应用错配PCR和限制性片段长度多态性分析技术检测HBV YMDD变异株

目的 建立简便易行的检测乙型肝炎病毒 (HBV)多聚酶基因 (P基因 )上YMDD变异株的方法 ,评价运用拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者对此变异的影响。方法 采用套式 /错配聚合酶链反应 (PCR)结合限制性片段长度多态性 (RFLP)分析技术对 10 8例治疗前HBVDNA(PCR)阳性正在拉米夫定治疗中的慢性乙型肝炎患者的HBVYMDD变异情况进行检测。结果 运用上述技术能有效区分HBVYMDD野生株和变异株 ;上述 10 8例患者经拉米夫定治疗后 ,HBVDNA阴转者 63例 (5 8 3 % ) ,HBVYMDD野生株和变异株分别为 2 3例 (2 1 3 % )和 2 2例 (2 0 4% )。结论 建立的套式 /错配PCR -RFLP分析技术可用于HBVYMDD变异株的临床监测 ;

拉米夫定对慢性乙型肝炎患者CTL活性的影响

目的探讨拉米夫定治疗是否会影响慢性乙型肝炎患者 (CHB) HBV特异性细胞毒 T淋巴细胞 (CTL)活性。方法选择 34例 HL A- A2 +CHB患者 ,其中 19例患者行干扰素 - α治疗 ,另 15例患者用拉米夫定治疗。在治疗前和治疗后 1、3、6个月后分离外周血单核细胞 (PBMC) ,经体外诱导扩增 ,以 Hep G2 .2 .15细胞和 Hep G2细胞作靶细胞 ,乳酸脱氢酶释放法检测其细胞毒活性。结果在接受干扰素 - α或拉米夫定治疗后 ,CHB患者 HBV特异性 CTL 活性均能得到不同程度的恢复。两种治疗方法比较显示 ,干扰素 - α治疗组 CTL 活性增强持续的时间较使用拉米夫定的治疗组长。结论拉米夫定治疗能短暂地增强 CHB患者 HBV特异性 CTL 活性。

乙型肝炎病毒宫内传播的分型

目的研究乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)分型在乙肝病毒宫内传播的特点。方法对广州市三家医院的135例HBsAg孕产妇及其139例新生儿外周血及部分婴儿随访标本,巢式PCR扩增HBVS区基因部分片段,限制性核酸内切酶酶切PCR产物,比较酶切片段长度多态性(RFLP),以确定HBV基因型。直接测序并与Genebank相应序列比较。结果7例新生儿发生HBV的宫内传播,阳性率为7/139(5.0%),PCR-RFLP方法检测到B、C型各3/7例,D基因型1/7例。宫内传播过程中母婴HBV的基因型保持一致。S基因直接分型与上述结果一致。该7组母婴均无乙肝临床症状与体征。结论广州地区母婴宫内传播HBV以C、B基因型为主,宫内传播过程中及免疫压力下HBV-DNA发生碱基突变,但未发生在限制性内切酶的酶切位点上,尚不能由HBV基因分型对HBV感染儿的预后进行推测。

肺结核患者外周血IFN-γ及IL-4的表达

目的 了解肺结核病人外周血单个核细胞 (PBMC)中 CD4 +T细胞内干扰素 - γ(IFN- γ)和白介素 - 4(IL- 4 )表达情况 ,以测定 Th1/ Th2细胞的百分数并探讨其在肺结核感染中的作用。材料与方法 10 1例肺结核患者及健康对照者 2 9例 ,采用流式细胞仪检测其 CD4 +T细胞内 IFN-γ和 IL - 4表达。结果 正常对照组 Th1、Th2细胞 ,性别比较 p>0 .0 5。 IFN-γ水平随病程的延长而相应提高 ,以 6 - 12个月期间为最高 (2 1.4± 11.71) ,超过 12个月逐渐稳定 ,与病程小于 1月组比较 ,差异有显著性意义 (P<0 .0 5 )。结论 Th1水平升高可能有利于病情的愈合。

大蒜注射液治疗新型隐球菌性脑膜炎及肺念珠菌病

目的 :探讨大蒜注射液治疗新型隐球菌性脑膜炎及肺念珠菌病的临床疗效。方法 :2 44例患者随机分为治疗组 12 1例 ,其中新型隐球菌性脑膜炎 61例 ,肺念珠菌病 60例 ;对照组 12 3例 ,其中新型隐球菌脑膜炎 62例 ,肺念珠菌病 61例。治疗组以大蒜注射液 40～ 80mL加入 5 %～ 10 %葡萄糖注射液 5 0 0～ 10 0 0mL中静脉滴注 ,qd ;对照组新型隐球菌脑膜炎采用两性霉素B 1mg·kg 1 静脉滴注或 0 .1～ 0 .5mg鞘内给药 ,肺念珠菌病采用氟康唑片 2 0 0mg ,po ,qd。以上药物疗程均为 10～ 2 0d。结果 :治疗组新型隐球菌性脑膜炎治愈率 67.2 % ,总有效率 95 .1% ;对照组治愈率 69.4% ,总有效率 93 .6% (均P >0 .0 5 ) ;治疗组肺念珠菌病治愈率 78.3 % ,总有效率 93 .3 % ,氟康唑片对照组治愈率 75 .4% ,总有效率78.7%。治疗组总有效率高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :大蒜注射液具有抑制、杀灭真菌作用 ,治疗新型隐球菌性脑膜炎与两性霉素B注射剂疗效相当 ;治疗肺念珠菌病疗效优于氟康唑片。大蒜注射液不良反应少 。

人类干细胞研究中的伦理问题与对策

目的 探讨人类干细胞研究中的若干伦理问题及其应采取的措施。方法 阐述干细胞的基本类型 ,干细胞研究中的伦理问题及其产生原因 ,各国政府和科学家所持的态度。结果 应严格限制以克隆人为目的的干细胞研究 ;应积极支持科学家开展治疗性克隆研究 ;应积极采取措施降低伦理问题产生 ,增加干细胞研究的安全性。结论 在提高科研水平、健全伦理评估和监控机制的前提下 。

慢性乙、丙型肝炎的Th1/Th2应答研究进展

Th1／Th2免疫应答是当前免疫学研究的热点之一，其在慢性乙、丙型肝炎发病机理中的作用日益受到人们的重视。研究表明：Th1／Th2细胞失衡与乙、丙型肝炎的慢性化密切相关。病毒抗原的特异Th1细胞占优势，倾向于发生急性或自限性的感染，Th2细胞占优势则发生持续性的感染。本文拟就此方面的研究进展予以综述。

咽拭子和痰标本中SARS冠状病毒核酸检测

目的 建立SARS冠状病毒的RT—PCR核酸检测方法。方法 合成针对SARS冠状病毒特异性引物，从SARS病人及疑似病人标本中提取RNA，经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析，并将序列与SARS冠状病毒和其它已知冠状病毒进行同源性分析。结果 从SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到多例RT—PCR阳性片段，其中8个片段经克隆和DNA序列分析证实为SARS冠状病毒序列(同源性100％)，而所有参照标本RT—PCR均为阴性。结论 该方法可用于SARS冠状病毒的RT—PCR核酸检测。

慢性丙型肝炎患者的血清HCV基因型和RNA含量与ALT和AST水平不相关

目的研究HCV基因型、RNA含量与肝损伤指标的相关性。方法对来自14家医院的208例慢性丙型肝炎患者的血清进行ALT、AST检测，采用罗氏公司的Cobas Amplicor HCV Monitor Test version2．0（v2．0）试剂进行HCV RNA定量和Simmons酶切分型方法进行HCV基因分型检测，分析HCV基因型、HCV RNA含量与ALT、AST水平及AST／ALT比值的相关性。结果本研究的208例慢性丙型肝炎患者中，基础HCV RNA含量与ALT、AST水平及AST／ALT比值没有相关性（r值分别为0．093、0．092、0．009，均P〉0．05），高病毒含量组（≥8．5×10^5IU／ml）与低病毒含量组（〈8．5×10^5IU／ml）比较ALT、AST水平及AST／ALT比值的差异无统计学意义（P=0．101、0．052、0．746）；HCV基因1型与非基因1型之间ALT、AST、AST／ALT的差异无统计学意义（P=0．406、0．461、0．528），HCV基因1型与非基因1型之间RNA含量差异无统计学意义（P〉0．05）；治疗结束时病毒应答组和非应答组比较的ALT、AST水平及AST／ALT比值的差异无统计学意义（P=0．443、0．641、0．942），随访结束时，病毒应答组和非应答组的ALT、AST水平及AST／ALT比值的差异无统计学意义（P=0．201、0．411、0．76）。结论慢性丙型肝炎患者的HCV基因型和RNA病毒含量与肝损伤指标没有相关性。

HBV基因型与慢性乙型肝炎疾病谱的关系

目的 探讨乙型肝炎病毒 (HBV)基因型与慢性乙型肝炎疾病谱相关性。方法 用S基因聚合酶链式反应 -限制片段长度多态性 (PCR -RFLP)的基因型分型方法对广东地区HBV感染者中无症状携带者 (AsC)组 80例和肝硬化组 (LC) 12 0例血清标本分型 ,比较两组基因型分布的异同。结果 基因型在AsC组分布 :B型 45 0 % ( 3 7/ 80 ) ;C型 3 3 75 % ( 2 6/ 80 ) ;D基因型 2 1 2 5 % ( 17/80 ) ;LC组HBV基因型分布B型 3 2 5 % ( 3 9/ 12 0 ) ;C型 65 8% ( 79/ 12 0 ) ;D基因型 1 6% ( 2 / 12 0 )。广州地区未发现A、E和F基因型 ,基因型在两组中的分布均与e抗原状态无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;ASC与LC组两组间基因型的分布有显著性差异 ( χ2 =3 1 92 4,P=0 0 0 0 )。结论 可初步认为广东地区HBV感染者以B和C型为优势基因型 ,AsC组中以B型为优势基因型 ,感染HBVD基因型病情轻 ,感染HBVC基因型病情更易于加重。

慢性乙型肝炎肝内炎症与HBV-DNA定量的关系

目的 探讨慢性乙型肝炎肝内炎症与 HBV-DNA定量的关系 ,为临床正确估计肝内炎症提供依据。方法 应用荧光定量PCR法检测 74例慢性乙肝患者血清中 HBV-DNA的含量 ,同时行肝穿刺病理检查。结果 在 HBs Ag阳性患者中 ,HBV-DNA的水平与 Scheuer分级无相关性 ,提示 HBV-DNA的含量与肝内炎症活动程度无关。但是 ,在 HBe Ab阳性患者有相关性 ,HBe Ag阳性者中则无。结论 慢性乙型肝炎患者 ,如果不是在免疫耐受期 ,HBV-DNA复制水平与肝内炎症活动程度是相关的。由于 HBV-DNA复制水平的增高先于 ALT升高 ,检测 HBV-DNA含量可能更有助于选择治疗的时机。

Th细胞分化调节机制研究进展

Th细胞可分化为Th1和Th2细胞亚群 ,分别介导细胞和体液免疫反应。本文从分子水平阐明Th细胞分化的调节机制 ,藉以了解其对许多疾病的治疗及对免疫病理反应干预的重要意义。