结肠腺癌细胞中eIF-4E调节NF-κB表达及对乙酰肝素酶转录表达和活性的影响

背景与目的:近期研究显示,人类肿瘤细胞部分转录因子可能受真核细胞起始因子-4E(eukaryoticinitiationfactor4E,eIF-4E)在翻译水平上的调节,此关键转录因子表达水平的变化可从转录水平改变某些恶性相关基因产物的表达。本研究旨在探讨结肠腺癌LS-174T细胞中eIF-4E对转录因子NF-κB表达和活性的影响,并观察NF-κB活性水平对乙酰肝素酶基因转录的作用。方法:将与eIF-4EmRNA翻译起始区互补的反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)经脂质体包裹后转染人结肠癌细胞LS-174T,以阻抑eIF-4E表达。随之使用Westernblot和电泳迁移改变分析(electrophoreticmobilityshiftassays,EMSA)方法检测NF-κB蛋白表达量及活性水平。通过RT-PCR、Westernblot方法观察乙酰肝素酶转录水平和蛋白表达量的改变;乙酰肝素酶活力采用特异酶活性检测方法,以放射性标记的硫酸乙酰肝素做为底物,凝胶过滤层析分离酶降解产物来分析。结果:针对eIF-4E的20个残基的ASODN经脂质体转染LS-174T细胞后,eIF-4E基因表达在转录和翻译水平都受到显著阻滞。eIF-4E基因阻抑表达引起结肠癌LS-174T细胞NF-κB蛋白表达量及其活性的显著下降;此外,转录因子NF-κB的下调也导致乙酰肝素酶基因的转录表达下降。

结肠腺癌细胞株eIF-4E对NF-κB表达的影响及诱导凋亡机理的探讨

目的 研究真核细胞起始因子 (EukaryoticInitiationFactor 4E ,eIF 4E)对NF κB表达及活性水平的影响 ,并对其阻滞后诱导肿瘤细胞凋亡的途径进行探讨。方法 应用脂质体包裹与eIF 4EmRNA翻译起始点互补的反义寡核苷酸 (asODN) ,处理人大肠腺癌细胞LS 174T。使用Westernblot和RT PCR方法分别检测eIF 4E被阻抑后其转录和翻译水平的改变。EMSA用来比较eIF 4E阻滞前后NF κB活性的改变。采用流式细胞仪检测LS 174T细胞凋亡。结果 eIF 4E被阻抑表达后 ,NF κB蛋白表达和活性水平也有显著下降。伴随eIF 4E表达和NF κB活性水平下降 ,LS 174T细胞的凋亡率显著升高。结论 本试验证明NF κB受eIF 4E的翻译调控 ,eIF 4E的抗凋亡作用部分可能是通过调节NF κB活性来实现的。此结论对于结肠癌试验性和肿瘤临床的基因治疗具有一定意义。

乳糜性腹水

乳糜性腹水是指乳状或奶油状富含甘油三酯的腹腔渗液,系由胸腔和肠道淋巴液进入腹腔所致.乳糜性腹水的临床发生率不高,国外临床观察显示其在住院病例中约占1/20 000.由于进展性心肺疾患、腹部外科手术的增多和肿瘤患者生存期的延长,其发生率逐渐增加.北京协和医院近10年就检出乳糜性腹水22例,远高于过去67年的17例,这也可能与临床医师对其认识的逐步提高有关.

阻抑eIF-4E对大肠腺癌LS-174T细胞乙酰肝素酶mRNA及其翻译表达水平的影响

目的 :确定阻抑结肠癌LS - 174T细胞中过量表达的真核细胞起始因子 - 4E(eukaryoticinitiationfactor- 4E ,eIF - 4E)是否促进乙酰肝素酶 (heparanase)mRNA的降解 ,并改变其翻译表达水平。方法 :应用脂质体包裹与eIF - 4EmRNA翻泽起始点互补的asODN ,转染处理人大肠腺癌细胞LS - 174T。使用Westernblot和RT -PCR方法分别检测eIF - 4E被阻抑后其转录和翻译水平的改变。乙酰肝素酶mRNA在细胞内水平采用Northernblot定量检测 ,其蛋白表达水平改变采用Westernblot检测。结果 :asODN经脂质体转染LS - 174T细胞后 ,eIF - 4E基因表达明显受到抑制 ,其蛋白表达产物也显著下降。伴随eIF - 4E被阻抑表达 ,Northernblot结果显示乙酰肝素酶mRNA水平下降 ,且其蛋白翻译表达量也降低。结论 :阻抑eIF - 4E影响LS - 174T细胞乙酰肝素酶mRNA稳定、促使其降解 。

阻滞eIF-4E对乙酰肝素酶mRNA核浆转运及其表达的影响

目的 :确定结肠癌LS 1 74T细胞中过量表达的真核细胞起始因子 4E(eukaryoticinitiationfactor 4E ,eIF 4E)是否影响乙酰肝素酶 (heparanase)mRNA的核浆转运 ,并改变乙酰肝素酶表达水平 .方法 :脂质体包裹与eIF 4EmRNA翻译起始点互补的asODN转染人大肠腺癌细胞LS 1 74T .使用Westernblot,RT PCR方法分别检测eIF 4E被阻抑后其转录和翻译水平的改变 .乙酰肝素酶mRNA在细胞内核浆分布水平采用Northernblot检测 ,其蛋白表达采用Westernblot检测 .结果 :asODN转染显著抑制eIF 4E基因和蛋白表达 .伴随eIF 4E被阻抑 ,Northernblot结果显示更多乙酰肝素酶mRNA滞留在细胞核 ,且其蛋白表达量也下降 .结论 :阻抑eIF 4E可影响LS 1 74T细胞乙酰肝素酶mRNA核浆转运 ,并降低乙酰肝素酶蛋白表达 .