第一极体不能精确定位人卵母细胞纺锤体

目的 观测人卵母细胞纺锤体的确切位置,从而指导今后的生殖医学临床工作。方法 应用纺锤体成像系统观测体外成熟及体内成熟组人卵母细胞纺锤体,测量卵子中心、纺锤体与第一极体之间形成的角度。比较两组结果的差异。结果 体外成熟组纺锤体与第一极体形成角度和体内成熟组存在显著差异(P=0.006)。结论 人卵母细胞的位置并不能准确定位卵母细胞纺锤体的位置。体外成熟组纺锤体与第一极体形成的角度要明显小于体内成熟组。应用纺锤体成像系统可以安全、有效地观察人卵母细胞纺锤体。

活性氧与女性生殖

活性氧(reactive oxygen species,ROS)是正常有氧代谢的产物,正常情况下,ROS的产生和清除保持动态平衡,但是当线粒体功能下降,ROS产生增加或细胞抗氧化机制受损时,可造成ROS的累积,导致细胞氧化应激损伤。在腹膜液、卵泡液和输卵管积水等重要的生殖微环境内都检测到ROS的存在,并发现腹腔液内ROS水平与不明原因不孕相关,多种生殖组织内存在不同的氧化/抗氧化系统,ROS可能参与卵母细胞老化、胚胎体外发育不良以及一些不孕原因的形成,在女性生殖中起重要作用。

卵母细胞纺锤体观察及在辅助生殖领域应用与展望

在细胞分裂过程中,纺锤体对卵母细胞染色体的运动、分配和极体的排出非常关键。以往研究动物卵母细胞纺锤体的方法都是侵袭性的,对于人卵母细胞不能广泛应用。近来,活卵母细胞纺锤体的观察方法已基本成熟,通过这些观察方法可以非侵袭性地观测研究卵母细胞中纺锤体的形态和动力学特征。在人类辅助生殖领域有广阔的应用前景。

卵泡液中TGFβ1和性激素水平的测定及临床意义

目的探讨控制性超排卵(COH)周期取卵(OPU)日卵泡液中转化生长因子β1(TGFβ1)及性激素的含量与卵母细胞成熟、受精和妊娠结局的关系。方法酶联免疫反应法测定90例COH周期OPU日卵泡液中TGFβ1和性激素的含量,卵泡液按相应卵母细胞的成熟度、受精情况和妊娠结局分组。结果成熟组卵泡液中TGFβ1、促黄体生成素(LH)和孕酮水平高于未成熟组[(2824.4±1414.4)pg/mlvs(2015.0±1191.7)pg/ml,(0.71±0.35)mIU/mlvs(0.54±0.21)mIU/ml,(3837.1±942.8)ng/mlvs(3188.1±617.4)ng/ml,均为P<0.05];受精组卵泡液中TGFβ1、LH和孕酮浓度均明显高于非受精组;妊娠组卵泡液中TGFβ1和LH浓度明显高于非妊娠组[(3547.4±1536.3)pg/mlvs(2169.2±1180.4)pg/ml,(0.74±0.25)mIU/mlvs(0.52±0.29)mIU/ml,均为P<0.05]。雌二醇浓度各组间无显著差异。结论COH周期OPU日卵泡液中适量的LH和孕酮促进卵母细胞的成熟;TGFβ1和LH浓度与相应卵泡的卵母细胞成熟及其后的受精和妊娠结局有关。

丝裂原活化蛋白激酶对佛波酯诱导滋养细胞MMP-9基因表达的影响

目的探讨佛波酯(PMA)诱导细胞滋养层细胞(CTB)MMP-9基因表达的调控机制。方法用细胞ELISA法测定CTB细胞的蛋白激酶活性变化;用反转录聚合酶链反应检测CTB中MMP-9的基因表达。结果100 nmol/L PMA能迅速激活CTB中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)以及p38 MAPK激酶的活性。100 nmol/L PMA刺激CTB引起MMP-9 mRNA表达显著增加,能被ERK或p38 MAPK的特异性抑制剂所抑制。结论ERK和p38 MAPK可能是PMA诱导CTB中MMP-9基因表达增加的重要调节物质。

促性腺激素对人卵巢脑源性神经营养因子及其受体表达的影响

目的 :探讨促性腺激素 ( Gn)对脑源性神经营养因子 ( BDNF)及其受体——酪氨酸蛋白激酶受体 B( Trk B)在人卵巢中表达的影响。方法 :体外培养来自体外受精 -胚胎移植 ( IVF- ET)周期的黄体化卵丘颗粒细胞与壁层颗粒细胞 ,ELISA方法检测不同浓度人绝经期促性腺激素 ( h MG)对卵丘颗粒细胞分泌 BDNF的影响 ,Western免疫印迹方法检测不同浓度 h MG对壁层颗粒细胞表达 Trk B的影响。结果 :h MG促进卵丘颗粒细胞 BDNF的分泌 ,增加壁层颗粒细胞 Trk B的表达 ;不同浓度h MG作用的实验组之间表达差异无统计学意义。结论 :Gn促进 BDNF及其受体 Trk B在人卵巢的表达。

解耦联蛋白2在人卵巢的表达及与年龄的关系

目的探讨解耦联蛋白2(UCP2)在卵巢组织的表达及其与年龄的关系。方法用原位杂交和Western blot检测33例,其中<36岁11例,≥36岁22例。手术切除的卵巢组织UCP2 mRNA和蛋白的表达,结果UCP2主要表达于人类卵巢生长卵泡的颗粒细胞和卵巢血管壁细胞内,在蛋白水平,年长女性UCP2表达水平显著低于年轻女性。结论UCP2可能参与卵泡发育调控,年长女性颗粒细胞UCP2表达降低可能是年龄相关卵母细胞改变的机制之一。

人类ART中卵巢反应性与子宫内膜容受性超声检查研究

人类生殖过程中女性能否成功妊娠的两个重要因素是卵巢的反应性和子宫内膜的容受性。超声波通过测定卵巢、卵泡的血流指数以及对子宫内膜的形态学(内膜回声类型、厚度、体积、子宫结构的改变等)和功能学(内膜、子宫动脉的血流指数和子宫收缩性的变化等)的评价,提供了大量信息,较普遍认为最好的妊娠条件是发育卵泡血供丰富,内膜呈三线征、厚度>7mm,子宫动脉搏动指数(PI)<3,内膜下可探及血流。但是一些学者尚有不同的观点,需要实验研究进一步证实。

异常卵母细胞一例

病例：35岁，平时月经正常，结婚12年未避孕未孕。1996年4月和2000年5月分别在上海和广东行腹腔镜检查，诊断为双侧输卵管通而不畅，子宫内膜异位症及子宫肌瘤，并于2000年5月行子宫内膜异位症病灶电凝术，子宫肌瘤剔除术。其夫精液多次检查均正常。2001年。

常规IVF失败后补救ICSI治疗

目的 :探讨常规IVF周期中受精完全失败或受精率低于 2 5 %时 ,应用卵母细胞单精子显微注射 (ICSI)技术进行再受精的临床意义。 方法 :回顾分析 1999年 1月～ 2 0 0 0年 8月 ,在我院生殖医学研究中心接受IVF ET治疗5 4 6个周期中 ,精子参数正常者行常规IVF ,受精失败或受精率低于 2 5 %行补救性ICSI 17个周期。采用常规超排卵方案治疗 ,取卵后 4～ 6h受精 ,16～ 18h后观察 ,发现未受精或受精率低于 2 5 % ,立即行补救ICSI,16～ 2 0h后观察受精情况。 结果 :10个周期受精率低于 2 5 % ,共有未受精卵 112个 ,其中MⅡ 期 89个 ;显微注射 89个 ,受精 5 0个 ,受精率 5 6.2 % ;共有 5例妊娠 ,3例单胎 ,1例双胎 ,1例流产 ,其移植胚胎包括来源于第 1d受精卵和补救性ICSI后受精卵 ;2个周期有冷冻胚胎 ,1例妊娠。 7个周期受精完全失败 ,共有未受精卵 79个 ,其中MⅡ 期 4 7个 ;显微注射 4 7个 ,受精 2 9个 ,受精率 61.7% ,5个周期有胚胎移植 ,1例妊娠。 结论 :补救性ICSI是常规IVF周期受精失败后的可行治疗方法。

蜕膜细胞条件培养液对卵巢癌细胞株COCl侵袭相关基因表达的影响

目的 研究蜕膜细胞条件培养液(DCM)对卵巢癌相关侵袭基因表达的影响。方法 原代培养早孕蜕膜细胞及晚孕蜕膜细胞并提取DCM,用DCM处理卵巢癌细胞株COCl,利用RT-PCR法对卵巢癌侵袭相关基因的表达进行分析。结果卵巢癌细胞株COC1表达基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-2)及纤溶酶原抑制剂(PAI-1),而不表达MMP-9、TIMP-1及尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)。早孕及晚孕DCM能显著下调卵巢癌细胞株COC1 MMP-2的表达(P<0.01);早孕及晚孕DCM处理的卵巢癌细胞株COC1也表达TIMP-2、PAI-1 mRNA,且有显著差异(P<0.01)。结论DCM可以通过改变卵巢癌细胞株COCl侵袭基因MMP-2/TIMP-2以及B-PA/PAI-1之间的平衡,从而降低卵巢癌细胞株COCl的侵袭能力。

五个抑癌印迹基因在人类卵子及种植前胚胎的表达

目的:检测5个抑癌印迹基因在人类卵子和种植前胚胎的正常表达,完善印迹基因在人类种植前胚胎的表达图谱。方法:应用巢式RT-PCR技术检测印迹基因ARHI、LOT1、P57KIP2、Peg3、TSSC3在人类卵子和种植前胚胎中的表达。结果:卵子和各期种植前胚胎、囊胚中均存在LOT1、P57kip2转录;除4-细胞胚胎外,卵子和其余各期胚胎均可测得ARHI表达; Peg3表达于4-细胞、8-细胞胚胎和囊胚;TSSC3于卵子及各期种植前胚胎中均未表达。结论:除TSSC3外的4个抑癌印迹基因均表达于种植前胚胎,为探讨印迹基因与ART及肿瘤的关系提供理论依据。

对曾育21三体综合征患儿者行胚胎种植前遗传学诊断获妊娠1例

目的在体外受精-胚胎移植过程中,对高危夫妇进行胚胎种植前遗传学诊断以避免21三体综合征患儿的出生.方法常规激素替代治疗,对患者夫妇行胞母细胞质内单精子注射(ICSI),正常受精培养到第3天,对6～10细胞期胚胎活检1个细胞,利用荧光原位杂交技术(FISH)进行胚胎种植前遗传学诊断(PGD),挑选染色体数目正常的胚胎移植入患者子宫.结果共对8个胚胎进行PGD,7个有诊断结果者中6个为正常胚胎、1个为21三体胚胎.挑选3个胚胎移植,获得妊娠并产下一健康男婴.结论应用FISH对染色体数目异常的遗传疾病,如21三体综合征,进行胚胎种植前遗传学诊断是切实可行的.

采用消减杂交初步筛选先兆子痫病理相关基因

目的 应用抑制性消减杂交、PCR技术 ,克隆出与先兆子痫有关的高表达基因和 (或 )新基因。方法 分别从正常妊娠分娩胎盘和先兆子痫患者分娩胎盘中提取mRNA ,采用抑制性消减杂交、PCR技术 ,构建先兆子痫胎盘cDNA文库 ,采用反向杂交验证 ,测序分析 ;以初步筛选的差异表达基因为探针 ,与先兆子痫和正常胎盘总体mRNA斑点杂交。结果 构建成功具有高消减效率的与先兆子痫相关cDNA消减文库 ,文库扩增后得到 60个阳性克隆 ,经杂交验证 ,有 3 4个阳性克隆有插入片断 ,随机挑取一阳性克隆菌落 ,测序分析发现该差异表达基因为核蛋白多糖基因 ,以该差异表达基因为探针 ,与先兆子痫和正常胎盘总体mRNA斑点杂交 ,观察其在总体胎盘中的表达。结论 人类先兆子痫胎盘基因表达同正常胎盘相比 ,核蛋白多糖呈差异表达基因 。

应用两种麦管系统对小鼠囊胚的玻璃化冷冻

目的比较两种麦管系统对小鼠囊胚的玻璃化冷冻比较,以期建立一种有效的囊胚冷冻方法。方法分别应用开放麦管系统和传统麦管系统对小鼠扩张囊胚进行玻璃化冷冻,比较冷冻复苏以后囊胚的存活率和孵出率。结果应用开放麦管系统冷冻的小鼠囊胚复苏后的存活率(82.3%)显著高于应用传统麦管系统者(68.6%, P<0.01)。前者冷冻的小鼠囊胚复苏后的囊胚孵出率(70.3%),也明显高于应用传统麦管系统者(57.1%, P<0.05)。结论应用开放性麦管系统进行小鼠囊胚的玻璃化冷冻是一种行之有效的冷冻方法。

控制性超排卵周期的子宫内膜容受性研究

目的 研究控制性超排卵 (COH)对子宫内膜容受性的影响。方法 扫描电镜观察COH后子宫内膜胞饮突的变化和免疫组化法检测整合素 β3、TGFβ1的表达 ;以正常月经周期分泌中期子宫内膜作对照。 结果 COH周期 ,完全发展的胞饮突出现在月经周期的第 18～ 19d ,较正常周期提前 1～ 2d出现和消失 ;整合素 β3、TGFβ1在正常月经周期第 2 1～ 2 3d的子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞的细胞质高表达 ,而COH周期在第 18～ 2 0d高表达。COH周期和正常周期 ,整合素 β3和TGFβ1在子宫内膜上皮细胞的高表达与完全发展胞饮突的出现在时期上存在着一致性。结论 COH可能通过改变子宫内膜与着床密切相关的粘附分子、细胞因子和超微结构的时序性表达来影响子宫内膜的容受性 ,使子宫内膜着床窗的开放与胚泡的发育不同步 ,这可能是影响IVF妊娠率的重要原因。