钙依赖粘附素生理功能研究进展

钙依赖粘附素是细胞之间粘附连接的重要组成分子 ,在发育及成年机体的组织结构中起着重要作用。钙依赖粘附素细胞外段决定其结合的特异性 ,其胞浆尾段与胞浆相关蛋白及细胞骨架的相互作用和联系对完整的生理性粘附也必不可少。粘附连接的调节涉及到钙依赖粘附素的量和质变化 ;此外 ,钙依赖粘附素 连环素复合体参与信号转导过程 ,并影响组织的结构和功能。

TLR4在哺乳动物对脂多糖反应中的作用

Toll信号转导通路在果蝇的发育和天然免疫反应中起重要作用 .最近在小鼠进行的定点克隆研究表明Lps位座编码一种Toll样受体TLR4,该受体作为LPS受体复合物的跨膜成分而转导脂多糖 (LPS)信号 ,而其相关蛋白TLR2则在其他病原体微生物介导的细胞反应中起作用 .TLR4的发现使我们对LPS信号转导通路的认识前进了一大步 .

丝裂原活化蛋白激酶信号传导系统

丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）是信号从细胞表面传导到细胞核内部的重要传递者。多种细胞生理过程，如生长、发育、分裂、死亡、以及细胞间的功能同步化等都涉及到ＭＡＰＫ信号传导通路的调节。已证实，在哺乳动物细胞存在多条ＭＡＰＫ传导通路。９０年代初在哺乳动物细胞发现ＥＲＫ介导生长因子有关的刺激引起的细胞反应。近年来又发现和克隆了ＪＮＫ、ｐ３８、ＥＲＫ５（ＢＭＫ１）三个新的ＭＡＰＫ亚族。这些新的ＭＡＰＫ介导了物理、化学应激、细菌产物、炎性细胞因子等多种刺激引起的细胞反应。ＭＡＰＫ通路并非单一的传导通路，而是代表了对不同刺激引起特定细胞生理反应的一种普遍机制。

Mess1的结构分析和功能研究

Mess1是新近鉴定的 STE2 0家族的蛋白激酶 .对 Mess1的基因表达和蛋白功能进行研究 ,发现其 m RNA在鼠组织中广泛分布 ,但在不同细胞系中表达显著不同 ;结构分析表明 ,Mess1蛋白N端是保守的 STE2 0样激酶催化区 ,C端是高度亲水的酸性调节区 ,包含多个潜在的丝氨酸 /苏氨酸磷酸化调节位点 .哺乳动物细胞表达的 Mess1对 MBP显示出激酶活性 ,并发生自主磷酸化 .Mess1可被砷酸盐应激激活 ,但丝裂原 EGF刺激无活化效应 .表明 Mess1可能在蛋白磷酸化的早期过程中发挥作用 ,介导细胞对严重应激刺激引起的特异性反应 .

一个新的鼠STE20家族激酶的克隆和鉴定

从鼠肝ｃＤＮＡ文库克隆了一个新的ＳＴＥ２０ 类蛋白激酶， Ｍｅｓｓ１． 其ｃＤＮＡ长１７ ｋｂ， 编码了一个４９７ 个氨基酸残基的多肽， 与人ＭＳＴ２ 具有９５％ 的氨基酸相同． Ｍｅｓｓ１ 蛋白氨基末端激酶催化区的序列与ＳＴＥ２０ 同源，其羧基末端包含了一簇丝氨酸／苏氨酸和谷氨酸丰富的序列， 被认为具有介导与ＳＨ２ 功能区结合的作用． ＭＥＳＳ１可能通过与含有ＳＨ２

LPS和TNF-α诱导血管内皮细胞ICAM-1蛋白表达的比较

目的和方法采用细胞间接免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜扫描技术 ,研究脂多糖(LPS)和肿瘤坏死因子α(TNF -α)对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)表面细胞间粘附分子 -1(ICAM -1)表达的诱导作用。结果与内皮细胞表面ICAM -1的基础表达相比 ,LPS可诱导内皮细胞表面ICAM -1表达在第8～24h显著增加 ,但第36h有较明显的下降 ;TNF -α也可诱导内皮细胞表面ICAM -1表达在第8～24h显著增加 ,并在36h仍维持在较高水平。LPS和TNF -α与内皮细胞ICAM -1表达之间存在剂量反应关系。结论LPS和TNF -α可诱导血管内皮细胞ICAM -1的表达 ,但内皮细胞在表达ICAM -1时对LPS的长期刺激可能产生耐受性。

一种从琼脂糖凝胶上回收DNA的高效、快捷、经济的方法

目前在国内分子生物学实验室所采用的多种从琼脂糖凝胶上回收DNA的方法普遍存在着各种问题。本文介绍一种新的从琼脂糖凝胶上分离和提取DNA简易装置。实验表明用这种装置回收DNA具有高效、快捷和经济的优点,非常适合在国内实验室普及推广。

蛋白激酶C对脂多糖诱导的诱导型一氧化氮合酶基因表达的调控作用

目的 探讨脂多糖 (LPS)诱导单核 巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)基因表达的分子机制。方法 用LPS刺激诱导RAW2 64 .7细胞 ,观察其对蛋白激酶C(PKC)的激活 ,用Griess还原法测定PKC抑制剂对LPS诱导的一氧化氮 (NO)生成作用 ,并用逆转录PCR(RT PCR)研究其对iNOS基因表达的影响 ;构建iNOS荧光素酶报告基因载体 ,用基因转染及报告基因检测等方法研究LPS刺激RAW2 64 .7细胞对iNOS启动子活性的诱导作用及PKC对其影响。结果 LPS刺激RAW2 64 .7细胞引起PKC磷酸化激活和膜移位 (P <0 .0 1 ) ;LPS刺激RAW2 64 .7细胞 1 2h后即可明显诱导NO生成 (30 .1μmol L± 5 .4μmol L ,P <0 .0 1 )和iNOS基因表达 ;PKC抑制剂H 7可抑制NO的生成 (P <0 .0 1 )和iNOS基因表达 ;LPS刺激诱导iNOS启动子的转录活性 [(2 5 .3± 4 .6)相对荧光素酶活性单位 ,P <0 0 1 ] ,用H 7和钙离子通道阻滞剂异搏定均可抑制其转录活性 (P <0 .0 1 )。结论 LPS刺激RAW2 64 .7细胞 ,通过引起细胞内钙增加和PKC激活诱导iNOS基因表达 ,使NO生成增加 。