皮肤创伤愈合中几种生长因子的免疫组织化学研究

用免疫荧光ABC法动态观察了大鼠皮肤创伤愈合过程中转化生长因子β（TGFβ1、β2、β3）·表皮生长因子（EGF）和白介素-6（IL－6）的分布。背部创伤术后1天，创面血痂中五种生长因子免疫染色均呈阳性。术后3天与7天，肉芽组织中密集的成纤维细胞内除TGFβ3、外其余四种生长因子呈阳性，巨噬细胞呈TGFβ1、TGFβ2与IL－6阳性。术后14天与28天，组织内细胞密度降低而其免疫染色性质不变。本文讨论了这些生长因子与创伤愈合的关系。

胎儿大脑不同区域新皮质组织发生的形态学研究Ⅰ.皮质板和边缘带

对11至38周20例胎儿的额前区、运动区、枕区、颞区、岛区五处的大脑新皮质的组织发生，作光镜研究。其中对11至22周胎儿端脑的皮质板和边缘带及24至38周胎儿大脑皮质的六层结构进行了形态学观察和比较，以探讨胎儿大脑新皮质发育的规律。结果表明：（1）11周胎儿五个脑区的脑室壁中，皮质板均已发育；（2）皮质板在发育过程中，有两个生长高峰期，在各脑区中，高峰期出现的时间有差异；（3）岛区的皮质板发育最早，枕区和颞区最晚；（4）边缘带的发育与皮质板的发育同步。

胎儿大脑不同区域新皮质组织发生的形态学研究 Ⅱ.室管膜层、室管膜下层、中间带和板下带

本文在已对11周至38周胎儿大脑不同区域新皮质组织发生中，端脑壁的皮质板和边缘带进行了形态学研究的基础上，对11周至17周5个胎龄组的9例胎儿的端脑壁在额前区、运动区、枕区、颞区、岛区的室管膜层和室管膜下层，中间带、板下带三部分，利用光镜技术，分别进行了形态学观察及厚度的测量和比较。希望联系皮质板和边缘带的研究，从形态学方面探讨胎儿大脑新皮质发育的规律。结果表明：（1）端脑壁的各区带的发育遵循从内（深）向外（浅）的规则，各区带都有其发育较快时期；（2）11周时，在各脑区都存在较明显的前板下带，13至14周，真正的板下带形成；（3）室管膜层和室管膜下层、中间带、板下带的发育同皮质板和边缘带的发育密切相关。

大鼠胚胎肝贮脂细胞超微结构的发育

本文用透射电镜观察大鼠胚胎发育中肝贮脂细胞的超微结构,并认为大鼠肝贮脂细胞来源于间充质细胞。伴随胚胎发育,贮脂细胞逐渐变小,到出生时尤为明显。10～12天胚胎肝贮脂细胞粗面内质网已发育,游离核糖体丰富,在狄氏隙内可见到胶原原纤维,说明这时贮脂细胞有合成胶原蛋白的功能。13～15天胚胎的少数贮脂细胞内有脂滴,同时可见滑面小管、吞饮现象和糖原颗粒。贮脂细胞与肝细胞之间存在桥粒连接。在16～18天胚胎,贮脂细胞与内皮细胞之间也有桥粒连接,说明贮脂细胞通过细胞连接与肝细胞和内皮细胞紧密连接。这时的贮脂细胞内还可见到微丝、微管,它们除了作为细胞骨架外,可能与调节血窦大小有关。在胚胎发育过程中,含脂滴的贮脂细胞和脂滴数量未见明显增加。

胎儿胃肠道胃泌素细胞与生长抑素细胞的免疫组织化学研究

本文用PAP免疫组织比学法和间接免疫荧光组织化学法,对60例8~38周胎儿胃肠粘膜中胃泌素细胞(G细胞)和生长抑素细胞(D细胞)的发生进行了研究。这两种细胞最早出现于8~9周胎儿十二指肠上皮中,但在固有膜及肌层未观察到。12周后,D细胞出现在胎儿胃肠全长粘膜,G细胞则只见于胃窦及小肠粘膜。本文还对各时期胎儿胃肠粘膜中D细胞和G细胞的分布、数量,以及二者比例变化等进行了观察。胃窦中G细胞与D细胞一样,基底部伸出突起,可能具有旁分泌功能。除胃底腺外,其余部位的D细胞和G细胞多为开放型细胞。本文对这两种细胞在胎儿胃肠发育中的可能功能进行了讨论,并与成人胃窦和十二指肠上部粘膜中G、D细胞的比例进行了对比观察。

大鼠胃肠道的嗜银细胞——免疫组织化学和银浸技术的对比研究

采用在同一切片上,行免疫胶体金染色(IGS)与Grimelius嗜银染色的联合染色方法,对1O只大鼠胃肠道内的内分泌细胞与嗜银细胞进行了对比研究。结果表明,Grimelius嗜银染色法不能显示胃肠道的生长抑素细胞(SS细胞),也基本上不能显示胃泌素细胞(G细胞)。但除胃体外,Grimelius嗜银染色法在胃窦和肠道各段中基本上可用于显示肠嗜铬细胞(EC细胞)。此外,本方法还较其他方法有操作步骤少、结果可靠等优点,可以推广和应用。

人发角蛋白人工腱体内降解的形态学及泛肽、溶酶体酶的活性变化

目的阐明人发角蛋白(HHK)人工腱植入体内后的降解过程.方法选取30只新西兰大白兔,随机分为术后第1、3、6、9、12周实验组和正常对照组.实验组行跟腱切除后植入HHK人工腱,按期进行常规形态学观察和泛肽组化及酸性磷酸酶(AcP)酶细胞化学观察.结果光镜形态学观察显示,人工腱植入后第l周出现人发毛小皮脱落、消失,人发呈均质状,表面附着巨噬细胞和多核巨细胞,到第3～6周可见降解成颗粒的人工腱被巨噬细胞和多核巨细胞吞噬.泛肽酶组化显示第l～3周,人发周围的巨噬细胞、多核巨细胞和成腱细胞内反应呈强阳性,周围组织呈中等阳性,到第9周,大部分人发被降解,泛肽酶反应在基质呈弱阳性,在腱细胞中呈中等阳性.电镜形态学观察显示毛发之间出现成腱细胞,并开始分泌蛋白多糖和前胶原蛋白,第9～12周,人工腱基本被降解,同时完成了新生自体腱的形成.酶细胞化学观察显示被吞噬的颗粒呈AcP酶反应阳性.结论在HHK人工腱的降解过程中,泛肽系统首先在细胞外将大体积的人发降解,降解后期细胞内泛肽系统通路和溶酶体通路分别对吞入的人工腱颗粒进行降解,且具有协同作用.

白藜芦醇促进Ca^(2+)介导的线粒体通透转变孔道开放

目的 为研究白藜芦醇 (Res)抗癌及诱导细胞凋亡的机理 ,观察了Res对线粒体通透转变孔道 (PTP)开放的影响。方法 提取大鼠肝线粒体。用氧电极法检测Res对离体线粒体氧化磷酸化的影响 ;通过紫外分光光度仪检测Res作用下线粒体的膨胀 ,借此测定线粒体PTP的开放状态 ;采用荧光分光光度仪测定Res对线粒体膜电位的影响。结果 白藜芦醇抑制线粒体的呼吸 ,降低线粒体的呼吸控制率 ;能剂量依赖性地促进Ca2 + 诱导的鼠肝线粒体PTP开放 ;并且Res可以加速Ca2 + 介导的线粒体膜电位的升高和消失。结论 白藜芦醇诱发细胞凋亡及抗癌的可能途径之一是抑制线粒体的呼吸 ,促进线粒体内Ca2 +

一氧化氮对血管平滑肌细胞中Bcl-2、Bax、P53和Fas蛋白表达的影响

一氧化氨能抑制血管平滑肌细胞增殖和诱导其调亡。为深入了解一氧化氨对血管平滑肌细胞的生物学效应及其作用机制。本实验应用ＡＣＡＳ５７０共聚焦激光扫描显微镜系统，通过荧光免疫细胞化学方法，对一氧化氮作用下血管平滑肌细胞中调亡相关蛋白Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ、Ｐ５３及Ｆａｓ的表达进行了定量检测。结果发现，一氧化氮能使血管平滑肌细胞中Ｂｃｌ－２表达降低，而使Ｂａｘ、Ｐ５３和Ｆａｓ表达升高。这些结果进一步证明了一氧化氮能诱导血管平滑肌细胞凋亡。同时，也说明Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ、Ｐ５３和Ｆａｓ可能参与一氧化氨诱导的血管平滑肌细胞增殖抑制及调亡发生。

人发角蛋白人工腱体内降解机制的形态学研究

目的 :研究人工腱植入体内后的降解过程及细胞变化。方法 :将人发角蛋白HHK人工腱植入兔离断跟腱中 ,于术后不同时期的取出植入物中段及吻合端取材 ,制作常规石蜡切片。结果 :第一周 ,人工腱表面有一层粘膜状物 ,周围聚集大量的炎症细胞 :第 2周人工腱中人发开始被纤维鞘包裹 ;第 3、6周为人工腱降解活动高峰期 ,且降解步调不一致 ;第 9周人发被完全降解、只残留少量的色素。结论 :从形态学方面来看 ,人工腱植入兔体后经过系列变化 ,最终可被完全降解、吸收。而细胞表现的不仅仅是吞噬作用。

恒河猴骨髓间充质干细胞的生物学特性

目的 探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)的细胞生物学特性。 方法 免疫细胞化学检测细胞ALPase、Vimentin和Laminin活性。流式细胞术测定细胞周期和细胞表面抗原。MTT法测定细胞的生长曲线。原位杂交检测细胞端粒酶活性。 结果 MSCsALPase和Laminin呈阴性 ,Vimentin呈阳性。细胞周期中G1、S、G2期的细胞所占百分比分别为 89 5 %、7 8%、7 7% ;MSCs具有独特的表现特征 ,即CD16 6、CD2 9、CD4 4、CD10 5表达呈强阳性 ,阳性率高达 96 7%以上 ,而CD34和HLA DR呈阴性表达。细胞的平均倍增时间为 32h。细胞端粒酶活性呈阳性反应。 结论 培养的细胞为未分化的骨髓间充质干细胞 ,而不是造血干细胞和成纤维细胞 ,且细胞具有较强的增殖能力。

大鼠垂体远侧部ACTH细胞与GH细胞形态学关系的免疫细胞化学研究

用光镜和电镜免疫细胞化学方法，研究了大鼠垂体远侧部ＡＣＴＨ细胞与ＧＨ细胞的形态学关系，以及在实验性胃溃疡状态下的变化。正常情况下，ＡＣＴＨ细胞与ＧＨ细胞彼此相邻，紧密接触，ＡＣＴＨ细胞的胞质突起可伸到ＧＨ细胞之间或包绕ＧＨ细胞。电镜下，有的ＡＣＴＨ细胞与ＧＨ细胞之间可见有基板相隔，但更常见两者直接贴邻，没有基板分隔，并可见有些细胞之间有细胞连接。在实验性胃溃疡状态下，与ＧＨ细胞相邻的ＡＣＴＨ细胞百分比数显著低于正常对照组，而血清ＧＨ水平则比正常对照组显著升高。本研究结果表明，ＡＣＴＨ细胞与ＧＨ细胞之间在形态学上彼此相邻和密切接触的关系，提示这两种细胞之间可能存在某种功能上的联系。

三种反义c-mycRNA对成纤维细胞NIH3T3的体外生物学效应

目的 了解反义c myc基因稳定整合对正常细胞的影响。 方法 将分别载有c myc第 1、2和 3外显子的反义片段的 3种反义c myc重组逆转录病毒表达载体aM1、aM2和aM3,导入c myc正常表达的正常小鼠成纤维细胞系NIH3T3,并在基因稳定表达后进行各项检测。 结果 3种反义载体导入明显抑制了NIH3T3c myc表达(抑制作用aM2 >aM3>aM1)、PCNA表达 (aM2 >aM1>aM3) ,使细胞体外生长增殖活性下降 (下降程度aM2 >aM1>aM3) ,aM2、aM3还使细胞周期出现了延长和DNA合成减少 ,并使NIH3T3软琼脂集落形成能力下降 (aM2 >aM3)。 结论 反义c mycRNA的导入对正常细胞的生长增殖能力有抑制作用 ,提示局部治疗和靶向治疗在反义c

人发角蛋白人工腱的研究和应用

由于创伤或疾病所造成的肌腱缺损、短缩、变形等导致的肢体功能障碍,需进行手术修复。传统的修复方法是自体腱移植或转位术,但存在材料来源困难等问题,人们便寻找肌腱的代用品。国内外先后有人采用碳素纤维、硅橡胶和未经改构处理的人发等用于制作人工腱。其共同存在的一个主要问题,是人工腱与自体腱的衔接部不能牢固结合,拉应力逐渐衰减,最终在结合部位断裂。人们的视线瞄向了异体腱,通过深低温冷冻和冷冻干燥处理,抑制和破坏了肌腱细胞HLA-Dr的抗原性,在临床上取得了较好的治疗效果。但仍存在材料来源困难,愈合时间长,拉应力衰减等问题。20世纪80年代,人们开始了通过组织工程途径来解决人体肌腱的替代材料。虽然已经取得了较大进展,但毕竟还处于研究阶段,应用于临床,尚需时日。为此,人们仍在致力于寻找和研制肌腱永久性替代物。于是,诞生了人发角蛋白人工腱。其特点①组织相容性好。②可被机体吸收,并诱导形成自体腱。③腱的衔接部位能组织愈合,结合牢固,拉应力无明显衰减。④可屈性和绕弯性好。⑤未出现影响功能活动的粘连,无需行Ⅱ期松解术。⑥压力蒸汽灭菌,安全可靠。贮存、运输方便。⑦原料来源充足。

主动脉平滑肌细胞在三维培养中产生弹性纤维的研究

目的 研究主动脉平滑肌细胞 (ASMC)在仿真皮替代物的三维培养中是否能产生弹性纤维。 方法 取 1周龄SD大鼠胸主动脉 ,进行原代和传代培养 ,以α肌动蛋白免疫细胞化学染色鉴定平滑肌细胞。然后 ,将ASMC与胶原、甲壳素及糖胺多糖组合形成的凝胶混合 ,进行三维培养 ;培养 1周和 2周后 ,用Gomori醛复红染色和弹性蛋白免疫细胞化学染色 ,检测ASMC胶原凝胶。 结果 传代细胞经α肌动蛋白免疫细胞化学染色鉴定 ,98%以上为ASMC。培养 1周和 2周的ASMC胶原凝胶中 ,均显示有弹性纤维存在。 结论 ASMC在仿真皮替代物的三维培养中能够产生弹性蛋白 ,并形成弹性纤维。

bcl-2在一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的 对一氧化氮 (NO)作用下血管平滑肌细胞 (VSMC)中 Bcl- 2蛋白表达的变化进行定量检测 ,并进一步探讨 bcl- 2过表达对 NO诱导 VSMC凋亡的影响 ,以确定 bcl- 2在 NO诱导 VSMC凋亡中的作用。 方法 以亚硝基乙酰青霉胺 (SNAP)作为 NO供体 ,将 5～ 8代的大鼠 VSMC接种于 Petri培养皿中 ,条件培养液培养 2 4～48h,换成含 0 .5 m mol/ L SNAP的条件培养液 ,8～ 10 h后 ,固定细胞 ,间接免疫荧光法检测抗原 ,借助粘附式细胞仪对细胞中 Bcl- 2蛋白表达进行定量检测。通过逆转录病毒载体将 bcl- 2基因导入 VSMC,使其过量表达 ,检测SNAP作用下细胞的凋亡率 ,并与未经转染的 VSMC进行比较。 结果 SNAP使得 VSMC中 Bcl- 2蛋白表达下调 ,而 bcl- 2过表达能够抑制 SNAP作用下 VSMC的凋亡。 结论 下调 bcl- 2表达是 SNAP诱导 VSMC凋亡的途径之一。

冠心病患者血小板的形态计量学研究

本文用形态计量学方法分析了冠心病患者的血小板及其超微结构。发现血小板的形态和超微结构的体积、表面积、长度、数量等有关参数有显著的计量改变,提示冠心病时血小板处于高敏状态(潜在活化型),而高敏血小板可能起因于某些因素对血小板生成过程的影响。