因诊断等方面的应用 .尽管目前在硬件和软件上还面临一些困难 ,但其发展和应用的前景广阔 .

DNA芯片技术及其在药物研究中的应用

DNA芯片技术是近年来出现的分子生物学与微电子技术相结合的 DNA分析检测技术 ,因其突出特点在于高度并行性、高通量、微型化和自动化 ,从而成为后基因组时代基因功能分析的最重要技术之一。该技术不仅应用于新基因的发现和基因表达的研究 ,还被用于疾病诊断、药物筛选和药理学研究 ,并将在药物基因组学的研究中得到广泛应用。

基因表达谱芯片杂交影响因素的初步研究

通过对K562细胞基因表达谱芯片杂交影响因素的研究表明,用限制性显示技术[1]制备的cDNA探针长度较均一,适合基因芯片杂交;在42℃条件下含甲酰胺的杂交液中杂交16～20h,可保证样品的有效杂交,并表现出很好的杂交特异性;用RD-PCR或线性PCR对少量样品进行扩增,并用荧光(Cy3或Cy5)标记的通用引物对样品进行标记,可提高芯片检测的灵敏度;一次杂交反应总RNA的用量仅需0.5～10μg,在每cm2约含1000～1500个点的阵列中杂交时,标记样品用量1～2μg为宜;用PCR产物纯化柱对荧光标记产物进行纯化,可大大减小背景荧光,提高信噪比;同一批芯片经同一样品杂交结果的重复性很好,相关系数高达97.8%.

DNA芯片技术与基因表达研究

随着基因组计划的顺利实施 ,大量的生物信息被解析 ,基因表达及基因功能的研究将成为生命科学研究的热点 .DNA芯片技术是近年来出现的分子生物学与微电子技术相结合的最新 DNA分析检测技术 .该技术将在生命科学与信息科学之间架起一道桥梁 ,因而成为后基因组时代基因功能分析的最重要的技术之一 .目前 DNA芯片技术已在基因表达等研究中得到广泛的应用 .

精子细胞中基因表达谱的研究

目的研究成熟精子细胞中的基因表达。方法采用限制性显示PCR(RD-PCR)获得大量正常和异常精子细胞中基因表达序列标签(EST)并以表达谱图的方式显示出来。结果通过RD-PCR技术得到大量正常精子细胞和异常精子细胞的EST及部分差异表达EST。结论RD-PCR技术既能针对已知基因又能针对未知基因,快速收集大量长度适宜、大小均一、适于芯片制备的EST,较通过cDNA文库等方法得到靶基因片段具有独特的优势。关键词:精子;基因表达谱;

基因芯片技术检测丁型肝炎病毒的研究

目的制备检测丁型肝炎病毒(HDV) 基因芯片。方法针对HDV基因保守区域设计多对PCR引物。用芯片点样仪将PCR产物点到玻片上制成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术,样品标记后进行杂交。结果运用PCR技术得到多个HDV特异性基因片段,序列分析表明,所扩增的片段均属于HDV特异基因。杂交结果显示,样品和HDV诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳。结论用基因芯片检测HDV具有敏感、高效、检测结果可靠的优点,有着较大的应用前景。

登革病毒cDNA的生物信息学分析及其Oligo探针设计

目的设计登革病毒诊断芯片的Oligo探针。方法利用BLAST软件对4型登革病毒的cDNA序列进行序列比对,得到有意义的特异序列;然后用生物学软件Oligo6.0设计特异性高、Tm值相近、长度均一的Oligo探针。结果获得48条70-mer Oligo探针,用于打印成DNA芯片,进行登革病毒的检测。结论利用BLAST系统和生物学软件Oligo6.0设计登革病毒诊断芯片的探针,是一种简便可行、有效的方法。

乙型肝炎、丁型肝炎病毒联合诊断芯片制备的初步研究

目的 制备联合检测乙型肝炎病毒 (HBV)、丁型肝炎病毒 (HDV)基因芯片并进行杂交验证。方法 利用PrimerPremier5 0分别针对HBV、HDV基因保守区域设计多对PCR引物 ,扩增后的产物克隆至pMD18 T载体 ,提取阳性克隆质粒进行测序分析鉴定。用PixSys 5 5 0 0芯片打印仪将PCR产物打印在氨基修饰的玻片上制备成检测芯片。样品荧光标记采用限制性显示 (RD)技术 ,标记后进行杂交验证分析。结果 序列分析表明 ,运用PCR技术得到的多个基因片段均属于HBV、HDV特异基因。杂交结果显示 ,敏感性、特异性、重复性等指标均佳。结论 利用PCR扩增产物作为探针制备HBV、HDV联合诊断芯片是一种快速、简便的实用方法 ,有着广阔的应用前景 ;利用RD技术标记样品可提高多种肝炎病毒混合检测的敏感性。

用基因芯片研究苦丁茶甙对K562细胞基因表达的影响

以人红白血病K5 6 2细胞株为材料 ,应用基因芯片技术研究苦丁茶甙对人红白血病K5 6 2细胞作用前后基因表达的差异 ,以诱导分化药物羟基脲处理作为正对照 ,分别提取药物处理前后细胞RNA进行逆转录cDNA ,使获得的cDNA分别标记上Cy3和Cy5两种荧光物质 ;然后与由 16 32条cDNA片段制作的基因表达谱芯片杂交 ,经扫描及对获得的数据用相关软件分析 ,确定K5 6 2细胞经苦丁茶甙处理前后差异表达基因 4 8条 ,有 4 1条与羟基脲处理相同 ,其中上调表达的基因有 32条 ,下调表达的基因有 16条 .

人胎盘基因表达谱芯片的初步研究

目的 制备人胎盘基因表达谱芯片,前用于基因差异表达分析。方法用基因芯片点样仪将胎盘基因文库探针打印在氨基包被的玻片上制备表达谱芯片。分别提取对照组三氧化二砷处理的K562细胞总RNA,纯化mRNA后反转录成cDNA。再以限制性显示技术进行荧光标记,将两组荧光标记的样品混合后与芯片进行杂交。杂交后清洗芯片,干燥后对芯片进行扫描,分析杂交结果。结果 建立了较可靠的制备与检测基基表达芯片的方法,并筛选出45个差异表达基因片段。结论 制备的人胎盘基因表达谱芯片可有效地应用于基因的差异表达分析。