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颈交感神经阻滞调节放烧复合伤小鼠巨噬细胞GR的表达及细胞因子分泌的影响 被引量:9
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作者 陆建华 粟永萍 +1 位作者 陶军 叶建宁 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期284-286,共3页
目的探讨颈交感神经阻滞(cervical sympathetic ganglia block,SB)在放烧复合伤小鼠腹腔巨噬细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达及炎性细胞因子分泌中的作用。方法TBSA15%Ⅲ度烧伤合并5Gy放射损伤小鼠分为单纯放烧复... 目的探讨颈交感神经阻滞(cervical sympathetic ganglia block,SB)在放烧复合伤小鼠腹腔巨噬细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达及炎性细胞因子分泌中的作用。方法TBSA15%Ⅲ度烧伤合并5Gy放射损伤小鼠分为单纯放烧复合伤组、放烧复合伤后单侧颈部SB治疗组、放烧复合伤后双侧颈部SB治疗组,另设正常对照组,每组8只,比较各组巨噬细胞GR水平及巨噬细胞分泌炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的差异。结果单侧及双侧SB组腹腔巨噬细胞GR蛋白水平均显著高于放烧复合伤组(P<0.01),单侧及双侧SB组腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6的作用均显著低于放烧复合伤组(P<0.05)。放烧复合伤后颈部单侧SB组与双侧SB组间巨噬细胞GR蛋白水平及TNF-α、IL-1β、IL-6的表达释放无明显差异(P>0.05)。结论单侧或双侧颈部SB均可改善放烧复合伤巨噬细胞GR功能,抑制其过度分泌炎性细胞因子。 展开更多
关键词 颈交感神经节 阻滞 放烧复合伤 巨噬细胞 糖皮质激素受体 细胞因子
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Cyr61在单纯及放创复合伤愈合过程中的表达及其临床意义 被引量:4
2
作者 杜业军 司维柯 +4 位作者 何通川 粟永萍 万莹华 潘静 赵宸 《重庆医学》 CAS CSCD 2008年第9期937-939,F0003,共4页
目的研究Cyr61在单纯和放创复合伤愈合过程中的表达变化,对伤口愈合和组织改建的影响,及其在创伤实验室诊断中的意义。方法制备单纯及放创复合伤动物模型,采用光镜、免疫组化、RT-PCR等方法,动态观察伤口愈合过程中Cyr61mRNA及蛋白表达... 目的研究Cyr61在单纯和放创复合伤愈合过程中的表达变化,对伤口愈合和组织改建的影响,及其在创伤实验室诊断中的意义。方法制备单纯及放创复合伤动物模型,采用光镜、免疫组化、RT-PCR等方法,动态观察伤口愈合过程中Cyr61mRNA及蛋白表达变化规律。结果5Gy(γ射线)全身照射后对伤口愈合有明显的损害作用。在伤后第3、6、9、15天,Cyr61表达量均随创伤愈合时间延长而增加;但在同一时间点,放创复合伤组Cyr61蛋白和mRNA的表达量均低于单纯创伤组,第21天放创复合伤组表达继续升高,而单纯创伤组表达下降。Cyr61表达时相拖后与辐射所致伤口愈合延迟一致。结论Cyr61在放创复合伤肉芽组织中表达较单纯创伤组明显降低,影响细胞迁移、新生血管形成和组织改建等重要过程,这可能是辐射所致伤口难愈的重要原因之一,认识Cyr61在创伤愈合过程的表达规律有助于创伤的预后判断和治疗。 展开更多
关键词 放射 创伤愈合 CYR61
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回顾切尔诺贝利事故,探讨防原医学教学改革 被引量:9
3
作者 许杨 王军平 +2 位作者 刘登群 徐辉 李蓉 《基础医学教育》 2017年第5期349-351,共3页
防原医学是一门综合性很强的军事医学学科,主要研究战时核武器、核爆炸和平时电离辐射所致的人体伤害医学防护及其临床救治。它与基础医学、临床医学和军事医学等学科都紧密联系。随着核能在各领域的广泛使用,而核事故、核源丢失等情况... 防原医学是一门综合性很强的军事医学学科,主要研究战时核武器、核爆炸和平时电离辐射所致的人体伤害医学防护及其临床救治。它与基础医学、临床医学和军事医学等学科都紧密联系。随着核能在各领域的广泛使用,而核事故、核源丢失等情况时有发生,提醒着人们必须重视核技术的安全应用。切尔诺贝利事故已过去30年有余,但其造成的严重影响延续至今。回顾此次事故给当地和全球人们造成的严重影响,深刻反思此次事故,从教学理念、教学内容、教学方法和考核方式等方面探讨如何进行防原医学教学改革。 展开更多
关键词 防原医学 切尔诺贝利事故 教学改革
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从日本福岛核电站事故谈防原医学教学改革 被引量:4
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作者 刘登群 李蓉 +6 位作者 史春梦 王军平 孙慧勤 冉新泽 粟永萍 罗成基 程天民 《山西医科大学学报(基础医学教育版)》 2011年第7期630-632,共3页
防原医学是军事预防医学的重要分支学科,主要内容涉及核武器和核事件所致放射损伤的临床表现、诊断和救治措施。随着社会实践的不断发展,越来越多的核相关事件(事故)需要运用防原医学知识进行处理,因此必须对防原医学教学进行相应改革... 防原医学是军事预防医学的重要分支学科,主要内容涉及核武器和核事件所致放射损伤的临床表现、诊断和救治措施。随着社会实践的不断发展,越来越多的核相关事件(事故)需要运用防原医学知识进行处理,因此必须对防原医学教学进行相应改革以适应社会发展需要。近期发生的日本福岛核电站事故在全球范围内引起广泛影响和关注,结合此次核事故从教学理念、教学内容、教学形式和考评策略四个方面初步探讨如何进行防原医学教学改革。 展开更多
关键词 防原医学 教学改革 核事故 创新能力
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新型斑蝥素类似物LB1协同阿霉素杀伤肝癌细胞的实验研究
5
作者 王得春 谭旭 +2 位作者 张二龙 王曙光 史春梦 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期522-525,共4页
目的通过水溶性化学小分子蛋白磷酸酶2A抑制剂LB1与阿霉素(doxorubicin,DOX)联合应用,研究其在肝癌化疗过程中的协同作用。方法体外细胞活性分析检测不同剂量LB1对HepG2细胞活性影响及其与阿霉素(DOX)的协同杀伤效应;通过裸鼠体内荷瘤... 目的通过水溶性化学小分子蛋白磷酸酶2A抑制剂LB1与阿霉素(doxorubicin,DOX)联合应用,研究其在肝癌化疗过程中的协同作用。方法体外细胞活性分析检测不同剂量LB1对HepG2细胞活性影响及其与阿霉素(DOX)的协同杀伤效应;通过裸鼠体内荷瘤模型以及组织化学分析,进一步观察LB1对肿瘤生长影响以及在体与阿霉素的协同化疗作用。结果 LB1对HepG2细胞生长与作用剂量相关,低剂量时可促进其生长,高剂量时则促进其凋亡,而且在联合阿霉素后,可显著提高对HepG2肿瘤细胞的杀伤作用;体内实验也发现,单纯给予阿霉素抑瘤率为57%,而LB1联合应用后,抑瘤率可达77%,显著提高了阿霉素对肿瘤的杀伤作用(P<0.05),且无明显毒副作用。结论 LB1联合应用可显著提高阿霉素(DOX)对肝癌细胞的化学杀伤作用。 展开更多
关键词 斑蛰素衍生物 PP2A抑制剂 LB1 阿霉素 HEPG2细胞
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颈交感神经阻滞对严重烧伤小鼠的保护作用及其机制 被引量:6
6
作者 杜智勇 陶军 +1 位作者 杨天德 粟永萍 《重庆医学》 CAS CSCD 2007年第4期326-327,共2页
目的探讨颈交感神经阻滞(SB)对严重烧伤小鼠的保护作用并探讨其机制。方法采用小鼠TBSAⅢ度烧伤模型,并于烧伤后连续5d行小鼠双侧颈交感神经阻滞,观察烧伤后3周颈交感神经阻滞组(SB组)和单纯烧伤组小鼠死亡率以及伤后早期肝组织糖皮质... 目的探讨颈交感神经阻滞(SB)对严重烧伤小鼠的保护作用并探讨其机制。方法采用小鼠TBSAⅢ度烧伤模型,并于烧伤后连续5d行小鼠双侧颈交感神经阻滞,观察烧伤后3周颈交感神经阻滞组(SB组)和单纯烧伤组小鼠死亡率以及伤后早期肝组织糖皮质激素受体(GR)表达变化。结果SB组小鼠严重烧伤后小鼠死亡率明显低于单纯烧伤组,SB组小鼠烧伤后早期GR下调不明显。结论颈交感神经阻滞可以明显减轻严重烧伤的损害效应,其机制可能是通过促进GR功能来实现的。 展开更多
关键词 颈交感神经阻滞 糖皮质激素受体 烧伤
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颈交感神经阻滞对烧伤鼠脑应激因素表达影响 被引量:4
7
作者 郭晓姝 巩继平 +3 位作者 王崧 张翠英 尚改萍 高莉晶 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期650-653,I0003,共5页
目的 探讨颈交感神经阻滞(SB)对重度烧伤大鼠脑组织应激相关神经肽P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)和炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达的影响.方法 成年健康雄性Wistar大鼠20只,随机分为四组:对照组、对照+SB组、烧伤... 目的 探讨颈交感神经阻滞(SB)对重度烧伤大鼠脑组织应激相关神经肽P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)和炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达的影响.方法 成年健康雄性Wistar大鼠20只,随机分为四组:对照组、对照+SB组、烧伤组及烧伤+SB组,每组5只.TBSA 15%~20%Ⅲ度大鼠烧伤模型,烧伤后即刻双侧颈交感神经阻滞,于8 h后断颈取脑组织,ELISA法观察SP和CGRP的表达;免疫组织化学法观察TNF-α表达;Western-blot法观察 IL-1β和IL-6表达.结果 SP、CGRP对照组与对照+SB组比较差异无统计学意义(P〉0.05),烧伤组和烧伤+SB组显著高于对照组和对照+SB组(P〈0.01),烧伤+SB组较烧伤组显著减弱(P〈0.01).TNF-α、IL-1β对照组与对照+SB组比较差异无统计学意义(P〉0.05),烧伤组和烧伤+SB组显著增高(P〈0.01),烧伤+SB组较烧伤组显著降低(P〈0.01).IL-6:对照组与对照+SB组比较差异无统计学意义(P〉0.05),烧伤组显著高于其他三组(P〈0.01),烧伤+SB组与对照+SB组比较差异无统计学意义(P〉0.05),但显著高于对照组(P〈0.05).结论 颈交感神经阻滞对重度烧伤治疗作用的中枢机制之一可能是通过抑制P物质、CGRP表达,降低细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α过度表达引起SIRS来实现的. 展开更多
关键词 烧伤 颈交感神经阻滞 P物质(SP) 降钙素基因相关肽(CGRP) 细胞因子
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颈交感神经阻滞对小鼠烧伤早期肝组织核因子-κB及其辅活化子的影响 被引量:2
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作者 李军 粟永萍 +2 位作者 王军平 艾国平 邹仲敏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期655-657,共3页
目的观察颈交感神经阻滞(sympathetic block,SB)对烧伤小鼠早期炎症介质核因子-κB(NF-κB)及其辅活化子的影响,初步探讨SB在严重创伤中治疗作用的分子机制。方法将雄性昆明小鼠分为正常对照组、烧伤对照组、LSB组(烧伤后使用利... 目的观察颈交感神经阻滞(sympathetic block,SB)对烧伤小鼠早期炎症介质核因子-κB(NF-κB)及其辅活化子的影响,初步探讨SB在严重创伤中治疗作用的分子机制。方法将雄性昆明小鼠分为正常对照组、烧伤对照组、LSB组(烧伤后使用利多卡冈进行SB治疗)、RSB组(烧伤后使用罗哌卡因进行SB治疗),每组5只。烧伤为TBSA15%~20%m度。烧伤后6h采用Western blotting测定肝组织NF-κBP65、类同醇受体辅活化子-3(SRC-3)的蛋白表达及核转位。结果烧伤对照组肝组织NF-κBP65、SRC-3蛋白表达水平及核转位显著增加;与烧伤对照组相比,LSB组NF-κBP65蛋白表达无显著变化,SRC-3蛋白表达及NF-κBP65、SRC-3核转位显著下调;RSB组NF-κBP65、SRC-3蛋白表达及核转位均显著低于烧伤对照组,且比LSB组下调更明显。结论烧伤早期(6h)NF-κB及其辅活化子SRC-3蛋白表达水平及核转位显著上调,SB在严重创伤中的治疗作用可能是通过抑制NF-κB功能活性,降低炎症反应程度而实现的。 展开更多
关键词 颈交感神经阻滞 烧伤 核因子-ΚB 类固醇受体辅活化子-3
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氯胺酮对烧伤早期小鼠肝应激相关蛋白IFIT1和JAB1表达的影响 被引量:3
9
作者 巩继平 陈玉培 +1 位作者 郭晓姝 粟永萍 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第11期1287-1290,共4页
目的:观察小鼠应激相关蛋白IFIT1(Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1)和JAB1(c-Jun平activation共处五项原则domain-binding protein 1)在肝脏的表达的细胞定位及氯胺酮对烧伤后早期肝脏IFIT1和JAB1表达... 目的:观察小鼠应激相关蛋白IFIT1(Interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1)和JAB1(c-Jun平activation共处五项原则domain-binding protein 1)在肝脏的表达的细胞定位及氯胺酮对烧伤后早期肝脏IFIT1和JAB1表达的影响,初步探讨氯胺酮调节炎症反应的分子机制。方法:将15只健康C57/129小鼠随机分为3组(n=5),正常对照组、烧伤组、烧伤+氯胺酮组。采用TBSA 15~20%Ⅲ度小鼠烧伤模型;氯胺酮10mg/kg,肌肉注射,烧伤15min给予。分别于烧伤后4h脱臼处死,取肝。采用免疫印迹法(Western blot)察各组肝IFIT1和JAB1的表达情况。取正常对照组肝组织作病理切片,行免疫组织化学方法对IFIT1和JAB1的表达做细胞定位。结果:烧伤组IFIT1表达较正常对照组显著增高(P〈0.01).烧伤组JAB1表达较正常对照组显著降低(P〈0.01):氯胺酮治疗组IFIT1表达较正常对照组、烧伤对照组显著降低(P〈0.01).氯胺酮治疗组JAB1表达较正常对照组显著降低(P〈0.05)、较烧伤组显著升高(P〈0.05)。免疫组织化学方法显示.IFIT1在肝细胞胞浆表达为阳性.JAB1在肝细胞胞浆和胞核均表达为阳性。结论:烧伤早期小鼠肝组织IFIT1表达增高而JJAB1表达降低,氯胺酮可降低烧伤早期小鼠肝组织IFIT1的高表达,增高JAB1表达;氯胺酮可通过调控严重烧伤应激中IFIT1和JAB1的表达而在全身炎性反应综合症(Systemic inflammatory response syndrome SIRS)中发挥作用。 展开更多
关键词 应激相关蛋IFIT1 应激相关蛋白JAB1 全身炎性反应综合症
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SRC-1蛋白缺失对严重烧伤小鼠肝脏NF-κB表达及核转位的影响 被引量:1
10
作者 杜智勇 粟永萍 +5 位作者 杨天德 陶军 吴悦维 唐棠 冉新泽 王峰超 《重庆医学》 CAS CSCD 2008年第17期1897-1899,共3页
目的研究类固醇受体辅活化子-1(SRC-1)基因敲除小鼠严重烧伤早期肝脏核因子-kB(NF-kB)表达及核转位的变化。方法以SRC1基因敲除小鼠为实验组,以野生型小鼠为对照组,以小鼠15%~20%TBSAⅢ度烧伤为实验模型,观察两组在严重烧伤... 目的研究类固醇受体辅活化子-1(SRC-1)基因敲除小鼠严重烧伤早期肝脏核因子-kB(NF-kB)表达及核转位的变化。方法以SRC1基因敲除小鼠为实验组,以野生型小鼠为对照组,以小鼠15%~20%TBSAⅢ度烧伤为实验模型,观察两组在严重烧伤前及烧伤后1、6、12h肝脏总蛋白NF-kB表达及伤后核转位的变化,同时提取致伤前、致伤后1、6h血清标本,观察炎性细胞因子TNF-a、IL-1β、IL-6的变化。结果与野生型小鼠相比,SRC-1基因敲除小鼠严重烧伤后肝脏总蛋白NF-kB水平有所增加,而野生型小鼠有所下降。从核转位的情况来看,SRC-1基因敲除小鼠致伤后NF-kB的入核能力明显强于野生型小鼠,6h差别最大。两组致伤后炎性细胞因子TNF-a、IL-1β、IL-6均升高,但SRC1基因敲除小鼠升高更为显著。结论SRC1蛋白对严重烧伤具应激性保护作用,缺失SRC1蛋白使NF—kB功能增强更显著,致炎性细胞因子TNF-a、IL-1β、IL-6更大量产生,使整体伤情征象更重。 展开更多
关键词 类固醇受体辅活化子-1 NF-KB 基因敲除
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医学研究生创新能力的个人培养途径 被引量:9
11
作者 刘登群 龙爽 +1 位作者 李蓉 粟永萍 《山西医科大学学报(基础医学教育版)》 2011年第1期103-105,共3页
当今社会对医学专业研究生创新能力的要求越来越高。在施教者努力创造有利于研究生创新能力培养外部条件的同时,医学研究生个人也必须认识到培养自身创新能力是时代对研究生的必然要求,树立创新意识,加强自我管理,注重从多方面提高自身... 当今社会对医学专业研究生创新能力的要求越来越高。在施教者努力创造有利于研究生创新能力培养外部条件的同时,医学研究生个人也必须认识到培养自身创新能力是时代对研究生的必然要求,树立创新意识,加强自我管理,注重从多方面提高自身的创新能力。 展开更多
关键词 研究生教育 教学方法 自我管理 创新能力
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NAP-2和PF-4在烧伤后大鼠骨髓巨核细胞表达变化情况
12
作者 董岸莺 粟永萍 +2 位作者 李启明 冉新泽 艾国平 《重庆医学》 CAS CSCD 2006年第19期1754-1756,共3页
目的观察大鼠30%Ⅲ度烧伤后趋化因子NAP-2和PF-4在大鼠骨髓巨核细胞的表达变化情况。方法采用免疫组织细胞化学的方法观察烧伤后24h和15d NAP-2和PF-4表达情况。结果大鼠烧伤后24h骨髓巨核细胞特异分泌的趋化因子NAP-2和PF-4明显低于正... 目的观察大鼠30%Ⅲ度烧伤后趋化因子NAP-2和PF-4在大鼠骨髓巨核细胞的表达变化情况。方法采用免疫组织细胞化学的方法观察烧伤后24h和15d NAP-2和PF-4表达情况。结果大鼠烧伤后24h骨髓巨核细胞特异分泌的趋化因子NAP-2和PF-4明显低于正常组,烧伤后15d巨核细胞表达NAP-2和PF-4较烧伤后24h恢复,但仍低于正常对照组。结论严重烧伤可以导致大鼠骨髓巨核细胞分泌特异趋化因子NAP-2和PF-4的能力减退。 展开更多
关键词 烧伤 巨核细胞 免疫组织细胞化学 NAP-2 PF-4
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G-CSF动员循环间充质干细胞及其对小鼠颅脑损伤修复的可行性分析 被引量:10
13
作者 邓均 艾国平 +7 位作者 周桃莉 王军平 徐辉 邹仲敏 董世武 郝磊 冉新泽 粟永萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1131-1134,共4页
目的建立小鼠严重颅脑创伤模型探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)动员循环间充质干细胞(mesenchym alstem cells,MSCs)的可行性,并观察G-CSF动员的修复效应。方法以G-CSF作为动员剂,培养骨髓和外周... 目的建立小鼠严重颅脑创伤模型探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)动员循环间充质干细胞(mesenchym alstem cells,MSCs)的可行性,并观察G-CSF动员的修复效应。方法以G-CSF作为动员剂,培养骨髓和外周血来源的MSCs,计数动员前后的CFU-F。制作小鼠严重颅脑创伤模型,致伤后采用G-CSF对MSCs进行动员,在2、24、48、96、120、144、192、264、336h进行神经行为学评分、运动功能评分,并观察小鼠死亡率和病理组织切片。结果从小鼠外周血培养出MSCs,G-CSF动员后骨髓和外周血MSCs的CFU-F数量显著高于正常对照组(P<0·01)。致伤后小鼠神经行为学和运动功能评分显著低于正常对照组(P<0·01),创伤治疗组在144~192h期间评分显著高于创伤组(P<0·05)。致伤后小鼠死亡率增高,病理切片可见创伤处有出血和空泡。结论成功培养及用G-CSF动员了外周血MSCs,在成功建立小鼠严重颅脑创伤模型的基础上,显示G-CSF动员可以降低严重颅脑创伤小鼠死亡,参与了创伤修复。 展开更多
关键词 间充质干细胞 创伤 动员 G-CSF
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辐射损伤对巨核细胞造血调控因子IL-6和TNF-α的影响 被引量:4
14
作者 韩京 冉新泽 +2 位作者 粟永萍 李启明 郑怀恩 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第18期1817-1819,共3页
目的探讨辐射损伤对巨核细胞调控因子IL-6和TNF-α表达的影响。方法用RT-PCR和W estern b lot方法检测辐射后Dam i细胞IL-6、TNF-α表达水平的变化。结果辐射损伤3、5、10 Gy后,IL-6的mRNA水平和蛋白水平表达均显著低于对照组(P<0.0... 目的探讨辐射损伤对巨核细胞调控因子IL-6和TNF-α表达的影响。方法用RT-PCR和W estern b lot方法检测辐射后Dam i细胞IL-6、TNF-α表达水平的变化。结果辐射损伤3、5、10 Gy后,IL-6的mRNA水平和蛋白水平表达均显著低于对照组(P<0.05),其变化趋势是随照射剂量增加而表达逐渐降低。TNF-α在mRNA水平变化无显著性差异,但在蛋白水平表达则显示,3个剂量组均显著高于对照组(P<0.05),并随剂量增加表达逐渐升高。结论不同剂量放射损伤所致造血功能障碍与巨核细胞调控因子IL-6和TNF-α的异常表达有关。 展开更多
关键词 辐射 巨核细胞 IL-6 TNF-Α
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长期接触贫铀对大鼠遗传毒性的初步研究 被引量:7
15
作者 冷言冰 李蓉 +4 位作者 艾国平 徐辉 粟永萍 程天民 冉新泽 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期869-871,共3页
目的研究贫铀植入/摄入3个月后对大鼠的毒性作用。方法观察大鼠精子畸形率,骨髓微核率的改变,睾丸的超微结构和病理形态学改变以及采用显性致死突变试验观察贫铀对大鼠的生殖毒性。结果植入/摄入贫铀后大鼠精子畸形率和微核率均有增加,... 目的研究贫铀植入/摄入3个月后对大鼠的毒性作用。方法观察大鼠精子畸形率,骨髓微核率的改变,睾丸的超微结构和病理形态学改变以及采用显性致死突变试验观察贫铀对大鼠的生殖毒性。结果植入/摄入贫铀后大鼠精子畸形率和微核率均有增加,睾丸超微结构均有不同程度的改变,而病理形态学观察则未见显著影响。植入组大鼠受孕率明显低于对照组。结论贫铀长时间暴露可对大鼠产生生殖毒性损害以及超微结构的损伤。 展开更多
关键词 贫铀 精子 微核 毒性
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人子宫内膜细胞原代培养方法的改良 被引量:8
16
作者 陈诚 常青 +2 位作者 梁志清 艾国平 张丽龙 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期507-509,共3页
目的寻求一种简便高效的人子宫内膜上皮细胞和间质细胞分离、纯化与鉴定方法,建立稳定的子宫内膜细胞体外培养体系。方法简化Ryan等的子宫内膜细胞原代培养方法的取材,分离和培养条件,分离出高纯度的子宫内膜上皮细胞和间质细胞进行体... 目的寻求一种简便高效的人子宫内膜上皮细胞和间质细胞分离、纯化与鉴定方法,建立稳定的子宫内膜细胞体外培养体系。方法简化Ryan等的子宫内膜细胞原代培养方法的取材,分离和培养条件,分离出高纯度的子宫内膜上皮细胞和间质细胞进行体外培养和传代。结果培养成功的子宫内膜上皮细胞与间质细胞均可稳定传代,体外生长10~50d,纯度均达90%以上。结论该方法简便高效,可建立稳定的人子宫内膜细胞体外培养体系。 展开更多
关键词 子宫内膜细胞 原代培养 改良
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人乳头瘤病毒假病毒体外感染模型的建立及人α防御素5抗病毒作用 被引量:2
17
作者 耿放 王艾平 +5 位作者 陈芳 申明强 陈默 粟永萍 程天民 王军平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期473-476,共4页
目的建立用人乳头瘤病毒16亚型假病毒(HPV-16 Psv)感染宫颈癌细胞模型,并研究3种不同构型人α防御素5(HD-5)抗HPV的作用。方法将表达HPV-16假病毒衣壳蛋白的重组质粒P16L1L2和含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒Pfwb共转染293FT细胞,分... 目的建立用人乳头瘤病毒16亚型假病毒(HPV-16 Psv)感染宫颈癌细胞模型,并研究3种不同构型人α防御素5(HD-5)抗HPV的作用。方法将表达HPV-16假病毒衣壳蛋白的重组质粒P16L1L2和含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒Pfwb共转染293FT细胞,分离、纯化病毒颗粒后感染宫颈癌细胞株C-33a,同时分别给予20μg/ml的HD-5/N(天然构型)、HD-5/Acm(半胱氨酸被Acm修饰)或HD-5/Abu(半胱氨酸被Abu替换)处理,培养48 h后荧光显微镜观察和流式细胞分析病毒感染率。结果 Pfwb与P16L1L2成功转染293FT细胞并获得滴度达2.5×108TU/ml的HPV-16假病毒液,镜检和流式细胞术检测显示宫颈癌细胞C-33a能够被假病毒感染并表达GFP。HD-5/N、HD-5/Acm和HD-5/Abu对HPV-16感染C-33a细胞的抑制率分别为(96.48±5.67)%、(69.02±7.88)%和(2.71±1.53)%。与HD-5/N相比,HD-5/Acm和HD-5/Abu的抗病毒作用显著降低(P<0.01)。结论建立了基于流式细胞分析的HPV-16假病毒感染模型并将其用于抗病毒药物活性检测。发现HD-5的空间结构和分子中半胱氨酸对其抗HPV感染的活性有重要作用。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 假病毒 防御素 绿色荧光蛋白 抗病毒作用
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人β防御素2腺病毒表达载体的构建及其在大鼠真皮多能干细胞中的表达 被引量:3
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作者 李楠 肖桃元 +5 位作者 粟永萍 宗兆文 徐辉 王军平 冉新泽 刘志君 《创伤外科杂志》 2006年第1期69-72,共4页
目的构建和鉴定人β防御素2(HBD2)的重组腺病毒表达载体,并观察其转染大鼠真皮多能干细胞(dMSCs)后的表达。方法反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HBD2全长cDNA,亚克隆至穿梭质粒(pAdTrack-CMV)中,然后转化含骨架质粒(pAdEasy-1)的大肠杆... 目的构建和鉴定人β防御素2(HBD2)的重组腺病毒表达载体,并观察其转染大鼠真皮多能干细胞(dMSCs)后的表达。方法反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HBD2全长cDNA,亚克隆至穿梭质粒(pAdTrack-CMV)中,然后转化含骨架质粒(pAdEasy-1)的大肠杆菌B J5183,通过同源重组产生腺病毒载体质粒。PacⅠ酶切阳性的重组质粒后转染293细胞,包装出重组病毒载体。用所得重组腺病毒感染dMSCs细胞,并采用RT-PCR和荧光免疫组织化学检测其在dMSCs中的表达情况。结果经测序、酶切及聚合酶链反应(PCR)鉴定,表明已成功地扩增到HBD2全长cDNA,并将其顺序克隆到穿梭质粒和骨架质粒中,进而组装出腺病毒表达载体。经RT-PCR和免疫组织化学证实构建的病毒载体可感染dMSCs,并有效表达HBD2。结论本实验成功地构建了含HBD2基因的腺病毒表达载体,并证实其可在dMSCs中表达。 展开更多
关键词 人Β防御素2 腺病毒载体 真皮多能干细胞
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基因捕获成体干细胞及鉴定的初步研究 被引量:2
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作者 王明科 邹仲敏 罗成基 《山西医科大学学报》 CAS 2008年第2期112-115,F0003,共5页
目的探讨基因捕获技术应用于成体干细胞的可行性。方法线性化逆转录病毒基因捕获载体ROSAFARY,利用Lipofectamine2000转染包装细胞PA317,LacZ染色证明转染效率后,收集病毒上清,感染种植于24孔板的小鼠成肌干细胞系C2C12、人骨髓间充质... 目的探讨基因捕获技术应用于成体干细胞的可行性。方法线性化逆转录病毒基因捕获载体ROSAFARY,利用Lipofectamine2000转染包装细胞PA317,LacZ染色证明转染效率后,收集病毒上清,感染种植于24孔板的小鼠成肌干细胞系C2C12、人骨髓间充质干细胞(hBMSC)。为排除潮霉素B筛选的假阳性干细胞,以C2C12、hBMSC细胞基因组DNA为模板,PCR扩增ROSAFARY上LacZ部分序列(560 bp)进行鉴定。结果ROSAFARY脂质体转染PA317细胞后LacZ染色,400倍镜下可见2-5个蓝色细胞/视野。病毒上清感染种植于24孔板的C2C12和hBMSC,4 d后经LacZ染色,C2C12可见6个蓝色细胞/孔,400倍镜下hBMSC可见4-5个蓝色细胞/视野。最佳PCR鉴定参数为基因组模板量2μg,退火温度55.5℃,Mg2+浓度3 mmol/L。结论逆转录病毒基因捕获载体感染多种成体干细胞后LacZ染色显示可成功捕获激活状态启动子驱动的基因,为基因捕获应用于成体干细胞分化及恶性转化分子机制的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 基因捕获 成体干细胞 聚合酶链反应 Β-半乳糖苷酶
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成年C57BL/6小鼠空肠Cajal间质细胞的分离、培养及鉴定 被引量:6
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作者 刘登群 龙爽 +3 位作者 王军平 史春梦 冉新泽 粟永萍 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2011年第6期538-541,共4页
目的尝试优化体外培养成年小鼠小肠Cajal间质细胞的操作方法,为深入研究该细胞的生理功能提供一定细胞模型。方法 6~8周龄C57BL/6小鼠禁食24 h,无菌条件下截取3~5 cm中段空肠,分离平滑肌肌条并剪至小块后使用Ⅱ型胶原酶消化20 min,离... 目的尝试优化体外培养成年小鼠小肠Cajal间质细胞的操作方法,为深入研究该细胞的生理功能提供一定细胞模型。方法 6~8周龄C57BL/6小鼠禁食24 h,无菌条件下截取3~5 cm中段空肠,分离平滑肌肌条并剪至小块后使用Ⅱ型胶原酶消化20 min,离心后进行组织块原代培养,观察不同时期细胞形态。使用c-Kit免疫荧光染色鉴定细胞表型是否为Cajal间质细胞。Fluo-3 AM染色细胞内钙,观察细胞能否自发产生钙离子振荡。结果分离所得组织不含空肠上皮和固有层组织,仅为小肠肌层。联合使用胶原酶消化和组织块原代培养能够较方便地培养出原代细胞,该细胞呈梭形,且具有细胞突起,彼此交织成网状。该细胞免疫荧光染色呈c-Kit阳性,平滑肌标志物SMA阴性。钙成像分析显示其能够产生钙离子振荡。结论联合使用酶消化和组织块培养能够较方便地培养出成年小鼠的空肠Cajal间质细胞,该方法为后续探讨Cajal间质细胞的生理功能及机制提供了一定的细胞模型。 展开更多
关键词 胃肠道 CAJAL间质细胞 原代培养
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