微板核酸杂交-ELISA方法对肝炎病人血清中HBV DNA的定量检测与分析

目的采用微板核酸杂交-ELISA技术测定肝炎病人血清中HBVDNA含量。方法用PCR法将病人血清标本扩增后，与两条特异性探针夹心杂交，然后通过酶联显色对69例不同临床表现的肝炎患者血清中HBVDNA进行定量检测。结果20例急性重型肝炎血清中的DNA含量超过2μg/L，88.24％的急性轻型肝炎患者和54.55％轻度慢性肝炎患者血清中的HBVDNA含量少于2μg/L,66.67％中度慢性肝炎患者血清HBVDNA含量在2-1000μg/L的范围，75％重度慢性肝炎和45％急性重型肝炎血清中的HBVDNA含量超过1000μg／L。结论做饭核酸杂交-ELISA检测方法能准确、快速进行核酸定量测定，特异性强，灵敏度高，稳定可靠，易自动化，对于研究病毒感染量与临床病程的关系具有较大的现实意义。

尿嘧啶DNA糖苷酶防止PCR产物污染及其对核酸杂交的影响

目的 采用PCR微板核酸杂交ELISA技术分析尿嘧啶DNA糖苷酶（UNG/UDG）防止PCR产物污染及其对PCR扩增效率的影响，探讨在不同A/T含量的微生物中含尿嘧啶的PCR产物对核酸杂交的影响。方法 以3组dUTP含量不同的PCR产物作模板，抗污染组用UNG处理，直接进行再次扩增。用微板核酸杂交ELISA检测第二次PCR扩增的结果。 结果 抗污染组中以含dUTP的PCR产物作模板，结果为阴性；而以不含dUTP的PCR产物作模板，结果为阳性。非抗污染组全部为阳性。对3组PCR产物再进行核酸杂交无明显差别，且在一定温度内，3组具有同样的稳定性。 结论 UNG能有效降解含dUTP的PCR产物，使之不能作为模板再次扩增，可以有效地防止PCR产物的污染。含有尿嘧啶的PCR产物对寡核苷酸探针的杂交无影响。