金黄色葡萄球菌肠毒素D产毒基因的序列分析

目的 构建金黄色葡萄球菌肠素D(SED)毒力蛋白基因重组表达质粒。方法 根据SED已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从金黄色葡萄球菌毒力质粒上扩增出基因片段 ,克隆到原核表达质粒PET3 2中 ,转化大肠埃希菌JM 10 9感受态细胞 ,经酶切和PCR鉴定 ,然后进行测序。结果 PCR扩增产物大小为 3 17bp ;重组质粒经双酶切和PCR鉴定表明已正确重组 ;测序结果与己知序列基本吻合。结论 国内首次克隆了金黄色葡萄球菌肠毒素D产毒基因 。

金黄色葡萄球菌肠毒素单克隆抗体制备与应用

目的制备抗B型金黄色葡萄球菌肠毒素单克隆抗体。方法纯化B型金黄色葡萄球菌肠毒素(SEB)免疫BALB/C小鼠的脾细胞与SO2/0骨髓瘤细胞融合,经筛选及克隆化,共获得6株能稳定分泌抗B型金黄色葡萄球菌肠毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株并进行了鉴定。结果6株单克隆抗体除两株属于IgG2A外,其余均属于IGG1亚类,其培养上清和腹水的滴度分别为1256～1512和112800～125600,6株单克隆抗体均不与SEA发生交叉反应,仅有2株与SEC1有弱交叉反应。WESTERNBLOT实验显示出一条特异性带,位于分子量28.5KDA处,证明了其特异性。结论成功获得抗B型金黄色葡萄球菌肠毒素单克隆抗体,为检测SEB打下了基础。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及肠毒素的检测

目的 评价乳胶结合实验检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (MRSA)的方法并检测MRSA的肠毒素。方法 收集 130株金黄色葡萄球菌临床分离株 ,通过药敏试验将其分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌 (MSSA) ,应用乳胶结合试验和基因扩增分别检测青霉素结合蛋白 2a(PBP2a)和MecA基因 ;用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肠毒素。结果 6 5株MecA基因扩增阳性菌株中的 6 2株PBP2a检测阳性 ,6 3株MSSA中 ,MecA基因扩增及PBP2a检测全部为阴性。MRSA产肠毒素为 6 7株。MSSA肠毒素为 19株。结论 乳胶结合试验是一种简便、快速、准确检测MRSA的方法 。

福氏志贺菌ipaC基因的克隆及序列分析

目的 构建福氏志贺菌毒力蛋白基因 (ipaC)重组表达质粒。方法 根据ipaC已知序列 ,设计合成一对引物 ,用PCR方法从福氏志贺菌毒力质粒上扩增出ipaC基因片段 ,克隆到原核表达质粒pET3 2a中 ,转化大肠埃希菌TG1感受态细胞 ,经酶切和PCR鉴定 ,然后进行测序。结果 ipaC基因体外扩增产物大小约为 1112bp。重组质粒经双酶切和PCR鉴定表明为正确重组子 ,测序结果与已知序列基本吻合。结论 在国内首次克隆了福氏志贺菌ipaC基因 。

人杯状病毒检测方法及其进展

人杯状病毒常常引起人群胃肠炎的爆发与散发,随着检测方法的不断改进,其危害性愈来愈受到重视。本文对人杯状病毒的常用检测方法及其研究进展进行了综述。

原位PCR检测霍乱弧菌ctxAB基因

目的 为监测环境中的霍乱弧菌 ,建立原位PCR(insituPCR ,ISPCR)检测方法。方法纯培养的霍乱弧菌为实验材料 ,霍乱毒素基因 (ctxAB)为靶序列。 4 %多聚甲醛固定细胞 ,1mg/ml溶菌酶消化 2 0min ,PCR反应体系中加入 2 .5 %甘油 ,以荧光素标记的引物为标示物 ,在液相环境下 ,进行靶序列的ISPCR。结果 经蓝光激发 ,荧光显微镜下有扩增产物的细菌发出明亮的绿色荧光 ,阴性对照则无荧光。结论 由于ISPCR既能检测靶序列 ,又保护了细菌形态 ,可以在检测中省去细菌培养的过程 ,因此 。