自体外周血干细胞移植联合单倍体淋巴细胞输注治疗恶性血液病

为观察自体外周血干细胞移植联合单倍体淋巴细胞输注治疗恶性血液病的疗效和不良反应 ,对完全缓解或部分缓解的恶性血液病患者用中剂量阿糖胞苷 (1.g/m2 × 5天 )或环磷酰胺 (6 0mg/kg× 2天 )联合G CSF方案动员干细胞 ,并经程序降温仪冷冻 ,- 196℃保存。用Bu/Cy或TBI/Cy方案对患者预处理后 ,回输未净化的自体干细胞。当患者白细胞恢复至 1.0× 10 9/L时 ,输注经 7.5Gy照射的单倍体淋巴细胞 (平均 5 .0× 10 7/kg) ,观察患者造血恢复、疾病转归和长期生存率。结果表明 ,12例接受该方案治疗的患者中 ,5例急性非淋巴细胞白血病患者呈持续缓解状态 ,其中 2例无病生存超过 5 0个月 ;3例IV期恶性淋巴瘤患者中 1例长期缓解 ,2例分别于治疗后 4和 6个月复发而死亡 ;1例淋巴瘤 白血病患者持续缓解 18个月 ,2例慢性粒细胞白血病患者也呈持续缓解状态 ,1例多发性骨髓瘤患者持续缓解 36个月后复发 ,但经反应停治疗目前仍处完全缓解状态。平均随访 2 5个月 ,10例无病生存 ,2年无病生存率 83%。单倍体淋巴细胞输注后在部分患者中除血小板恢复延迟外 ,未见严重不良反应。STR PCR示单倍体淋巴细胞输注后 72小时供者淋巴细胞在受者体内消失。结论 :自体干细胞移植联合单倍体淋巴细胞输注可减少急性白血病的复发 。

单克隆抗体诊治血液病的现况和展望

自1975年杂交瘤技术创立以来,单克隆抗体(单抗)已广泛应用于血液病的临床研究,包括诊断和某些治疗方法。单抗和常规抗体(多克隆抗体)相比具有多方面的特点:①专一性强;②可重复性好;③有可能通过建立人的杂交瘤株得到人的抗体。

粒-巨噬细胞集落刺激因子在恶性血液病合并真菌感染中的应用

目的 :探讨粒 巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)在合并真菌感染的恶性血液病中与抗真菌药物联合应用的地位。方法 :对合并真菌感染的恶性血液病人在大扶康治疗同时 ,随机分成加rhGM—CSF(2— 5 μg/kg)和不加rhGM CSF两组。结果 :接受大扶康加rhGM CSF治疗的患者有效率为 88 0 % ,对照组为 6 9 6 % (P <0 0 5 )。中性粒细胞恢复程度及真菌清除时间 ,实验组与对照组均有显著差异 (P <0 0 5 ,0 0 1)。结论 :rhGM CSF加可速中性粒细胞恢复 ,缩短真菌清除时间 。

小鼠红白血病细胞在半相合型小鼠体内的生物特性

把可移植性EL96 11H 2d小鼠红白血病细胞 ,接种给 (BALB/c×C5 7BL/ 6 )F1H 2d/b代 (CB6F1)小鼠并连续在CB6F1传代 ,观察红白血病细胞在半相合型小鼠体内的生物特性 ,为骨髓或造血干细胞移植中研究和观察移植物抗白血病 (GVL)作用提供实验对象。把EL96 11H 2d小鼠脾细胞经尾静脉接种给CB6F1H 2d/b小鼠 ,再把红白血病细胞在CB6F1传代接种 ,建立F1代红白血病模型。结果表明 :每只鼠在静脉接种 10 3 - 10 8个白血病细胞的情况下 ,发病率 10 0 % ;所接种的白血病细胞数量与存活时间呈线性关系 ;接种 10 6细胞的小鼠平均生存时间为 ( 9.6± 0 .8)天。在CB6F1体内连续传 4代 ,发病率 10 0 %。白血病细胞主要侵及肝、脾和骨髓组织 ,血红蛋白染色呈阳性 ,过氧化物酶反应阴性 ,对阿糖胞苷和环磷酰胺等化疗药物敏感。结论 :利用实验室常用的C5 7BL/ 6×BALB/c小鼠建立F1代小鼠红白血病模型 。

同种异基因Th2细胞移植对GVHD和GVL效应的作用

为探讨同种异基因Th2细胞移植是否可以减低移植物抗宿主病 (GVHD)的发生和保留移植物抗白血病 (GVL)效应的作用 ,在体外用rmIL 4 ,ConA和离子霉素把供鼠 (C5 7BL/ 6 H 2b)T细胞优势化诱导培养为Th2细胞 ,再把Th2细胞与供鼠骨髓细胞混合移植给红白血病受鼠模型(EL96 11H 2d)。结果表明 :未处理的对照组 ,受鼠平均存活时间为 (10 .6± 1 3)天 ,10只均死于白血病 ;环磷酰胺化疗组 ,小鼠平均存活 (18 7± 4 2 )天 ,10只小鼠最终均死于白血病 ;骨髓细胞和脾T淋巴细胞移植组 ,小鼠平均存活 (2 2 7± 7 4 )天 ,9/ 10只均死于GVHD ;骨髓细胞和Th2细胞移植组 ,3/ 10只在 2 8天内死于GVHD ,其余 7/ 10只无GVHD发生 ,白血病发病时间明显推迟 ,平均存活 (36 9± 10 8)天 ,在 5 0天时检查有 2只鼠无白血病证据。研究证明体外极向化诱导培养的Th2细胞移植可减低GVHD发生的同时保留了抗白血病的能力。

HLA-Cw在广东汉族人群中的分布频率及其意义的初步分析

目的 :检测HLA Cw在广东汉族人群的分布频率 ,初步分析该人群中KIR与HLA Cw之间识别方式的特点及意义。方法 :骨髓移植供者 12 2例 ,ACD抗凝血提取DNA ,半量全自动PCR RSSO分型检测Cw。结果 :广东汉族人群HLA Cw基因频率分布由高至低依次为 :Cw 0 3(0 2 371) >Cw 0 7(0 2 15 9) >Cw 0 1(0 175 2 ) >Cw 0 8(0 112 9) >Cw 0 4 (0 0 5 0 5 ) >Cw 14、15(0 0 4 19) >Cw 12 (0 0 376 ) >Cw 0 6 (0 0 333) >Cw 0 5 (0 0 0 82 ) >Cw 16 (0 0 0 4 1)。第一组Cw 0 2 ,0 4 ,0 5 ,0 6识别KIR分子中2DL 2DSI;第二组Cw 0 1,0 3,0 7,0 8识别KIR分子中 2DL2 2DL3;2DS2 2DS3。两组分布频率相比有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :广东汉族人群HLA Cw 0 1,0 3,0 7,0 8出现频率较高 ,其与KIR的识别方式均属第二组。

成体干细胞的分化潜能及在修复重建中的应用前景

目的 探讨成体干细胞 (AS细胞 )的分化潜能性及在临床修复重建中应用的可能。方法 检索医学和生物医学文献数据库中关于 AS细胞研究的相关报道 ,并对 AS细胞的最新研究进展作简要总结。结果 AS细胞存在于成体的各种组织中 ,具有自我更新能力和分化潜能性 ;部分成体干细胞 ,如骨髓、皮肤、肝及脂肪等组织中的 AS细胞 ,具有多向分化潜能 ,可向无关组织类型的成熟细胞横向分化 ;AS细胞是组织更新与修复的起源细胞 ,且与肿瘤的发生和衰老密切相关。结论 AS细胞具有多向分化潜能 。

人骨髓基质干细胞克隆的培养及其向神经元样细胞的定向诱导分化

目的探讨人骨髓基质干细胞克隆的体外长期培养方法及其生物学特性。方法贴壁生长的基质干细胞以套环法消化分离,扩增培养,待细胞融合,传代培养。检测细胞的生长曲线、表面标记、克隆形成能力和向神经元定向诱导分化的潜能。结果克隆培养的骨髓基质干细胞能传代20代以上,表达CD13、CD29、CD59,不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR;传代17代时能诱导分化为神经元样细胞。结论该培养条件能有效扩增骨髓基质干细胞,并保持分化潜能;克隆来源的骨髓基质细胞有相同的生物学特性。

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆及其表达

目的获得大量高纯度、具有生物学活性的人胰岛素样生长因子 1(hIGF 1) ,构建hIGF 1原核表达载体 ,并进行表达与纯化。方法以pUCIGF质粒为模板 ,PCR扩增了hIGF 1基因。经适当酶切后 ,构建表达载体pRSET IGF ,转入大肠杆菌BL2 1(DE3)进行表达 ,并经阴离子交换色谱、疏水色谱和凝胶过滤纯化。结果带有重组质粒pRSET IGF的大肠杆菌经IPTG诱导后 ,以可溶性形式表达 7.8kD大小的蛋白 ,其表达量占菌体总蛋白量的10 %～ 2 0 % ,纯化后目的蛋白纯度达 95 %以上 ,Western印迹表明重组蛋白具有hIGF 1抗原活性。结论构建了pRSET IGF重组质粒 ,并成功地在大肠杆菌中获得可溶性表达 。

多弹头射频治疗小肝癌

探讨多弹头射频治疗小肝癌的疗效及价值。对 4 3例小肝癌患者行射频治疗 ,术中直视肿瘤射频治疗前后的图象及CT值 ,术后观察肿瘤大小 ,血供情况及AFP值的变化。结果显示 :完全缓解率 (CR) 95 35 % ;部分缓解率 (PR) 4 6 5 % ;有效率 10 0 %。多弹头射频治疗小肝癌疗效确切而满意 ,对临床有较高的应用价值。

院内获得性肺炎绿脓杆菌对13种抗生素敏感性的研究

目的研究院内获得性肺炎痰标本中，绿脓杆菌对目前常用１３种抗生素的耐药性和产β-内酰胺酶菌株的首选治疗药物。方法标本获得纯培养后用法国ｂｉｏＭｅｒｉｅｕｘ公司的Ｖｉｔｅｋ微生物自动分析仪鉴定到种，药物敏感试验采用Ｋ－Ｂ纸片法按ＮＣＣＬＳ规定的标准进行。结果引起院内获得性肺炎的１０２株绿脓杆菌对１３种常用抗生素的平均耐药率为４２．９％，对β-内酰胺酶类抗生素耐药率在１２．５％以下，对氨基糖甙类耐药率在３４．６％以下，对氟奎喏酮类及头孢类抗生素耐药率分别在２８．９％及３３、７％以上，β-内酰胺类与氨基糖甙类及头孢三代类与氨基糖甙类交叉耐药率分别为１．９％与７．８％；１０２株产β-内酰胺酶的菌株占６７．６％，产酶菌株对亚培氨南、哌拉西林及万古霉素的耐药率在２０.１％以下，对头孢类抗生素耐药率在４５．９％以上。产酶菌比非产霉菌的耐药率平均高３１．６％。结论经验治疗院内获得性肺炎绿脓杆菌感染，β-内酰胺酶类＋氨基糖甙类为较优化的组合；对产酶菌应首选亚培胺南或哌拉西林＋阿米卡星：对非产酶菌仍可选用第三代头孢菌素＋氨基糖甙类治疗。

人骨髓基质干细胞克隆对脐血造血干细胞体外扩增作用的研究

探讨人骨髓基质干细胞的克隆化培养及其对体外造血干细胞扩增的影响。方法 :取正常肋骨分离骨髓 ,制备单个核细胞贴壁培养 ,约 5d后取集落样生长的梭形细胞扩增培养、传代。将分选的脐血造血干 /祖细胞接种到克隆培养的人骨髓基质干细胞及其他培养条件液上 ,比较不同培养条件及不同代次骨髓基质干细胞对造血干 /祖细胞扩增能力及集落形成能力的影响。结果 :人骨髓基质干细胞能扩增达 2 0代以上 ,经流式细胞仪检测证实为基质干细胞 ,单纯细胞因子组和细胞因子加基质干细胞组能有效扩增造血细胞 ,而后者有维持长期造血的作用。结论 :该克隆培养方法能有效扩增骨髓基质干细胞 ,培养的细胞有体外支持长期造血的作用。

体外人骨髓基质细胞克隆培养及分化特性的研究

目的:探讨人骨髓基质细胞(BonemarrowstromLcells,MSCs)克隆方法的有效性及其向神经干细胞(Neuralstemcells,NSCs)的定向分化的潜性。方法:贴壁生长的MSCs以套环法消化分离,扩增培养,流式细胞仪检测细胞的表面标记,应用维甲酸诱导向神经干细胞分化。结果:克隆培养的MSCs能够传代扩增,它们表达CD13、CD59、CD29,而不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR,并能诱导分化为NSCs。结论:该培养条件能有效扩增MSCs,并保持分化潜能。

胚胎干细胞的生物学特性及体外诱导分化

来源于早期胚胎的胚胎干细胞 (ES)和胎儿生殖脊干细胞 (EG)可在未分化状态下长期增殖培养 ,并保持其多向分化潜能 .体外培养ES细胞的条件已趋于稳定 ,国内外建立了来自人和多种动物早期胚胎的ES细胞系 .某些细胞因子和化学物质等可定向诱导ES细胞分化为各种不同类型的组织细胞 .ES细胞在胚胎发育、细胞分化、转基因动物、移植治疗、药物开发等领域具有广阔的应用前景 .

Tju103和CTLA4-Ig诱导MHC半相合小鼠骨髓移植耐受比较

目的:观察Tju103和CTLA4-Ig各自对MHC半相合小鼠骨髓移植免疫耐受的诱导。方法:半相合供鼠T细胞与受鼠抗原、Tju103(或CTLA4-Ig)共育后与骨髓细胞混合移植,观测移植后受情况。结果:A.单纯照射组:全部小鼠于照射后11d内死于造血衰竭;B.白血病CTX治疗组:全部小鼠于接种白血病细胞后16～23d死于白血病;C.单纯移植组:全部小鼠于移植后21d内死于移植物抗宿主病(GVHD);D.CsA预防组:5只小鼠于移植后8～22d死亡,1只死于白血病,各有2只死于GVHD和感染,5只活过30d;E.Tju103处理组:4只小鼠于移植后9～26d死亡,2只死于GVHD,各有1只死于白血病和感染,6只活过30d;F.CTLA4-Ig处理组:2只小鼠于移植后17～26d死亡GVHD,8只活过30d。结论:Tju103和CT-LA4-Ig均明显延长生存期,降低GVHD发生和严重程度,CTLA4-Ig保留有抗感染和移植抗白血病(GVL)作用,而Tju103没有。

供者NK细胞诱导小鼠MHC半相合骨髓移植的免疫耐受

目的 :探讨纯化的供鼠 NK细胞加入预处理方案与 MHC半相合骨髓移植后免疫耐受的关系。方法 :制备 (BAL B/ c H- 2 d× C5 7BL / 6 H- 2 b) CB6 F1 H- 2 d/b小鼠为受者 ,C5 7BL / 6 H- 2 b的小鼠为供者。 70只受者小鼠经致死剂量 (9.0Gy)照射后随机分为 7组 ,每组 1 0只。对照组 :分别为单纯照射组、MHC半相合 GVHD对照组、MHC半相合骨髓细胞移植组、同基因骨髓细胞移植组。实验组 :CB6 F1 H- 2 d/b小鼠在完成照射后 1 h内首先经静脉输注纯化后的MHC半相合供者 NK细胞 ,分为 1× 1 0 6、 5× 1 0 5和 2× 1 0 5/只 3个组 ,在照射后 4 h移植 MHC半相合骨髓细胞。以血像、体重、生存期和病理组织学等变化为观察指标并做组间比较。结果 :1生存期 :单纯照射对照组为 (5 .1 5± 0 .6 6 ) d,GVHD对照组为 (1 5 .80± 1 .93) d,其他组小鼠生存期均大于 30 d。 2病理学结果 ,MHC半相合 GVHD对照组出现典型的 GVHD病理表现 ,其他各组均无 GVHD病理表现。结论 :在 MHC半相合骨髓移植模型上证实 ,移植前将供鼠的纯化 NK细胞加入移植预处理方案 。

化疗联合单倍体淋巴细胞输注治疗难治性白血病

背景与目的:常规化疗治疗难治性白血病的缓解率低于50%,增加化疗强度常因严重并发症导致患者死亡,我们既往的研究表明单倍体淋巴细胞在体外具有较强杀伤白血病细胞效应。本研究旨在观察常规化疗联合经7.5Gyγ射线照射的单倍体淋巴细胞输注治疗难治性白血病的效果和不良反应。方法:16例难治性白血病患者在化疗后,当白细胞降至最低时平均输注1×108/kg(0.8～1.2×108/kg)经7.5Gyγ射线照射的单倍体淋巴细胞,观察难治性白血病的缓解率和单倍体淋巴细胞输注的不良反应。结果:13例难治性急性非淋巴细胞白血病经该治疗后,11例达完全缓解,2例达部分缓解。3例难治性急性淋巴细胞白血病患者,2例完全缓解,1例无效。全组16例患者的总缓解率为81.2%。单倍体淋巴细胞输注后患者感觉良好,无一例长时间骨髓抑制,无输注相关的移植物抗宿主病。结论:化疗联合单倍体淋巴细胞输注可以提高难治性白血病的缓解率,减少化疗引起的并发症。