抗preS1分子高效单克隆抗体的制备及其在血清LHBs检测中的应用

目的制备可用于血清LHBs检测的针对preS1高效单克隆抗体并进行初步临床应用研究。方法对乙肝preS1区段基因（B基因型,adr血清亚型）全长序列（1～119 aa）进行密码子偏嗜性改造后,克隆入质粒pET32a构建原核表达重组质粒并转化入大肠杆菌BL21（DE3）,采用离子交换、HIS亲和层析柱以及肠激酶（EK酶）酶切等方法建立preS1重组蛋白的纯化工艺,制备筛选单克隆抗体的筛选原;综合应用多种生物信息学分析软件预测LHBs preS1区段B细胞表位肽preS1（36～58 aa）,合成该肽段后与BSA交联,通过新型免疫程序制备单克隆抗体;建立以抗preS1高效单克隆抗体为基础的ELISA方法,并对临床血清LHBs进行检测分析。结果获得了高纯度的重组preS1蛋白,HPLC分析其纯度为98%,通过新型免疫程序制备的抗preS1单克隆抗体1-E6（IgG1）特异性好,对preS1（LHBs）的检出率（83.3%）高于其他同类抗体（P〈0.01）。结论获得高效特异的抗preS1单克隆抗体1-E6以及高纯度重组preS1蛋白免疫检测标准品。