抗肿瘤多药抗性核酶转录质粒的构建及其体外切割研究

目的 探讨体外核酶对肿瘤多药抗性相关基因mdr1靶RNA分子的切割作用及其影响因素。方法 利用计算机软件设计能特异切割mdr1 mRNA的锤头状核酶（ribozyme），并构建抗mdr1-ribozyme和靶分子的体外转录质粒，进行体外切割实验。结果 发现抗mdr1-ribozyme能较好地切割mdr1 mRNA。 结论 抗肿瘤多药抗性核酶的体外研究为其体内应用提供了参考，ribozyme有可能成为逆转肿瘤多药抗性的新药物。

鞘糖脂与肿瘤治疗

鞘糖脂是由糖基和神经酰胺组成的两性分子,其神经鞘氨醇骨架一侧通过糖苷键连有寡糖链,另一侧通过酰胺键与脂肪酸相连。尽管鞘糖脂结构中只发现有7种单糖,但已报道不同糖链的鞘糖脂达400余种。而理论上近200种糖链与10种神经酰胺组合,可形成2 000种鞘糖脂,说明还有多种鞘糖脂未被人们发现。鞘糖脂大多分布在细胞的膜结构中,研究表明,质膜上的鞘糖脂常聚集成簇,包含胆固醇和少量磷脂,称为“筏”(raft),其外表面有信号诱导分子,如磷脂酰肌醇聚糖(GPI)锚定蛋白的受体,胞浆面含有src家族激酶。

新型肿瘤疫苗研究现况及进展

肿瘤疫苗是肿瘤主动特异性免疫治疗 (activespecificimmunotherapy)的核心。由于肿瘤细胞缺乏特异性抗原及必要的抗原呈递而使肿瘤疫苗制备非常困难。由于分子免疫学及基因工程技术的迅速发展 ,出现了转基因瘤苗、DC及B细胞瘤苗、核酸瘤苗、抗独特型瘤苗及HSP 多肽复合物瘤苗等新型高效瘤苗。本文就此作一综述 ,并介绍新的瘤苗制备和构建方法。

结直肠肿瘤中APC基因突变研究进展

APC基因为结直肠腺瘤性息肉的易感基因 ,定位于人体 5号染色体 5q2 1上。APC基因不仅与家族性腺瘤性息肉病 (FAP)有关 ,而且同部分散发性结直肠肿瘤也有关。本文对APC基因突变类型、功能、基因型 表型相关性、检测及临床应用作一扼要介绍。

葡萄糖神经酰胺合酶基因在多药耐药肿瘤细胞株KBV_(200)的表达及其与肿瘤多药耐药性的关系

目的 观察葡萄糖神经酰胺合酶(glucosylcerarnide synthase,GCS)基因在人口腔表皮样癌多药耐药细胞株KBV_(200)的表达及其与肿瘤多药耐药性(MDR)的关系。方法 采用RT-PCR分析KBV_(200)及其亲本KB细胞株GCS基因表达的差异,运用MTT法分析KBV_(200)经糖脂合成酶抑制剂苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(DL-PPMP)及钙离子通道阻滞剂异搏定处理前后细胞MDR的变化,应用RT-PCR技术检测KBV_(200)细胞耐药逆转后GCS及mdrl基因的表达。结果 KBV_(200)细胞GCS和mdrl基因的表达明显强于KB细胞,而KB细胞mdrl基因表达为阴性。5～25μmol/L DL-PPMP均可抑制KBV_(200)GCS mRNA表达,25 μmol/L时抑制强度最大;10 μmol/L异搏定即可抑制KBV_(200)GCS mRNA表达,15 μmol/L时抑制作用明显。DL-PPMP和异搏定均可抑制mdrl基因的表达,KBV_(200)经25μmol/L DL-PPMP作用48h后细胞内mdrl表达为阴性。结论 异搏定和DL-PPMP对GCS和marl基因表达的抑制调节呈浓度依赖性,它们可通过抑制GCS和mdrl基因表达,逆转KBV_(200)对长春新碱的耐药。KBV_(200)GCS基因的表达与MDR存在正相关,GCS基因可能在肿瘤的多药耐药过程中起着重要作用。

蛋白转导功能域在肿瘤疫苗领域的应用前景

蛋白转导技术是近些年迅速发展起来的一种跨膜转运技术 .应用该技术可以将多种药物 ,包括化合物、多肽、核酸等 ,高效地转运到细胞内 ,其过程不依赖于能量和受体 ,而是由在生理pH条件下带正电荷的、富含碱性氨基酸残基的多肽序列即蛋白转导功能域所介导 .目前蛋白转导技术已经不仅仅是一种可以提高药物进入细胞效率的药物转运技术 ,而且被广泛用做肿瘤基因治疗的辅助手段来增强对肿瘤组织的杀伤效率 .最近研究表明 ,HIV 1TAT ,HSV 1VP2 2和果蝇触角足同源蛋白等的蛋白转导功能域尚可引导与之融合表达或共价结合的抗原进入MHCI类分子依赖的抗原提呈途径 ,并显著提高抗原特异性CTL的产生水平 ,其作用机制涉及介导抗原在细胞内和细胞间播散、增强抗原表达水平、促进CTL表位的加工和释放并提高抗原表位向细胞表面的提呈等 .这些资料表明蛋白转导功能域可以显著提高肿瘤疫苗的免疫效能 ,激发机体产生高水平的抗原特异性CTL ,从而对肿瘤组织产生最大的免疫杀伤效应 .

树突状细胞为佐剂的肿瘤疫苗疗法进展

本文综述树突状细胞瘤苗疗法的概况和原理 ,树突状细胞免疫学研究进展 ,树突状细胞瘤苗的体外实验、动物实验及临床试验结果。对不同形式瘤苗的疗效作了比较 ,并总结了该疗法的临床应用经验。

化疗药物对T淋巴细胞及其亚群影响的体外探讨

目的:探讨化疗药物对T淋巴细胞及其亚群的影响。方法:取健康成年人外周血T淋巴细胞,采用M TT法观察几种常见化疗药物对T淋巴细胞的杀伤作用,在倒置显微镜下观察化疗后T淋巴细胞的转化能力,应用流式细胞仪比较化疗前后细胞亚群比例的变化。结果:化疗药物在大剂量时对T淋巴细胞的杀伤活力极大,并显著影响淋巴细胞的转化,化疗对T淋巴细胞亚群的杀伤无选择性,不改变细胞亚群的比例(P>0.05)。结论:化疗通过对免疫活性细胞的非选择性杀伤,抑制机体的细胞免疫功能。

抗HPV16核酶对宫颈癌CaSKi细胞放疗敏感性的影响

背景与目的:人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)是宫颈癌最主要的致病因素,E6是主要的致癌基因之一;高危HPV基因型,如HPV16的E6蛋白表达水平是维持宫颈癌恶性表型的必要条件。而放射治疗是目前宫颈癌治疗的标准和有效的方法。本研究旨在探讨抗HPV16E6核酶(ribozyme)对宫颈癌CaSKi细胞放疗敏感性的影响。方法:以脂质体法将抗HPV16E6-ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达,Northern杂交检测3种细胞中E6基因的表达。用克隆形成试验检测3种细胞对放疗的敏感性,Annexine/PI双标法检测细胞凋亡率,流式细胞术检测bcl-2、p53、bax蛋白表达。结果:点杂交证实核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Northern杂交证实CaSKi-R中E6表达较CaSKi-P、CaSKi中明显降低。CaSKi-R细胞生长速度较CaSKi-P、CaSKi明显减慢(P<0.01);CaSKi-R细胞对X射线的敏感性较CaSKi-P、CaSKi明显增加,克隆形成率明显下降(P<0.05),CaSKi-R细胞照射前后的凋亡率较X射线照射后CaSKi-P、CaSKi明显增加(P<0.01);CaSKi-R细胞p53、bax蛋白表达较CaSKi-P、CaSKi明显升高,bcl-2明显减少(P<0.01)。结论:转染抗HPV16E6-ribozyme的CaSKi-R细胞出现一定程度的生长抑制,且对放射治疗的敏感性增加?

立体定向引导氩氦刀靶向冷冻治疗脑胶质瘤

目的探索应用氩氦外科冷冻系统结合脑立体定向外科治疗脑胶质瘤的手术疗效。方法使用CRW立体定向仪，行头顿计算机体层摄影扫描（CT）确定脑胶质瘤中心及边缘点坐标。以氩氦超冷治疗探针在限定靶区进行冷冻－复温－冷冻治疗4例复发性胶质瘤。结果1例直径4．5cm的颞部肿瘤行钻孔肿瘤中心靶点冷冻治疗；余3例直径8～15cm枕顶部肿瘤行主体定向等体积切除手术，术中冷冻后切除冷冻瘤组织。术后CT扫描显示：3例肿瘤组织及肿瘤边缘1cm范围被切除，术后无出血及明显水肿；1例直接冷冻治疗后3周复查见病灶染色消失，CT密度下降，呈软化改变。术后1例轻偏瘫加重，对症处理后恢复，1例头皮切口愈后不良，经皮瓣转移后愈合。结论立体定向引导氩氦超冷刀治疗脑胶质瘤，能较彻底切除肿瘤，手术侵袭性小，安全且易于操作，具有较强的临床应用价值；但此操作技术还不尽完善，远期疗效还有待进一步观察。

X射线照射后鼻咽癌细胞多药耐药基因的表达

目的通过检测射线照射前后鼻咽癌CNE1细胞多药耐药基因(mdr1基因)及其编码产物P糖蛋白(P-gp)的表达和功能为临床鼻咽癌放化疗顺序提供参考。方法利用RT-PCR、Western blotting和流式细胞仪检测射线照射前后CNE1细胞的mdr1基因和P-gp的表达及对柔红霉素的外排功能。结果鼻咽癌CNE1细胞射线照射前mdr1基因、P-gp不表达;照射后较长时间内mdr1基因、P-gp均明显表达;对柔红霉素的摄取较射线照射前低。结论鼻咽癌CNE1细胞射线照射后化疗敏感性降低,提示临床对于中晚期鼻咽癌的治疗应考虑先化疗再放疗即诱导化疗的治疗方案。

肝动脉栓塞化疗和经皮肝穿刺冷冻联合治疗肝癌

目的 研究肝动脉栓塞化疗 (TACE)和经皮肝穿刺冷冻 (PHCT)联合治疗肝癌的近期疗效和安全性。方法 30例不能手术切除的肝癌病人行 1～ 3个周期 TACE后 ,予 PHCT治疗。结果 综合治疗后 1个月复查 ,综合治疗的肿瘤 ,缩小≥ 5 0 %为 36 .4% (12 /33) ,单纯 TACE的肿瘤 ,缩小≥ 5 0 %为 2 5 .0 % (2 /8)。术后血 AFP和CEA水平均有不同程度下降。术后不良反应轻。结论 TACE和 PHCT联合治疗肝癌为一种较好的综合治疗方法。

特异性核酶对宫颈癌细胞系CaSKi增殖与凋亡的影响

目的研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响。方法设计特异性切割HPV16E6基因的核酶,构建抗HPV16E6核酶的真核表达质粒。以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达,Northern blotting检测CaSKi、CaSKi-R、CaSKi-P 3种细胞中E6基因的表达。测定3种细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成率,并以皮下接种法检测细胞在裸鼠体内的成瘤能力。流式细胞仪检测3种细胞的凋亡率,并测定c-myc、bcl-2、p53、fas、PCNA、C-erbB-2等基因的表达。结果点杂交证实该核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Northern blotting证实CaSKi-R中表达E6较CaSKi-P、CaSKi明显降低。与CaSKi细胞相比,CaSKi-R细胞生长速度、软琼脂克隆形成率明显降低,在裸鼠体内的致癌能力下降,凋亡率明显增高,出现凋亡峰,S期、G2M期细胞百分率下降;而CaSKi-P细胞无此改变。CaSKi-R细胞表达HPV16E6、C-myc、Bcl-2、PCNAC-erbB-2蛋白明显减少,而p53表达明显增高;CaSKi和CaSKi-R细胞中Fas 蛋白的表达相近。CaSKi-P细胞中各基因的表达与CaSKi细胞无显著差异。结论抗HPV16E6核酶的导入能阻碍宫颈癌细胞增殖,诱导其凋亡,其原因可能在于病毒癌基因E6表达的降低,以及由此而引起?

抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞恶性表型的影响

目的 :研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞恶性表型的影响。方法 :以脂质体法将抗HPV16E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞 ,命名为CaSKi R ,CaSKi P细胞。测定CaSKi,CaSKi R ,CaSKi P 3种细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成率 ,流式细胞仪检测 3种细胞中HPV16E6,PCNA ,C erbB 2蛋白的表达。将裸鼠分为 3组 ,分别在皮下接种CaSKi,CaSKi R ,CaSKi P细胞 ,检测细胞在裸鼠体内的成瘤能力 ;另取一组裸鼠 ,每只在右侧接种CaSKi细胞 ,左侧接种CaSKi R细胞 ,对比这两种细胞的致瘤性。分析特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞恶性表型的影响。结果 :CaSKi P ,CaSKi细胞生长速率相近 ,CaSKi R细胞的生长速度明显降低。CaSKi R细胞的软琼脂克隆形成率明显低于CaSKi和CaSKi P细胞。与CaSKi细胞相比 ,CaSKi R细胞表达HPV16E6,PCNA ,C erbB 2蛋白明显减少 ,而CaSKi P细胞无此改变。CaSKi和CaSKi P在裸鼠体内的致瘤性无显著差异 ,而CaSKi R的成瘤性显著低于CaSKi。结论 :抗HPV16E6核酶的导入能部分逆转宫颈癌CaSKi细胞株的恶性表型 ,其原因可能在于病毒癌基因E6表达的降低 ,以及由此而引起的PCNA ,C erbB

Glob-N对胶质瘤细胞株SWO-38生长的体外实验研究

目的 :为了探讨正常及肿瘤相关中性鞘糖脂 (N GSLs)对肿瘤细胞生长的调控作用。方法 :采用改良的Hakomori方法提取、纯化正常人脑、牛脑、正常人“O”型血红细胞膜的N GSLs ,运用柱层析的方法分离正常人脑、牛脑、红细胞膜的红细胞糖苷脂 (Glob N)及人脑二己糖神经鞘氨醇 (CDH) ,MTT法检测各种来源的Glob N及人脑CDH对胶质瘤细胞株SWO 38生长的影响。结果 :三种不同来源的Glob N均能抑制SWO 38细胞的增殖。其中以正常人脑的作用最强 ,红细胞来源的作用次之 ,牛脑来源的最弱 ,而人脑CDH则缺乏抑制作用。结论 :Glob N是一种胶质瘤细胞的生长抑制因子 。

血管内皮细胞生长因子对大肠癌HT-29细胞粘附作用的影响

目的 观察血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）诱导大肠癌ＨＴ－２９细胞转移及其对粘附作用的影响。方法 采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入及鼠尾胶粘附实验测定ＶＥＧＦ对大肠癌ＨＴ－２９细胞同质性和异质性粘附作用以及Ｂｏｄｙｅｎ－Ｃｈａｍｂｅｒ观察ＶＥＧＦ诱导大肠癌细胞转移。结果 １．５ｍｇ／Ｌ ＶＥＧＦ诱导ＨＴ－２９细胞６０。

抗HPV16E6核酶增加宫颈癌CaSKi细胞对顺铂敏感性的研究

目的 :研究抗HPV16E6核酶 (Ribozyme)导入宫颈癌CaSKi细胞对顺铂 (DDP)敏感性的影响。 方法 :以脂质体法将抗HPV16E6 Ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞 ,命名为CaSKi R ,CaSKi P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达 ,Northern杂交检测 3种细胞中E6基因的表达。检测 3种细胞的细胞生长曲线和克隆形成实验 ,MTT法检测 3种细胞对DDP的敏感性 ,Annexine/PI双标法检测细胞凋亡率 ,流式细胞术检测Bcl 2 ,P5 3,Bax蛋白表达。结果 :点杂交证实核酶能在CaSKi R细胞中稳定表达 ,Northern杂交证实CaSKi R中表达E6较CaSKi P ,CaSKi明显降低。与CaSKi P和CaSKi细胞比较 ,CaSKi R细胞的生长速率明显减慢和克隆形成率下降 ,对DDP的敏感性明显增加 (P <0 .0 1) ,凋亡率明显增加 (P <0 .0 1) ,P5 3,Bax蛋白表达明显增加 ,Bcl 2蛋白表达明显减少 (P <0 .0 1) ,CaSKi P和CaSKi细胞比较无差异 (P >0 .0 5 )。结论 :抗HPV16E6 Ribozyme抑制了CaSKi R细胞的生长和克隆形成率 ,CaSKi R细胞对顺铂的敏感性增加。

抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞化疗的影响

目的研究抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞化疗敏感性的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6-Ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达,Northern杂交检测三种细胞中E6基因的表达。用克隆形成试验检测3种细胞对化疗的敏感性,Annexine/PI双标法检测细胞凋亡率。结果点杂交证实核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Northern杂交证实CaSKi-R中表达E6较CaSKi-P、CaSKi明显降低。CaSKi-R细胞的生长速率较CaSKi-P、CaSKi明显减慢,泰素作用后相对克隆形成率和凋亡率在3种细胞间亦无差异(P>0.05);顺铂作用后CaSKi-R细胞的相对克隆形成率较CaSKi-P、CaSKi明显下降(P<0.01),而凋亡率明显增加(P<0.01)。结论转染抗HPV16E6-ribozyme的CaSKi-R细胞出现一定程度的生长抑制,且对顺铂的敏感性增加,而对泰素的敏感性没有发生改变。