星状神经节阻滞的研究进展及其在严重创伤多器官功能障碍综合征中的应用展望

星状神经节阻滞（stellate ganglion block，SGB）是将局部麻醉药注入到颈交感神经及其附近组织，以达到颈交感干、颈交感神经节与节前、节后神经及其支配范围的区域性阻滞。既往认为SGB只能治疗其支配区的疾病，现在知道SGB对神经痛疗效显著，其治疗范围几乎遍及全身。在日本，每天至少有2万～3万人进行SGB治疗，其治疗学理论已为日本医界所公认。

机械创伤诱导皮肤成纤维细胞去分化的实验研究

目的:研究机械创伤是否能诱导皮肤成纤维细胞发生去分化。方法:建立体外培养细胞划痕损伤模型和体内全层皮肤损伤模型,应用免疫荧光染色、免疫组织化学、蛋白质印迹、转录组测序、si RNA等方法,检测机械创伤后成纤维细胞的形态、增殖情况、干细胞相关标志物的表达、集落形成能力、表达谱等的变化。结果:机械创伤后成纤维细胞逐渐变小变圆,发生类干细胞形态转变,并于创伤后36 h被激活而发生明显增殖,且创伤后成纤维细胞的激活不受创伤严重程度的影响。机械创伤后成纤维细胞中的干细胞标志物Sox2、波形蛋白的表达明显增强,集落形成能力也明显提高。体内实验也发现创面肉芽组织中出现大量Sox2阳性细胞。表达谱分析发现成纤维细胞的多能干细胞通路及相关调控分子表达明显增强。机械划痕后2 h创缘成纤维细胞中的总β-catenin和ser 675磷酸化的β-catenin的表达较对照组明显增强;应用β-catenin si RNA抑制成纤维细胞内的β-catenin表达后,机械创伤后创缘成纤维细胞中的Sox2阳性细胞几乎消失。结论:机械创伤可诱导皮肤成纤维细胞的去分化;β-catenin介导了机械创伤后成纤维细胞的去分化过程。

贫铀弹伤害及其医学防护

贫铀在军事上主要用于加固装甲和制造贫铀弹。贫铀武器多次在实战中被使用,造成人员死伤,装备破坏,环境污染,产生了严重后果。本文从贫铀弹的4种杀伤因素、贫铀弹伤害的主要临床病理特点、医学防护和救治几个方面阐述了贫铀弹所致的伤害及其医学防护,同时也对防护中几个基本问题提出了自己的看法。

颈交感神经阻滞对放烧复合伤小鼠死亡率的影响及其可能的作用途径(英文)

背景:颈交感神经阻滞促进机体神经-内分泌-免疫系统等稳态的恢复,其能否抑制创伤后应激紊乱导致的内稳态失衡仍不明确。目的:观察颈交感神经阻滞对放烧复合伤小鼠死亡率的影响,探讨颈交感神经阻滞可否成为严重创伤后续损害简单有效的治疗手段。设计:随机分组设计,动物对照实验。单位:解放军广州军区广州总医院麻醉科。材料:实验于2004-02/2005-07在解放军第三军医大学复合伤研究所完成。选择昆明小鼠160只,随机抽签法分为对照组80只(仅对动物给予放烧复合伤,颈部注射生理盐水0.3mL)和颈交感神经阻滞组80只(对动物给予放烧复合伤,伤后给予颈交感神经阻滞,1次/d,连续14d)。方法:动物致伤方法:①放射损伤:60Coγ射线5Gy,照射距离1.5m,吸收剂量率(5.17～5.33)mGy/s,全身一次均匀照射。②烧伤:放射损伤后给予20g/L凝固汽油涂于背部燃烧8s造成15%总体表面积Ⅲ度烧伤(病理切片证实)。颈交感神经阻滞方法:对大鼠进行双侧颈交感神经阻滞,注射5g/L利多卡因0.2mL,注射后5min观察小鼠是否出现类似于霍纳综合征症状。主要观察指标:观察两组动物伤后2,5,7,10,15,20,30d死亡率及伤后7,14,21d外周血红细胞、白细胞、血小板计数的变化,另观察颈交感神经阻滞对放烧复合伤后3,6,14d血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的影响。结果:纳入动物160只,均进入结果分析。①与对照组比较,颈交感神经阻滞治疗使放烧复合伤后5,7,10,15,20,30d的死亡率显著降低犤对照组各时相点累计死亡率分别为8%,22%,32%,54%,74%,82%,90%;颈交感神经阻滞组分别为8%,14%,16%,22%,28%,34%,56%犦。②颈交感神经阻滞组伤后7,14,21d的血红细胞计数、血小板计数及白细胞计数与对照组比较显著增加犤以21d为例,血红细胞计数分别为23.21×1012L-1,14.58×1012L-1;血小板计数分别为16.87×1011L-1,12.57×1011L-1;白细胞计数分别为20.65×109L-1,14.58×109L-1犦。③颈交感神经阻滞组伤后3,6,14d的血清炎性细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和白细胞介素6水平与对照组比较显著下降犤以14d为例,肿瘤坏死因子α分别为189,365ng/L;白细胞介素1β分别为14,23ng/L;白细胞介素6分别为70,132ng/L犦。结论:颈交感神经阻滞显著降低放烧复合伤动物的死亡率,是治疗严重创伤简单而有效的手段;颈交感神经阻滞降低放烧复合伤动物死亡率的机制可能是通过促进造血功能的恢复、抑制过度的炎性反应而实现的。

LED红光照射对放创复合伤小鼠创面愈合的影响

目的研究LED红光照射对放创复合伤小鼠创面愈合的影响。方法 C57BL/6小鼠分为单纯创伤组(单创组)、放创复合伤组(放创组)和放创复合伤红光照射组(放创红光照射组)。单创组于背部制一全层皮肤切除创面,放创组经60Coγ射线5.0 Gy全身一次性均匀照射后在背部制等大创面,放创红光照射组相同制伤后予LED红光照射。伤后动态观察各组创面愈合情况以及小鼠一般情况、体质量、血常规的变化,同时观测红光照射时照射盒内温度变化。结果各组创面均愈合,放创复合伤红光照射组小鼠比放创复合伤组创面平均愈合时间缩短1～2 d(P<0.05),外周血白细胞计数25 d时比放创复合伤组高出43.41%,第28天时高出37.98%(P<0.05)。放创复合伤红光照射组体质量增长与放创复合伤组比较并无明显差别(P>0.05)。结论放创复合伤创面愈合较单创延迟,LED红光照射对放创复合伤创面愈合具有促愈作用。

贫铀长期植入对大鼠生殖系统损伤效应的研究

[目的]研究贫铀植入后大鼠体内性激素含量及睾丸超微结构的改变。[方法]初成年大鼠20只,右后肢手术植入贫铀片(0.2±0.02)g,采用放射免疫分析法检测大鼠体内促卵泡生成素、促黄体生成素和睾酮水平,并分别在植入贫铀后3、6、12、18个月进行大鼠睾丸的病理组织学及超微结构观察。[结果]性激素水平测定发现睾酮、促黄体生成素、促卵泡生成素含量在贫铀接触后第3个月均有不同程度的增高。贫铀对睾丸的影响病理组织学观察主要为间质细胞增生,后期出现曲细精管的萎缩。[结论]低剂量贫铀植入对大鼠睾丸具有损伤效应,并可引发生殖系统的功能紊乱。

贫铀长期植入对大鼠肾脏损伤效应的研究

目的研究贫铀植入后不同时相点对大鼠肾脏的损伤效应。方法采用初成年健康雄性Wistar大鼠分别植入贫铀片,观察大鼠接触贫铀后3、6、12、18月其肾脏超微结构和病理形态学改变,肾功能检测和胶原染色,并采用免疫荧光和蛋白印记杂交检测肾脏不同时间段纤维化相关因子TGF-β1与Smad表达。结果植入贫铀后不同时间段大鼠肾脏出现不同程度的病理改变,表现为肾小球固缩、后继肾小管萎缩和局部肾间质纤维组织增生以及炎性细胞浸润。纤维化程度随接触时间延长而加重。胶原染色显示胶原分布主要位于肾小管周围,且具有区域性。TGF-β1与Smad是肾脏组织纤维化进程中重要的细胞因子。Western Blot分析显示贫铀接触后大鼠肾脏中TGF-β1与Smad均有不同程度的增加。结论贫铀长时间植入后大鼠肾脏可出现病理学及超微结构的改变,TGF-β1与Smad参予了其纤维化进程。

IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞的杀伤效应研究

目的探讨七甲川花菁类荧光小分子IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞的杀伤作用。方法利用CCK-8试剂盒检测不同浓度IR-780(0、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000μmol/L)及IR-780联合阿霉素(0、0.025、0.050、0.100、0.200、0.400μmol/L)对4种不同肝癌细胞(QGY-7703、SMMC-7721、Huh-7和Hep G2)的杀伤效应,并确定后续实验IR-780和阿霉素的浓度,采用细胞划痕实验检测IR-780联合阿霉素对肝癌细胞迁移能力的影响;采用无血清悬浮培养的方法从Huh-7细胞株中分离并鉴定出具有干细胞特性的肿瘤细胞,检测IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞的杀伤作用及迁移能力的影响;在裸鼠皮下荷瘤模型中观察IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞生长的抑制作用。结果低浓度的IR-780对肝癌细胞无明显杀伤作用;采用1.250μmol/L的IR-780联合阿霉素可对多种肝癌细胞产生较强的杀伤作用,其中半数致死浓度LC50较单药阿霉素降低25%;采用无血清悬浮培养的方法培养出Huh-7细胞肿瘤球,比较其与贴壁细胞的克隆形成能力、致瘤能力和细胞周期分布,证明悬浮培养的肿瘤细胞具有肿瘤干细胞特性;IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞具有较强的杀伤作用,单用阿霉素和IR-780联合阿霉素对肝癌干细胞样细胞的LC50差异有统计学意义[(0.30±0.02)vs(0.22±0.04)μmol/L,P<0.05];IR-780联合阿霉素可明显抑制肝癌干细胞样细胞的迁移能力和裸鼠皮下肿瘤的生长。结论 IR-780可增强阿霉素的抗肿瘤作用,提高对肝癌干细胞样细胞的杀伤效应。

体外辐射模拟P53依赖的小鼠肠干细胞损伤研究

目的建立6 Gy小鼠肠干细胞体外辐射模型,模拟在体P53依赖的肠干细胞辐射损伤修复过程。方法分离C57BL/6(野生型)、P53^(-/-)小鼠小肠隐窝,分别于基质胶内接种进行3D培养,24 h后予X线6 Gy照射。比较两组隐窝克隆出芽过程和照后6 d克隆存活率。对野生型隐窝克隆用RT-PCR检测照后24 h内不同时间点P53靶基因Bax、Bbc3、Mdm2、P21、Bcl2l1以及肠干细胞特征性基因Lgr5、Olfm4、Ascl2的表达。结果 C57BL/6和P53^(-/-)小鼠小肠隐窝于接种后48 h出芽,在接种后96~120 h形成类器官样结构。6 Gy辐照可诱导C57BL/6隐窝细胞24 h内大量死亡,完全抑制克隆出芽,仅(43.84±5.73)%的克隆存活;而对P53^(-/-)小鼠隐窝出芽时间无影响,且有(83.69±5.89)%隐窝克隆存活,显著高于对照组(P<0.01)。在野生型隐窝克隆中,P53下游靶基因的表达可被辐射迅速激活,并在24 h内维持高水平,而干细胞特征性基因在12 h迅速下降,24 h到达最低水平。结论 6 Gy照射小鼠小肠隐窝能较好地模拟在体P53依赖的促凋亡因素对肠干细胞的损伤。

供体骨髓细胞在放射损伤肠道中的迁移定植和促修复作用研究

目的研究供体骨髓细胞(donor bone marrow cells,d BMCs)在全身放射损伤小鼠肠道内的迁移定植规律和对肠道放射损伤的促修复作用。方法将60只6~8周龄C57BL/6小鼠进行10 Gy全身照射后随机分为移植组和对照组。比较两组小鼠的存活率,免疫组化分析d BMCs在骨髓和肠道内的定植规律,免疫荧光双染鉴定早期植入肠道内的d BMCs表型。HE染色和Brdu免疫组化分析d BMCs对放射损伤肠道的促修复作用。结果实验后第14天,移植组小鼠的存活率为95%。d BMCs同时向受体骨髓和肠道迁移定植。移植早期d BMCs首先定植于肠道固有层底部并向上迁移,最终填充全部固有层。早期植入的骨髓细胞中含有Sca-1阳性造血干细胞。d BMCs可缓解放射所致肠黏膜固有层水肿,促进肠道干细胞增殖并增加肠隐窝密度。移植早期d BMCs不形成肠上皮细胞,稳定嵌合后可形成骨髓来源肠上皮细胞。结论 d BMCs在移植后早期即向肠道迁移定植并促进放射所致肠道损伤的修复重建过程。

Ghrelin对放烧复合伤大鼠的救治作用

目的探索Ghrelin对放烧复合伤大鼠是否具有救治作用,并对其产生救治作用的可能机制做初步研究。方法 120只清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为4组:正常组(Con)、单纯Ghrelin处理组(GHR,即对正常大鼠腹腔注射Ghrelin)、放烧复合伤组(CRBI,5 Gy全身均匀照射+15%全身体表面积皮肤Ⅲ度烧伤)、Ghrelin治疗组(CRBI+GHR),GHR每天1次,连续5 d腹腔注射,剂量3.37×10-2mg/kg,每组30只。观察项目包括:①大鼠30 d存活率;②造血功能:7、14、21 d外周血象和第10天脾结节形成实验、脾脏指数、骨髓有核细胞计数;③最后1次给药后2、4、6 h血清中炎性介质TNF-α、IL-6,神经递质乙酰胆碱(ACH),肾上腺素(E)及皮质醇(Cor)的含量。结果 Ghrelin可显著提高CRBI动物存活率(约25%);与CRBI组相比可显著提高第7天外周血中WBC计数(P<0.05),第10天骨髓有核细胞计数亦明显高于CRBI组,但在脾结节及脾脏指数方面尚未观察到显著差异(P>0.05);与CRBI组相比,还可使伤后第4天血清中TNF-α及IL-6含量降低(P<0.05),乙酰胆碱总体含量降低(P<0.05),肾上腺素及皮质醇水平下降(P<0.05)。结论 Ghrelin对放烧复合伤大鼠具有一定的救治作用,其作用的发挥可能与其减轻造血功能抑制,下调促炎介质水平并调节植物神经系统的兴奋性有关。

人α防御素5在大肠杆菌中的可溶性表达与纯化研究

采用PCR扩增大肠杆菌偏好的人α防御素5成熟肽(mHD-5)密码子序列,并将其克隆至pMAL-p2x质粒,构建pMAL-p2x-mHD-5表达载体,转化大肠杆菌BL_(21)(DE_3),诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白表达量并优化表达条件。经亲和层析、酶切和离子交换层析等方法分离、纯化重组mHD-5(rmHD-5)多肽。采用浊度法测定rmHD-5对细菌的抑制活性。通过优化表达条件,获得约30%的可溶性目的蛋白表达量,并成功纯化rmHD-5。rmHD-5对大肠杆菌标准菌株(ATCC25922)具有较强的抑制活性,在终浓度为62.5μg/mL时,90%以上的细胞被抑制。结果表明采用可溶性融合表达策略,在原核表达系统中诱导表达并纯化具有生物活性的防御素是可行的途径之一。

骨髓间充质干细胞在小鼠肝脏局部分化为肝细胞的实验研究

目的探讨小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)在肝内分化为肝细胞的可行性。方法腹腔注射丙烯醇致雌性C57BL/6小鼠全肝损伤后局部接受雄性同品系绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞移植。移植后3周取骨髓嵌合小鼠肝脏做冰冻切片,荧光显微镜下观察GFP阳性细胞在肝内分布,石蜡切片行GFP抗体和白蛋白(albumin,Alb)抗体免疫组化双标法检测GFP阳性细胞在受体小鼠肝内的分化情况。结果移植后3周小鼠肝内可见GFP阳性细胞,并可见GFP和Alb双阳性细胞。结论异体骨髓间充质干细胞可在小鼠肝内分化为表达Alb的肝细胞,为肝组织的再生和修复提供了新思路,显示了其在肝病治疗中的应用潜力。

金属硫蛋白和锌对急性贫铀中毒大鼠的解毒效果研究

目的探索金属硫蛋白和锌对急性贫铀中毒的解毒效果。方法给予Wistar大鼠贫铀溶液造成急性贫铀中毒的动物模型,利用ZnSO4和金属硫蛋白(metallothionein,MT)解毒。Wistar大鼠70只,随机分为7组,每组10只:①正常组(N);②贫铀组(DU);③ZnSO4预防组(Zn-P);④MT预防组(MT-P);⑤ZnSO4治疗组(Zn-T);⑥MT治疗组(MT-T);⑦ZnSO4预防+MT治疗组(Zn+MT)。测定血、尿和肾脏标本的铀含量。观察内/外源性的MT作用对大鼠急性贫铀中毒的解毒效果,同时观察不同解毒措施对血常规和肝、肾功能的影响以及肾脏病理学变化。结果Zn预防组、MT预防组和MT治疗组均有明显的解毒效果[肾脏和尿液中贫铀含量明显增高(P<0.05)],其中又以Zn预防组的解毒效果最好,病理变化较轻。同时发现在使用MT或Zn进行干预的各个干预组中,没有表现出明显的血常规和肝、肾功能指标的改变。结论预防性给予ZnSO4诱导产生内源性金属硫蛋白,能更好发挥对贫铀中毒的解毒效果。

防御素基因工程制备研究进展

本文综述了防御素在重组表达与制备方面的主要进展,包括在原核细胞表达时宿主菌、载体、表达策略的选择,在酵母等真核细胞中进行重组表达的优缺点,以及重组防御素纯化研究的现状。本文还概括了当前防御素研发与临床应用面临的主要问题,将来的研究方向和开发前景。

星状神经节阻滞对严重烧伤小鼠巨噬细胞糖皮质激素受体表达及细胞因子分泌的影响

目的:探讨星状神经节阻滞(stellate ganglion block,SGB)在严重烧伤小鼠腹腔巨噬细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达及炎性细胞因子分泌中的作用,明确SGB可否成为改善严重创伤后的GR功能、抑制炎性反应过度的手段。方法:20%TBSAⅢ度烧伤小鼠分为单纯严重烧伤组(烧伤组)、严重烧伤后单侧颈部SGB治疗组(单侧SGB组)、严重烧伤后双侧颈部SGB治疗组(双侧SGB组),另设正常对照组,比较各组巨噬细胞GR水平及巨噬细胞分泌炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1"(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的差异。结果:单侧及双侧SGB组腹腔巨噬细胞GR蛋白水平均显著高于烧伤组,单侧及双侧SGB组腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6的作用均显著低于烧伤组。严重烧伤后单侧SGB组及双侧SGB组间巨噬细胞GR蛋白水平及TNF-α、IL-1β、IL-6的表达释放无明显差异。结论:单侧或双侧颈部SGB均可成为改善严重烧伤巨噬细胞GR功能、抑制其过度分泌炎性细胞因子的手段。

小鼠间充质祖细胞向神经元样细胞诱导分化的实验研究

目的:体外培养C57小鼠密质骨碎片来源的间充质祖细胞(Mesenchymal progenitor cells,MPC),探讨MPC体外向神经元样细胞定向诱导分化的可行性。方法:取C57小鼠后肢长骨,剪成骨碎片,经Ⅱ型胶原酶消化后体外培养MPC,流式细胞术检测鉴定其免疫学表型。取生长良好的第三代MPC,神经元原代培养上清液定向诱导,对诱导后的MPC,以神经元特异性标志物神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase,NSE)及神经丝蛋白(Neurofilament protein,NF)为对照,应用免疫细胞化学染色法,检测神经元标志物的表达。结果:成功培养原代MPC,传代后生长良好,流式细胞术检测CD29、CD44组阳性率与其同型对照组相比有明显差异(P<0.05)。经神经元原代培养上清液诱导后,MPC可表达神经元特异性标志物NSE及NF。结论:从小鼠密质骨碎片分离培养出的间充质祖细胞获得率高,并可诱导分化为神经元样细胞。

含邻苯二酚基团的黄酮化合物促排急性贫铀中毒效果的研究

目的寻找对急性贫铀中毒促排效果较好的含邻苯二酚基团的黄酮类化合物。方法给予Wistar大鼠贫铀20mg/kg,立即给予黄酮类化合物10mg/kg,连续3d,并设邻苯二酚类化合物8102及DMSO做为对照。3d后做肾功能检测和肾脏、肝脏、骨髓、脾脏等病理观察。结果8102和F1组血清肌酐和尿素氮含量显著下降,F2、T1和T2组的肌酐浓度也显著降低。病理观察显示,T2组肾脏、肝脏几乎无明显损伤;8102和T1次之;F1和QU组肾损伤较重;DMSO组的损伤最重,但较贫铀组轻。结论T2对贫铀敏感器官的保护最好;F1可改善肾功能。这两种化合物均具有做为贫铀促排剂的潜能。

局部解剖学知识对防原医学实验的促进作用

防原医学主要研究战时核武器与平时核事件所致伤害的医学防护和救治,是军事预防医学的主干学科,更是一门包含放射病理、创伤外科等多学科的特殊新兴学科。放射性碘极易经胃肠道、呼吸道、完整的皮肤及伤口吸收,

重组胰岛素样生长因子-Ⅰ促进辐射损伤小鼠血小板水平的恢复

目的观察重组人胰岛素样生长因子-Ⅰ(recombinant human insulin-like growth factor-Ⅰ,rhIGF-Ⅰ)对辐射损伤小鼠血小板水平的促恢复作用及其可能机制。方法健康BALB/c小鼠按完全随机法分为3组,其中2组小鼠接受全身一次性5 Gyγ射线辐照后,rhIGF-Ⅰ处理组连续7 d皮下注射rhIGF-Ⅰ,另一组(辐照对照组)及正常未辐照组皮下注射等量生理盐水。辐照后不同时相点尾静脉采血检测血常规,辐照后第14天病理切片观察骨髓组织变化;流式细胞仪分析未辐照小鼠Sca+-Ⅰ细胞经rhIGF-Ⅰ处理后CD41阳性率变化及rhIGF-Ⅰ对辐照所致巨核祖细胞凋亡的影响。结果rhIGF-Ⅰ处理组小鼠在辐照后11～17 d期间血小板数量显著高于辐照对照组(P<0.01)。体外分离培养的rhIGF-Ⅰ处理组Sca+-Ⅰ细胞CD41阳性率及c-kit+细胞阳性率分别为(24.10±2.43)%、(47.84±6.02)%,显著高于空白对照组(15.40±3.25)%和辐照对照组(24.68±5.83)%;巨核祖细胞辐照后给予rhIGF-Ⅰ处理,其凋亡率为(38.76±2.85)%,也明显低于辐照对照组的(50.58±4.32)%,上述结果差异均具有统计学意义(P<0.05)。此外,病理切片显示,rhIGF-Ⅰ处理组小鼠骨髓有核细胞和巨核细胞数目也显著高于辐照对照组。结论 rhIGF-Ⅰ可能通过促进造血干细胞向巨核细胞分化并抑制巨核祖细胞凋亡,从而保护辐照所致的巨核细胞损伤并促进血小板水平的恢复。