组织胚胎学投影教材的制作与应用

组织胚胎学是一门重要的医学基础课程,其主要内容为机体微观形态及其功能的描述,微观形态在我们的宏观世界里属于看不见,摸不着的东西,因此在学习的过程中教师的语言描述显得十分重要,如何使学生能掌握并牢记重点内容是我们教学中的难点,而掌握好重点和难点关键是理解微观形态和功能的相关.学习组胚时的学生均为医学院的新生,对组织胚胎学内容非常生疏,记忆起来更觉得困难.怎样才能更好的运用宝贵的课堂教学时间,而带领学生尽快地适应新课程的学习、掌握并学到更多的知识,是一名教师的职责.近两年来我在教学实践中编写了投影教材,并改进了投影胶片的制作方法,实践表明,它可以帮助教员达到上述目的,并收到了良好的教学效果,现介绍如下.1 投影教材的选材与编排投影教材力求重点突出,对每次课的内容进行高度的概括,语言精练、准确,用尽量少的字数表达最完整最准确的概念.在此基础上做到层次分明,条理清楚,从大的概念过度到小的概念油浅入深使之达到化难为易,化繁为简,易记易懂的效果.如在讲授基本组织学的上皮组织时,首先列出上皮组织的几大特点,接下去介绍上皮组织的分类,然后再详细介绍各种上皮的特点及其形态中的特殊结构.遇重点和难点,做出适当的标记,以求画龙点睛.

人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺生物反应器的研究

目的构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)乳腺定位表达载体,使其在牛乳汁中高效表达,从而建立牛乳腺生物反应器。方法RT-TD-PCR法克隆目的基因,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含t-PA-cDAN的乳腺定位表达载体;采用显微注射法和乳腺注射法将融合基因转入小鼠的受精卵和小鼠及牛的乳腺组织中。结果显微注射法和乳腺注射法转基因后,t-PA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论所构建的乳腺定位表达载体可有效地使t-PA基因在小鼠和牛乳汁中表达,t-PA基因的表达不受转基因方法的影响,但t-PA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异,可能受着不同的因素或调控系统的影响。

胎肝中肝干细胞的免疫组织化学研究

目的 采用免疫组织化学方法显示不同时期人胚胎肝脏的干细胞 ,分析肝干细胞的形态与分布特点及发育过程中干细胞在肝脏中的迁徙 ,探讨肝脏的发生发育及肝内干细胞的来源。方法 不同发育时期胎儿肝脏 ,取材、固定、制成石蜡切片 ,ABC法检测肝干细胞特异性的表面标记物CD34、CK19、C - 11和OV6。结果 胎肝内汇管区周边界板处有卵圆样细胞表达CD34、C 11、CK19和OV6 ,阳性细胞紧密排列成管 ,呈鞘样包绕着早期汇管区 ,部分包绕着初级汇管区 ,随着次级汇管区的成熟 ,卵圆样干细胞逐渐局限于赫令氏管周围 ;此外 ,胚胎发育的不同阶段均可见CD34、OV6阳性的单核样细胞分散在肝索、肝血窦之内 ,多见于汇管区的间充质组织之内 ,肝血管内鲜见。结论 胚胎发育早期汇管区周边界板处含有丰富的干细胞 ,可能是肝脏发育的起点 ,这些干细胞逐渐分化为胆管上皮样细胞 ,然后分化为肝细胞和胆管上皮细胞 ;造血干细胞是肝内的另一干细胞来源 ,造血干细胞在肝内受到诱导作用分化为小部分的肝实质细胞。

感染冠状病毒的大鼠胸腺组织超微结构观察

目的通过对感染大鼠冠状病毒(rat coronavirus,RCV)的大鼠胸腺组织进行超微结构的研究,阐明RCV在细胞内形成的形态学机制.方法用在进行自噬性形态学研究中的Wistar大鼠做模型,常规电镜取材、固定、包埋、切片和观察.结果胸腺上皮细胞的胞质内出现大小不等的内质网池,并相互融合形成巨大的内质网湖,湖内充满RCV颗粒,称为病毒包涵体.病毒在内质网囊壁上通过出芽方式进入内质网湖基质,发育为成熟的RCV,最终排出于细胞外.病毒颗粒呈圆形,直径约100～130 nm.病毒胞浆成均质状,病毒的膜蛋白有二层,外层为包膜,内层为核衣壳.包膜与核衣壳之间为低电子密度的中间层,其内有时可见1～2层较薄的膜样结构.钉突成放射状贯穿包膜,其内侧端连于核衣壳,外侧端膨大,由一层絮状的糖蛋白包绕,形成日冕状.病毒颗粒分布在胸腺上皮细胞的内质网湖、胞浆、内吞体/溶酶体以及胸腺上皮细胞间,溶酶体内的病毒无包膜和核衣壳.结论内质网湖参与RCV包膜的形成,从细胞外侵入的RCV均在内吞体/溶酶体内脱去包膜和核衣壳,脱下的包膜和核衣壳被其降解,而RCV在胸腺上皮细胞基质中进行复制.在胸腺细胞内未见有RCV.

人组织型纤溶蛋白酶原激活剂基因的克隆与鉴定

目的获得编码人组织型纤溶蛋白酶原激活剂(humantissueplasminogenactivator,ht-PA)的基因。方法从Bowesmelanoma细胞株中提取总RNA,然后通过,RT-TouchdownPCR(RT-TDPCR)法扩增目的片段。所得目的片段酶切后与载体pSP72连接,酶切鉴定并测序。结果酶切图谱与预期的一致,测序结果与Genebank上公布的一致。结论ht-PA克隆成功,为对该基因进一步研究和人工修饰奠定了基础。

乳腺注射法表达人组织型纤溶酶原激活剂的研究

目的 :构建tPA乳腺定位表达载体 ,使其在牛乳汁中高效表达 ,观察目的基因表达的规律及其影响因素 ,为建立新型牛乳腺生物反应器提供理论基础。方法 :RT PCR法克隆目的基因 ,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含tPA cDNA的乳腺定位表达载体 ;采用乳腺注射法将融合基因转入小鼠及牛的乳腺组织中。结果 :乳腺注射外源基因后 ,tPA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论 :乳腺注射法可使目的基因在乳腺组织中稳定地表达较长的时间 ,其表达量与显微注射法没有明显的差异 ,表明外源基因的表达不受转基因方法的影响。但tPA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量 ,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异 ,可能受着不同的因素或调控系统的影响。

人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺表达的研究

目的：采用基因工程和转基因技术，以牛乳腺作为生物发酵器，生产天然高活性的人组织型纤溶酶原激活剂(tPA)，探索生物制药的新方法。方法：RT-PCR法克隆人tPA cDNA，经体外扩增、测序和酶切鉴定后，装入含酪蛋白基因β-casein启动子的乳腺特异性表达载体上，扩增、酶切、纯化。采用脂质体介导法，

胃肠道肿瘤的组织化学和免疫组织化学研究

采用组织化学和免疫组织化学方法对胃肠道脾性肿瘤组织及肿瘤周围组织内分泌细胞进行了观察。结果表明:良性腺瘤有腺癌组织中存在内分泌细胞,许多肿瘤组织及胂瘤周围组织中可同时存在2种或2种以上的免疫活性内分泌细胞。这些内分泌细胞的存在可能对肿瘤的发生、发展以及在肿瘤免疫方面起到重要作用。本文研究的结果支持了内分泌细胞内胚层起源说。本试验结果还显示嗜银细胞和免疫活性5—羟色胺(irSer)细胞的分布存在着差异。

大蒜精油抑制白细胞介素-1α诱导的单核细胞-内皮细胞粘附及机理探讨

目的：观察大蒜精油（ＥＧＯ）对白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）诱导的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）上血管细胞粘附分子－１（ＶＣＡＭ－１）表达及单核细胞粘附率的影响。方法：胰酶消化法分离ＨＵＶＥＣ，用Ｕ９３７单核细胞与之联合培养，分别加入ＩＬ－１α和ＥＧＯ加ＩＬ－１α孵育，计算单核细胞－内皮细胞粘附率，ＶＣＡＭ－１免疫荧光染色，粘附细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）测定平均荧光值。结果：单独培养及联合培养的情况下，ＥＧＯ均对ＩＬ－１α诱导的ＨＵＶＥＣ上ＶＣＡＭ－１表达具有明显的抑制作用，并能显著下调ＩＬ－１α作用下单核细胞内皮细胞的粘附。结论：ＥＧＯ具有抗单核细胞与血管内皮细胞粘附的作用，其机理可能是通过抑制内皮细胞表面粘附分子的表达。

人发角蛋白人工腱诱导自体腱形成中胶原原纤维的形态学变化

目的观察人发角蛋白(HHK)人工腱诱导自体腱形成过程中胶原原纤维形成的形态学变化。方法制备肌腱损伤动物模型,植入HHK人工腱,于术后3、6、9、12、16周取出,进行光镜及电镜观察。结果自体腱形成过程中,先后有一级、二级和三级胶原原纤维形成。结论HHK人工腱诱导自体腱形成过程中,人工腱植入区肌腱断端和腱膜下的腱细胞去分化,分泌大量的胶原蛋白,并在细胞外生成一级胶原原纤维,再逐级融合形成二级和三级胶原原纤维,最终多数腱细胞胶原化而消失。

肾小球系膜细胞的分离和培养

目的分离、培养和鉴定正常人肾小球系膜细胞。方法筛网滤过分离正常人肾小球系膜细胞,同时采用免疫荧光技术,利用异硫氰酸荧光素(FITC)间接标记单克隆抗体:抗Ⅷ因子相关抗原抗体、抗结蛋白抗体、抗角蛋白抗体、抗细胞角蛋白抗体、抗Ⅳ型胶原抗体、抗纤维连接蛋白抗体、抗层粘连蛋白抗体对系膜细胞特有的中间微丝进行鉴定。并采用同期培养的同一来源的肾小球内皮细胞作对照。结果抗Ⅷ因子相关抗原、抗角蛋白和抗细胞角蛋白抗体表达均为阴性,而抗结蛋白抗体、抗Ⅳ型胶原抗体、抗纤维连接蛋白抗体、抗层粘连蛋白抗体为阳性,说明培养的细胞为系膜细胞。结论该种方法分离培养的细胞经过免疫荧光染色鉴定为肾小球系膜细胞。

一氧化氮抑制血管损伤引起的新内膜形成

体内一氧化氮由一氧化氮合酶催化L－精氨酸合成，具有舒张血管、调节血管张力、抑制血小板粘附聚集、调节白细胞功能等多种生物学活性，尚可抑制血管损伤引起的新内膜形成。血管平滑肌细胞（VSMCs）的增殖、迁移和分泌在新内膜形成中有重要作用。作者就该方面的最新进展作一介绍。

建立转基因动物的方法及其进展

本文从显微注射法、逆转录病毒感染法、胚胎干细胞法、精子载体法和体细胞核移植法等5个方面回顾了建立转基因动物的方法,同时综述了其研究进展,并对其前景进行了展望。

神经中间丝蛋白Nestin在胎肝中的表达

目的采用免疫组织化学方法标记不同发育时期人胚胎肝干细胞中巢蛋白(Nestin)的表达,探讨肝干细胞新的表面标志蛋白。方法取材不同发育时期胎儿肝脏,固定并制成石蜡切片,ABC法标记神经前体细胞的特异性表面标记Nestin在胎肝干细胞中的表达。结果汇管区周边界板处卵圆样干细胞表达Nestin阳性,Nestin阳性细胞呈单层紧密排列成管,呈鞘样包绕着早期汇管区,部分包绕着初级汇管区,随着次级汇管区的成熟,Nestin阳性卵圆样干细胞逐渐局限于赫令管周围;此外胚胎发育不同时期可见Nestin阳性单个核样细胞散布在肝实质内。结论肝脏内有Nestin表达阳性的干细胞存在,其功能、来源需要进一步深入研究。

国人胎儿肺泡发育与上皮细胞分化的透射电镜观察

目的 观察国人胎儿肺泡发育及肺泡上皮的分化过程。方法 自愿水囊引产的国人胎儿10～34周肺组织，HE染色光镜及透射电镜观察。结果 胎儿10～16周。胎肺的发育以支气管树分支和管壁结构的逐渐完善为主，终蕾上皮为柱状的未分化细胞。17～24周。支气管树的分支明显增多，上皮细胞的分化趋于成熟。胎儿25周以后，支气管远端形成许多内壁光滑的原始肺泡。其上皮细胞以一种胞核较大。胞质核细胞器较少的原始细胞为主，但开始分化出Ⅱ型肺泡细胞。此时，肺泡上皮亦出现少量扁平的I型肺泡细胞。但以Ⅱ型肺泡细胞为主。32周时，肺泡的发育逐渐成熟，I型肺泡细胞逐渐增多。结论 在人胎肺的发育过程中，Ⅱ型肺泡细胞的出现并不明显早于I型肺泡细胞，原始肺泡上皮所衬的较幼稚的细胞，可能是成熟肺泡上皮细胞的干细胞或祖细胞，I型肺泡细胞的出现是胎肺开始具有换气功能的标志，32周时换气功能趋于完善。

人反义c-myc重组逆转录病毒表达载体pLNC-aM2和pLNC-aM3的构建

ｃ－Ｍｙｃ在血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ＶＳＭＣ）增殖、迁移和表型转换（收缩型→合成型）中起着关键作用。为更好地调研ｃ－ｍｙｃ分子中不同区域的作用效应，了解ｃ－ｍｙｃ的转录调控机制，进而找出最佳的反义封闭靶区域，为ＶＳＭＣ增殖和其他增生性疾病的基因治疗提供依据，我们采用分子克隆技术，分别构建了人ｃ－ｍｙｃ第１、第２和第３外显子的反义逆转录病毒表达载体。本文将介绍第２，３外显子反义载体ｐＬＮＣ－ａＭ２和ｐＬＮＣ－ａＭ３的构建过程。

三种反义c-myc RNA对血管平滑肌细胞凋亡的影响

为了了解反义ｃ－ ｍｙｃ 基因在平滑肌细胞中持续、稳定表达对细胞凋亡的影响，将分别载有ｃ－ ｍｙｃ 第１ 、第２ 和第３ 外显子反义片段的三种重组逆转录病毒表达载体ａＭ１、ａＭ２ 和ａＭ３ ，导入体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞，并于持续筛选１ 个月后进行稳定表达检测。结果表明，ａＭ３ 的导入和稳定表达使平滑肌细胞的凋亡率达到对照组的３ ．６ 倍，并伴有明显的细胞体积缩小，而ａＭ１ 和ａＭ２ 的凋亡诱导作用则明显弱于ａＭ３。另外，在超微结构的改变上，转染了ａＭ３ 和ａＭ１ 的平滑肌细胞出现凋亡和自噬的改变，而转染了ａＭ２ 的平滑肌细胞则普遍出现明显的肌丝束。提示，反义ｃ－ ｍｙｃ 的稳定表达促进平滑肌细胞的凋亡，而ａＭ３ 载体在体外促使平滑肌细胞发生凋亡和自噬的能力最强。

骨关节炎患者血清中基质金属蛋白酶-2、-9的明胶酶谱分析

为探讨基质金属蛋白酶-2、-9在骨关节炎发病中的作用,应用明胶酶谱分析方法研究其在骨关节炎患者血清中的表达水平。实验对象为27例膝骨关节炎患者,对照组为7例外伤骨折患者。结果发现病例组血清中基质金属蛋白酶-2和-9的表达水平均明显高于对照组(P<0.05)。该结果显示基质金属蛋白酶-2和-9可能在骨关节炎的发病过程中均起着重要的作用。

人胎肺发育不同阶段端粒酶逆转录酶的表达及意义

目的检测端粒酶逆转录酶(hTERT)在人胎肺发育不同阶段的表达特征,探讨其在胎肺上皮干细胞发育、分化过程中的作用及意义.方法对孕妇自愿捐献的胎龄为10～34周的引产胎儿肺组织,用免疫组织化学技术检测hTERT的表达.结果胎龄10周的肺组织即检测到hTERT的表达,主要表达于正在分支的支气管原始上皮细胞浆内.随着胎肺发育,阳性表达的细胞逐渐向远端呼吸道迁移.到发育晚期,呼吸道上皮hTERT表达较前逐渐减弱,强阳性表达的细胞仅集中在细支气管的基底膜和少数新生肺泡内,在形态上类似基底细胞和Ⅱ型肺泡细胞.结论在人胎肺发育中hTERT的表达可能是肺上皮干细胞或祖细胞维系其未分化状态和自我更新能力的重要标志;对保证支气管上皮和肺泡上皮细胞持续正常分化和再生,维持上皮组织的完整性起着重要的作用.