基于Wnt/β-catenin信号通路探讨益气活血法对缺血性脑中风急性期大鼠脑神经元的保护作用

【目的】观察益气活血法对缺血性脑中风急性期大鼠脑神经元的保护作用及机制。【方法】将40只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组、益气活血组,每组10只。除假手术组外,其余各组大鼠采用线栓法制备急性期缺血性脑中风模型。尼莫地平组大鼠给予腹腔注射0.5 mg/kg尼莫地平注射液,益气活血组大鼠给予腹腔注射1.8 mL/kg黄芪注射液和7.2 mg/kg川芎嗪注射液,假手术组和模型组大鼠给予腹腔注射等体积生理盐水,每天1次,连续4 d。治疗前和治疗后12、24、48、72、96 h评估Longa神经功能评分。给药结束后,苏木素-伊红(HE)染色法观察脑神经元损伤情况;脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)染色法检测脑神经元凋亡情况;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测脑组织半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达水平;酶联免疫吸附分析(ELISA)检测脑组织白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测脑组织Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路相关蛋白的表达水平。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分升高,脑组织神经元凋亡率升高,脑组织IL-6、TNF-α、MDA水平升高,GSH-Px、SOD活性降低,Caspase-3、Bax mRNA表达水平升高,Bcl-2 mRNA表达水平降低、Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平降低,糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)磷酸化水平升高(均P<0.05),脑组织神经元可见明显损伤。与模型组比较,益气活血组大鼠神经功能缺损评分降低,脑组织神经元凋亡率降低,脑组织IL-6、TNF-α、MDA水平降低,GSHPx、SOD活性升高,Caspase-3、Bax m RNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达水平升高,Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平升高,GSK-3β磷酸化水平降低(均P<0.05),脑组织神经元损伤得到改善。【结论】益气活血法对缺血性脑中风急性期大鼠脑神经元的保护作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征与急性缺血性脑卒中预后的关系

目的探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)与急性缺血性脑卒中预后的关系。方法连续收集2018年1月~2020年1月郑州市第三人民医院及郑州市第二人民医院神经内科收治的急性缺血性脑卒中患者91例,根据呼吸暂停低通气指数(AHI)分为单纯脑梗死组33例(AHI<5/h),轻度OSAHS组18例(AHI 5~14/h)及中重度OSAHS组40例(AHI≥15/h)。对比3组一般资料、血管危险因素、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、Barthel指数及改良的Rankin量表(mRS)评分的差异。随访脑卒中发病后3个月,3组Barthel指数及mRS评分的差异。结果3组性别、年龄、BMI、颈围、糖尿病、冠心病、高脂血症、心房颤动和NIHSS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。单纯脑梗死组、轻度OSAHS组和中重度OSAHS组高血压患病率比较,差异有统计学意义(48.5%vs 61.1%vs 77.5%,P=0.036)。3组入院当天Barthel指数及mRS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组发病后3个月Barthel指数和mRS评分比较,差异有统计学意义(P<0.01)。中重度OSAHS组发病后3个月Barthel指数明显低于单纯脑梗死组[(77.0±7.1)分vs(85.3±7.2)分,P<0.05],mRS评分明显高于单纯脑梗死组[(2.2±0.8)分vs(1.3±0.8)分,P<0.05]。结论中重度OSAHS与急性缺血性脑卒中预后不良结局有关。

益气活血法通过抑制细胞焦亡减轻缺血性脑中风急性期大鼠脑组织炎症

【目的】探讨益气活血法对缺血性脑中风急性期大鼠脑组织炎症的作用及机制。【方法】将47只SD大鼠留取9只作为假手术组,其余大鼠建造缺血性脑中风急性期模型。将造模成功的30只大鼠随机分为中药低、高剂量组及模型组,每组10只。中药低、高剂量组灌胃益气活血方汤药4.4、8.8 g/kg,模型组、假手术组灌胃等体积生理盐水,每天1次,连续给药15 d。给药第3、5、7天,测定大鼠神经功能变化;给药结束后,以2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察大鼠脑梗死情况,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠脑组织匀浆中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-18含量,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脑组织病理学表现,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测大鼠脑缺血半暗带组织嘌呤能受体P2X7(P2RX7)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1、Caspase-11、消皮素D(GSDMD)表达水平。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分、脑梗死率,脑组织IL-1β、TNF-α、IL-18水平,脑缺血半暗带组织P2RX7、Caspase-1、Caspase-11、GSDMD蛋白相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,中药低、高剂量组大鼠神经功能评分、脑梗死率,脑组织IL-1β、TNF-α、IL-18水平,脑缺血半暗带组织P2RX7、Caspase-1、Caspase-11、GSDMD蛋白相对表达量降低(P<0.05)。模型组大鼠脑组织大面积炎症渗出,水肿明显,细胞崩解,神经元空泡变性或呈点状坏死,而中药低、高剂量组脑组织炎症渗出、水肿明显减轻,细胞形态、神经元空泡变性改善。【结论】益气活血法可通过抑制细胞焦亡,减轻缺血性脑中风急性期大鼠脑组织炎症。

阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征对急性缺血性卒中患者脑血管反应性的影响

目的探讨阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)对急性缺血性卒中患者脑血管反应性(cerebrovascular reactivity,CVR)的影响。方法前瞻性连续入组2017年10月-2020年8月住院治疗的急性缺血性卒中患者,入院2周内完善多导睡眠监测,根据是否合并OSAHS及呼吸暂停低通气指数(apnea hypopnea index,AHI)将患者分为非OSAHS组、轻度OSAHS组(AHI 5~15次/小时)和中重度OSAHS组(AHI>15次/小时)。在完成多导睡眠监测后24 h内对患者进行TCD检查,检测CVR指标包括平静呼吸时、屏气后大脑中动脉的平均血流速度(Vm),计算屏气指数(breath holding index,BHI)。比较三组间CVR指标的差异,并在中重度OSAHS组中分析CVR指标与入院时和发病3个月时NIHSS评分的相关性。结果共纳入228例急性缺血性卒中患者,男性140例(61.4%),其中非OSAHS组49例,轻度OSAHS组42例,中重度OSAHS组137例。中重度OSAHS组BMI、高血压比例、3个月时NIHSS评分均高于非OSAHS组,差异有统计学意义。中重度OSAHS组平静呼吸时Vm低于非OSAHS组(57.4±10.6 cm/s vs 62.1±12.2 cm/s,P=0.010)和轻度OSAHS组(57.4±10.6 cm/s vs 59.6±11.2 cm/s,P=0.007),BHI低于非OSAHS组(1.4%±0.6%vs 1.7%±0.7%,P=0.002)和轻度OSAHS组(1.4%±0.6%vs 1.5%±0.6%,P=0.001)。中重度OSAHS组发病3个月时NIHSS评分与平静呼吸时Vm(r=-0.696,P<0.001)和BHI(r=-0.832,P<0.001)呈负相关。结论伴中重度OSAHS的急性缺血性卒中患者CVR明显下降,而且CVR的下降可能与急性缺血性卒中患者的预后不良有关。

呼吸暂停低通气指数对急性缺血性脑卒中短期预后的预测价值

目的 探讨呼吸暂停低通气指数(AHI)对急性缺血性脑卒中(AIS)预后的预测价值。方法 纳入2018年1月~2022年2月郑州市第三人民医院神经内科收治的AIS患者193例,根据随访3个月改良的Rankin量表(mRS)评分分为预后良好组(mRS评分≤2分)121例和预后不良组(mRS评分>2分)72例,对比2组间AHI、入院时美国国立卫生研究院卒中量表评分等差异。采用ROC曲线分析AHI对AIS发病后3个月预后的预测作用。结果 预后不良组年龄和AHI明显高于预后良好组(P<0.05,P<0.01)。年龄(OR=1.108,95%CI:1.031~1.190,P=0.005),AHI(OR=1.060,95%CI:1.018~1.103,P=0.004)是AIS发病3个月预后不良的危险因素。用于预测AIS发病后3个月预后不良的AHI最佳截断值为19.2次/h, ROC曲线下面积为0.640(95%CI:0.536~0.745,P=0.012)。结论 AHI是AIS发病后3个月预后的独立预测因子,AHI升高提示患者预后不良。

脂蛋白相关磷脂酶A2预测阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者伴缺血性脑血管病的临床价值

目的探讨脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)对阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者伴缺血性脑血管病(ICVD)的预测作用。方法回顾性分析93例OSAHS患者的临床资料,根据其是否患有ICVD,分为OSAHS伴ICVD组(38例)和OSAHS不伴ICVD组(55例)。比较2组人口统计学资料、血管危险因素、Lp-PLA2水平的差异,并通过二元logistic回归分析和受试者工作特征曲线(ROC)分析Lp-PLA2对OSAHS患者伴ICVD的预测作用。结果(1)与OSAHS不伴ICVD组相比,OSAHS伴ICVD组的年龄较大,呼吸暂停-低通气指数(AHI)、氧饱和度指数(ODI)及Lp-PLA2水平较高,高血压病的患病率较高(P<0.05)。(2)logistic回归分析发现年龄越小、AHI越低是OSAHS患者合并ICVD的保护因素,Lp-PLA2升高是OSAHS患者伴ICVD的危险因素。(3)Lp-PLA2预测OSAHS患者伴ICVD的ROC曲线下面积为0.805(95%CI:0.710~0.880,P<0.001),Lp-PLA2最佳预测值为257.39 ng/mL(敏感度86.8%,特异度67.3%)。结论Lp-PLA2与OSAHS患者ICVD的发生有关,升高的Lp-PLA2水平可能对OSAHS患者伴ICVD具有一定的预测价值。

急性缺血性卒中患者阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征与相关血液生化标志物的临床研究

目的探讨急性缺血性卒中患者阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)与相关血液生化标志物的关系。方法纳入2018年1月-2019年12月郑州市第三人民医院及郑州市第二人民医院收治的急性缺血性卒中患者,根据多导睡眠图检测结果分为缺血性卒中伴OSAHS组和单纯缺血性卒中组,对比两组间一般资料、hs-CRP、D-二聚体(D-dimer,D-D)及纤维蛋白原降解产物(fibrinogen degradation products,FDP)的差异。根据OSAHS严重程度,分为轻度OSAHS组,中度OSAHS组,重度OSAHS组,并比较3组患者hs-CRP、D-D及FDP的差异。结果共纳入98例患者,其中缺血性卒中伴OSAHS组59例,单纯缺血性卒中组39例;缺血性卒中伴OSAHS组中轻度OSAHS19例,中度OSAHS16例,重度OSAHS 24例。缺血性卒中伴OSAHS组的BMI(26.33±4.16 kg/m^2 vs 23.93±3.83 kg/m^2,P=0.048)、hs-CRP(11.95±3.11 mg/L vs 6.13±1.69mg/L,P<0.001)、D-D[0.78(0.38~1.21)mg/L vs 0.25(0.14~0.30)mg/L,P<0.001]、FDP(3.36±1.39μg/mL vs 2.30±0.88μg/mL,P=0.005)均高于单纯缺血性卒中组。轻度OSAHS组(7.92±2.15 mg/L,P<0.001)和中度OSAHS组(11.47±2.54 mg/L,P=0.005)hs-CRP水平均低于重度OSAHS组(15.31±3.16 mg/L),轻度OSAHS组hs-CRP水平低于中度OSAHS组(P=0.012)。轻度OSAHS组D-D水平低于重度OSAHS组[0.42(0.23~0.98)mg/L vs 0.98(0.93~1.85)mg/L,P=0.023],轻度OSAHS组FDP水平低于重度OSAHS组(2.74±0.93μg/mL vs 4.19±1.55μg/mL,P=0.012)。结论与不伴OSAHS的急性缺血性卒中患者相比,伴有OSAHS的急性缺血性卒中患者血清hs-CRP、D-D、FDP水平更高。

间歇低氧大鼠淋巴细胞促进脑血管内皮细胞凋亡的机制

目的探讨间歇低氧大鼠淋巴细胞促进脑血管内皮细胞内质网应激凋亡作用及机制。方法取SD雄性大鼠30只,分为正常对照组、间歇低氧组、抗低氧组,每组各10只;抗低氧组、间歇低氧组建立间歇低氧大鼠模型,并分别于间歇低氧前半小时腹腔注射100 mg/kg超氧阴离子清除剂和等量生理盐水,1次/d,然后间歇低氧干预8 h/d;正常对照组维持常氧量,干预6周;各组干预后分离淋巴细胞,测定CD4^(+)、CD8^(+)T细胞凋亡率;取对数期内皮细胞RBE4,与各组分离淋巴细胞共培养,命名为正常对照RBE4组、间歇低氧RBE4组、抗低氧RBE4组;4 h后测定培养基上清液中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(Malonaldehyde,MDA)水平、内皮细胞凋亡率、内皮细胞中C增强子结合蛋白同源蛋白(Cenhancer binding protein homologous protein,CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(Glucose regulatory protein 78,GRP78)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cysteine containing aspartate-specific proteases-3,Caspase-3)mRNA及蛋白水平。结果与正常对照组比较,间歇低氧组、抗低氧组CD4^(+)、CD8^(+)T细胞凋亡率降低,且间歇低氧组低于抗低氧组(P<0.05);与正常对照RBE4组比较,间歇低氧RBE4组、抗低氧RBE4组上清液中SOD水平降低、MDA水平增高、RBE4凋亡率增高、CHOP,Caspase-3 mRNA及蛋白水平升高、GRP78 mRNA及蛋白水平降低(P均<0.05);与抗低氧RBE4组比较,间歇低氧组SOD水平降低、MDA水平增高、RBE4凋亡率增高、CHOP,Caspase-3 mRNA及蛋白水平升高、GRP78 mRNA及蛋白水平降低(P均<0.05)。结论间歇低氧大鼠淋巴细胞促进脑血管内皮细胞凋亡可能通过激发内质网应激而发挥作用。