降钙素基因相关肽单克隆抗体的研制及初步鉴定

以人工合成的降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）一牛血清白蛋白（ＢＳＡ）偶联物（ＣＧＲＰ—ＢＳＡ）为免疫原，用微量脾内免疫法免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。取其免疫脾细胞与小鼠ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，经间接ＥＬＩＳＡ法筛选、３次克隆化后，获得３株能稳定分泌抗ＣＧＲＰ单克隆抗体的杂交瘤细胞３Ｂ４、７Ｅ１１和８Ｆ２。用琼脂双扩散法鉴定，３Ｂ４为ＩｇＧ１亚类，７Ｅ１１和８Ｆ２均为ＩｇＭ类。杂交瘤细胞的染色体条数在９２～１１４条之间。特异性鉴定表明，３Ｂ４腹水（１：１００）与心钠素、甲状腺降钙素、绒毛膜促性腺激素和血管紧张素Ⅰ等８种抗原均无交叉反应。８Ｆ２腹水、３Ｂ４腹水及７Ｅ１１腹水的效价分别为：１．６×１０－５、３．１×１０－５及１．２５×１０－４。ＭｃＡｂ相加试验及竟争抑制试验均表明，３Ｂ４、７Ｅ１１和８Ｆ２分别识别不同的表位。以Ｗｉｓｔａｒ大白鼠为实验动物，各株杂交瘤细胞的腹水（１：１００）为样品，进行ＭｃＡｂ的动物阻断保护试验。即将大白鼠麻醉后颈动脉插管，单独注射ＣＧＲＰ（３μｇ／０．１ｍｌ只），血压下降６．６６５—９．３３３ｋＰａ；当注入ＣＧＲＰ（３μｇ）加ＭｃＡｂ８Ｆ２（１：１００）时，血压下降１１．９９７ｋｐａ，比?

大鼠体外肝细胞集落的建立及生长调控研究

目的研究建立体外培养肝细胞集落的关键条件,探讨肝细胞克隆生长的调控机制。方法采用原位预灌流和胶原酶循环灌流分离肝细胞,观察在化学限定培养条件下,肝细胞生长素(HPN)、二甲亚砜(DMSO)及尼克酰胺(NA)对肝细胞DNA合成、有丝分裂象、光镜形态和电镜超微结构的影响。结果肝细胞培养时间进程显示:10 mmol/L NA显著协同HPN促进肝细胞3H-TdR掺入作用,在60和84 h出现2个DNA合成峰;2% DMSO抑制3H-TdR掺入,但在NA共同作用下,肝细胞在132 h表现为DNA合成峰。有丝分裂象显示:HPN+NA+DMSO培养72 h时肝细胞为正常二级分裂,168 h后仍保持相当的有丝分裂活性。光镜下形态及电镜超微结构观察到培养28 d的肝细胞克隆生长特征及增殖潜在性。结论NA及DMSO加入-移除方案可交叉控制HPN作用的肝细胞增殖,所构建的肝细胞克隆生长系统可用于人肝细胞代谢、诱变、细胞中毒及生物转化等研究,并为实施体外克隆肝细胞治疗肝衰竭及遗传性肝疾病提供实验依据。

分泌抗过氧化氢酶单克隆抗体的研制及特性鉴定

用从微球菌中提取纯化的过氧化氢酶为免疫原，以硝酸纤维膜皮下埋植法免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞和ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，获得１１株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系。其中１Ａ１０、３Ｃ５、４Ｅ１２和４Ｆ６四株经连续传代三个月、冻存１０个月后复苏，仍能稳定分泌抗体．腹水效价在１０－４～１０－６之间．Ｉｇ类型鉴定，１Ａ１０与４Ｅ１２为ＩｇＧ２ａ，４Ｆ６为ＩｇＧ３亚类，３Ｃ５为ＩｇＭ类．染色体数介于８２～１１０之间．将４株ＭｃＡｂ与溶菌酶、纤维结合蛋白等１１种蛋白及多肽物质做交叉反应试验，均无明显交叉反应．以固相抗原竞争ＥＬＩＳＡ试验和ＥＬＩＳＡ相加试验作位点分析，两法一致表明ＭｃＡｂ４Ｆ６与另３株ＭｃＡｂ１Ａ１０、３Ｃ５和４Ｅ１２所针对的抗原位点有差别。４株ＭｃＡｂ相对亲和力测定结果依次为：４Ｅ１２＞１Ａ１０＞３Ｃ５＞４Ｆ６．用亲和层析柱纯化的４Ｆ６ＭｃＡｂ做过氧化氢酶催化活性试验，发现能激活过氧化氢酶对底物索曼的活性，抑制过氧化氢酶对底物过氧化氢的分解．

医院常用布类卫生用具带菌情况的调查及消毒效果比较

通过对我院5个科室病房使用的抹布、拖布、扫床毛巾三种布类卫生用具进行的细菌污染情况调查结果显示,布类卫生用具的微生物污染严重,含菌量为10~4～10~6个/g,细菌分类以非致病菌为主,占58.57％;其次为条件致病菌,占35.28％;致病菌最少,占6.08％。采用4种消毒剂分别对各布类用具作消毒效果比较,结果杀菌率均达99.93％以上。为了有效地控制医院内感染的各个环节,必须重视布类用具的消毒工作,建立定期消毒监测制度,达到降低院内感染率的目的。

影响碱性成纤维细胞生长因子促进烧伤创面愈合因素的探讨

采用大白鼠15%Ⅲ度烧伤模型,探讨了影响碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进烧伤创面愈合的因素。结果发现,烧伤创面早期切痂可保持bFGF的活性。40天创面愈合率达84.0%,而未切痂组愈合率仅9.0%。肝素可增强bFGF促进创面肉芽组织生长、毛细血管增生、纤维母细胞增殖及细胞DNA合成。创面感染的控制有利于保护bFGF的活性。伤后1周开始使用bFGF为适宜时期。