口腔微生态的研究进展

口腔微生物与人体始终处于动态生态平衡状态,对于维护人体的健康发挥重要的作用,也与多种口腔疾病的发生发展有密切关系.随着现代科学技术的发展,越来越多的新技术、新方法用于口腔微生态领域的研究,这使得人们对口腔微生态的认识不断深入.以下将从口腔微生态的组成、口腔微生态与机体的关系及其研究方法三个方面简要介绍近年来口腔微生态的相关研究进展.

百日咳丝状血凝素分子中强免疫原性片段的筛选、克隆与表达

目的筛选百日咳丝状血凝素分子中强免疫原性的片段,并对其进行克隆及表达。方法采用生物信息学软件对丝状血凝素分子的结构进行预测,从中筛选出具有强免疫原性的片段FHAs。经PCR扩增,T-A克隆后,构建表达质粒pET-22b(+)-FHAs,酶切鉴定正确后测序。将测序正确的质粒转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白的表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE分析及Western blot鉴定。结果从丝状血凝素分子中筛选出具有138个氨基酸的肽段FHAs,经PCR扩增,得到约400bp的目的基因片段,构建的重组质粒经双酶切和测序鉴定,证明质粒构建正确,重组工程菌pET-22b(+)-FHAs/BL21经IPTG诱导,目的蛋白的表达量在50%以上,主要以包涵体形式存在。Western blot分析证实该蛋白能与抗FHA单抗发生反应。结论筛选出的肽段FHAs具有强的免疫原性和免疫反应特异性,为百日咳基因工程疫苗的研究奠定了基础。

抗类鼻疽伯克霍尔德菌多抗血清的制备及评价

目的制备抗类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudoamllei,其抗原简写为BP)多抗血清,评价不同处理方式对抗原免疫原性的影响。方法采用超声破碎、甲醛灭活、热灭活3种方式处理细菌抗原接种新西兰兔和BALB/C小鼠,检测不同抗原免疫动物抗血清的ELISA效价及凝集试验效价。结果 (1)ELISA方案最佳条件:二抗稀释度为1/8000,抗原包被浓度为4μg/mL或8μg/mL;凝集反应最佳条件:细菌浓度为6×109CFU/mL、凝集温度为37℃、观察时刻为4h。(2)超声破碎抗原(U-BP)免疫新西兰兔和小鼠的抗血清ELISA效价高达1/64000,最高血清凝集效价分别为1/32和1/64,甲醛灭活抗原(F-BP)抗血清ELISA效价高达1/16000,凝集效价为1/128和1/64;热灭活抗原(H-BP)抗血清ELISA效价达1/8000,凝集效价为1/16和1/64。(3)F-BP和H-BP具有较强的免疫原性,U-BP在小鼠中的免疫原性较弱(P<0.05)。结论建立了抗类鼻疽伯克霍尔德杆菌多克隆抗体的检测方法,制备了高效价的抗类鼻疽伯克霍尔德杆菌多抗血清;甲醛灭活和热灭活细菌具有较好的免疫原性,为下一步类鼻疽伯克霍尔德杆菌的致病机制研究和疫苗研发打下了基础。

天然植物乳香胶体外抗幽门螺杆菌有效成分筛选

目的筛选天然植物乳香胶(MasticGum,MG)体外抗幽门螺杆菌(HP)的有效成分。方法选定MG的10种成分,在3个浓度(10,1,0.1mg/mL)下,运用试管稀释法测定并分析它们对HP的杀灭或抑制效果。结果除香叶烯和麝子油醇外,在高浓度(10mg/mL)时,所选其余成分均对HP有明显的杀灭效果,在低浓度(0.1mg/mL)时都无杀灭作用,其中β-石竹烯、芳樟醇、γ-萜品烯、α-萜品醇、反式茴香烯在中浓度(1mg/mL)时即有较好的杀菌效果。结论MG成分中的β-石竹烯、芳樟醇、γ-萜品烯、α-萜品醇、反式茴香烯在相对较低浓度时即表现出体外抗HP作用,因而有可能成为替代抗生素的抗HP的候选药物。

百日咳基因工程疫苗的研究进展

近年来,随着基因组学和生物技术的迅猛发展,对百日咳主要毒力因子和抗原成分的结构及功能有了更加深入的了解,为开发新一代百日咳基因工程疫苗奠定了基础。本文对百日咳基因工程疫苗,包括亚单位疫苗、DNA疫苗及百日咳杆菌的免疫机制的研究进展作简要综述。

表达核小体Th表位减毒鼠伤寒沙门菌株的构建

目的:构建表达核小体Th表位(H2B14-28)的口服减毒鼠伤寒沙门菌株。方法:将H2B14-28基因插入原核表达载体pYA3149中,构建重组质粒pH2B(pYA3149-H2B14-28)后,转入鼠沙门菌株X4550,斑点印迹鉴定表位肽的表达。观察X4550(pH2B)体内外携带重组质粒的稳定性。结果:酶切鉴定和基因测序显示pH2B构建成功。斑点印迹证实表位肽的表达。重组菌株在体内、外营养选择压力下,可较稳定地携带重组质粒传代繁殖。结论:成功构建了能稳定表达核小体Th表位的可口服减毒鼠伤寒沙门菌株,为进一步直接应用减毒鼠伤寒沙门菌活菌苗在肠道内表达抗原诱导SLE免疫耐受奠定基础。

氨基糖苷类钝化酶耐药机制的研究进展

氨基糖苷类抗生素的耐药机制相当复杂,其中以产生钝化酶为主,近来对其研究较多,尤其是分子水平的研究取得了一些进展。本文对三种主要钝化酶即氨基糖苷磷酸转移酶、氨基糖苷乙酰转移酶、氨基糖苷类核苷转移酶的作用底物、作用位点、常见耐药细菌、编码基因等进行综述。

Eotaxin-3基因多态性与类风湿性关节炎相关性研究

目的:研究湖北地区汉族成人eotaxin-3+77C/T和+2497T/G单核苷酸多态性与类风湿性关节炎易感性之间的关系。方法:用聚合酶链反应-单链构象多态性-四引物聚合酶链反应-限制性酶切的方法进行分析。结果:类风湿关节炎组与对照组eotax- in-3+2497位基因型频率及等位基因的频率差异有统计学意义(P<0.05);+77位基因型频率及等位基因的频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:eotaxin-3+2497T/G多态性跟类风湿关节炎易感性相关。

幽门螺杆菌双组分系统耐酸相关蛋白ArsS的原核表达及纯化

目的原核表达并纯化幽门螺杆菌双组分系统耐酸相关蛋白ArsS,为深入研究其功能及其在幽门螺杆菌耐酸机制中的作用奠定基础。方法以幽门螺杆菌菌株26695基因组为模板,采用PCR法扩增ArsS基因,插入pET-22b(+)载体,构建重组原核表达质粒pET-22b(+)-ArsS,转化E.coliBL21(DE3),0.5mmol/LIPTG25℃诱导表达,并采用亲和层析与分子筛层析对重组蛋白进行纯化。结果重组原核表达质粒pET-22b(+)-ArsS经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;重组蛋白以可溶性形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上;分子筛层析图谱显示,在150mmol/LNaCl条件下,目的蛋白层析效果较好,纯化后的重组蛋白纯度可达95%以上,浓度约为10mg/ml。结论已成功原核表达并纯化获得了高纯度的ArsS蛋白。