乳腺癌相关分子hMAM的临床应用

人乳腺珠蛋白(hMAM)为近几年发现的一种乳腺组织特异性蛋白,其基因仅在乳腺癌中表达,可能是首次发现的具有乳腺器官特异性的肿瘤标志物。该标志物的确认无疑会对乳腺癌的诊治等方面带来突破性进展。目前国内外学者对hMAM的表达及其与乳腺癌的关系做了大量研究,提出了许多新的思路及线索。现对其在乳腺癌中的早期诊断、治疗、监测病程转移及复发中的研究进展进行综述。

苦参碱诱导人肝癌细胞分化、凋亡时对G_1细胞周期调节因子的调控

目的:观察苦参碱诱导人肝癌细胞分化、凋亡时,G1细胞周期调节因子的变化,探讨苦参碱对肿瘤细胞增殖的调控。方法:0、0.3、0.8、1.5g/L苦参碱作用HepG2细胞3天,免疫组化检测p53、Rb、p21、p27、p16、cyclinD1蛋白表达;原位杂交检测p53、cyclinD1mRNA的表达。真彩色图像分析对基因表达强弱进行定量,结果用MicrosoftExcel软件统计处理。结果:用药后细胞周期负调控因子p53、Rb、p21、p27、p16表达增强;正调控因子cyclinD1表达减弱。结论:苦参碱诱导人肝癌细胞HepG2分化、凋亡的机制可能与苦参碱上调了G1细胞周期负调节因子的表达,下调了G1期正调节因子cyclinD1表达有关。

p27基因启动子甲基化在乳腺癌中的研究

目的探讨在乳腺癌中p27基因启动子甲基化的状态。方法采用免疫组织化学、原位杂交及RT-PCR的方法检测乳腺癌细胞株、45例乳腺癌组织p27在mRNA及蛋白水平的表达;用甲基化特异性PCR的方法检测乳腺癌组织中p27基因启动子甲基化状态。结果p27低表达率为55.6%(25/45),一部分乳腺癌组织中p27的启动子区域存在高甲基化状态。结论p27启动子区域高甲基化状态可能是导致其在乳腺癌中低表达的机制之一。

人乳腺珠蛋白基因亚型的原核表达及纯化

目的:克隆人乳珠蛋白(hMAM)编码全长cDNA,原核表达并纯化蛋白产物,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础。方法:自乳腺癌组织及乳腺癌细胞株MD-MB453提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAM cD-NA,构建pQE40-hMAM表达质粒,在大肠杆菌M15中表达,利用镍-亚硝胺乙酸组氨酸(N i-NTA-H is)亲和层析法对重组蛋白进行纯化。结果:乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中发现两种hMAM cDNA亚型,即hMAM和hMAM(Isoform),长度分别为279和270 bp,两者相差9个连续碱基,其翻译产物相差3个连续氨基酸残基;表达的融合蛋白以不溶性包涵体形式存在,纯化后得到纯度为97%的目的蛋白。结论:获得hMAM cDNA并发现一个新的hMAM突变体;融合蛋白的表达及纯化成功。

NGAL测定在急性肾损伤诊断中应用的研究进展

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)存在于中性粒细胞的过氧化物酶阴性颗粒中,并在人体组织细胞中广泛分布。近年研究发现,NGAL与肾脏关系十分密切,可能参与启动肾脏发育并发挥保护肾脏的作用。众多实验室和临床研究表明,急性肾损伤(AKI)时NGAL表达明显增高并分泌释放入体液中。尤其是尿液中的NGAL水平与肾脏损伤的程度密切相关且很早就表现出来,NGAL被认为是新的有效的AKI早期生化标志物。

乳腺珠蛋白基因在大肠杆菌中的诱导表达及纯化研究

目的克隆乳腺珠蛋白(hum an m amm aglob in,hMAM)编码全长cDNA,原核表达并纯化蛋白产物,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法。方法自乳腺癌组织提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAM cDNA,构建pQE40-hMAM表达质粒,在大肠杆菌M15中表达,利用镍-亚硝胺乙酸组氨酸(N i-NTA-H is)亲和层析法对重组蛋白进行纯化。结果表达的融合蛋白以不溶性包涵体形式存在,纯化后得到纯度为97%的目的蛋白。结论成功地纯化出hMAM重组蛋白。

IRF-4结合蛋白——一个新的Th2极性分化相关分子

Th细胞的极性分化在免疫反应调控中具有重要作用,Th细胞极化失调所致Th1/Th2失衡与多种疾病的发生相关。对于细胞因子、抗原信号,转录因子等影响Th1/Th2分化倾向的相关调控因素的研究已比较深入,但分化的具体分子机制尚未完全阐明。IRF-4结合蛋白(IBP)是一个新发现的与Th活化及Th2极性分化相关的分子,它的发现为Th极化的分子机制的研究提供了新的线索。本文就IBP的发现及其在Th细胞极化中的作用做一综述。

抗重组人乳腺珠蛋白单克隆抗体的制备及其特异性鉴定

目的通过杂交瘤技术获得特异性抗hMAM单克隆抗体,为进一步研制基于hMAM的乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础。方法以纯化的重组蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,运用杂交瘤技术制备、间接ELISA法及免疫组化法筛选出能稳定分泌特异性抗hMAM的单克隆抗体细胞株。结果通过杂交瘤技术获得了2株能分泌特异性抗hMAM单克隆抗体的杂交瘤细胞株hMAM-A2及hMAM-B7,其分泌的单克隆抗体亚类均属于IgG1,Western blotting结果显示2株细胞分泌的单克隆抗体特异性强能与34kDa处的hMAM抗原形成单一的蛋白质显色条带,免疫组化结果显示其仅与乳腺癌组织呈阳性反应,与其他肿瘤组织不发生交叉反应。结论利用鼠-鼠杂交瘤技术成功的制备了2株稳定分泌高效价、高特异性抗hMAM的杂交瘤细胞株。

乳腺癌转移细胞检测的研究进展

乳腺癌的发病率呈上升趋势,亟待研究开发针对乳腺癌的新的快速、简单、准确的检测手段。研究已经证实淋巴结与骨髓作为乳腺癌细胞早期转移部位,乳腺癌患者淋巴结与骨髓中肿瘤转移细胞的检测对于临床治疗有一定的指导意义,但也存在一些明显的缺点。近年来血液中乳腺癌细胞标志物的研究日益受到重视,许多新的乳腺癌标志物被用于血液中乳腺癌细胞的检测,由于血液标本的取材较淋巴结与骨髓容易,便于常规的乳腺癌筛查及随访,具有更大的临床应用价值。现就乳腺癌患者淋巴结、骨髓及血液中转移肿瘤细胞的各种检测方法的优劣及血液乳腺癌转移细胞检测指标的研究现状作一综述。

基因疫苗——疫苗的新希望

近几年发展起来的基因免疫接种技术导致了基因疫苗的诞生。基因疫苗既具有重组亚单位疫苗的安全性,又具有减毒活疫苗诱导全方位免疫应答的高效力,在病毒感染性疾病和肿瘤等的防治中有着广阔的应用前景。本文对基因疫苗的诞生、作用机理和优点等作一简述。

蜕皮甾酮对口腔扁平苔藓上皮细胞TLRs/NF-κB信号通路的调节作用

目的:研究Toll样受体/核转录因子-κB(TLRs/NF-κB)信号通路在口腔扁平苔藓(oral lichen plus,OLP)病理过程中的作用,探讨蜕皮甾酮(ecdysterone,EDS)在OLP治疗中的作用效应。方法:(1)脂多糖(LPS)刺激人口腔黏膜角质形成细胞(HOK)建立体外OLP炎症模型,采用Real time RTPCR检测NF-κB p65、TLR4和肿瘤坏死因子-a(TNF-α)mRNA在该模型中的表达情况;(2)EDS干预HOK细胞后,RT-PCR检测NF-κB p65、TLR4和TNF-αmRNA的表达情况。结果:体外OLP炎症模型中NF-κB p65、TLR4和TNF-αmRNA表达量上调,且呈LPS浓度及作用时间依赖性,LPS浓度为10μg/mL,作用6h时表达量最高。EDS能够下调NF-κB p65、TLR4和TNF-αmRNA的表达,EDS最佳作用浓度是100μg/mL(P<0.01)。结论:EDS对OLP的抗炎及免疫调节作用与TLRs/NF-κB信号通路密切相关,EDS可能通过抑制TLRs的激活,调控NF-κB的表达,最终抑制OLP炎症介质活化与黏膜损伤。