20AA复方氨基酸联用大剂量维生素B6治疗创伤凝血障碍大鼠的实验研究

目的：探讨20AA 复方氨基酸注射液（丰诺安）＋大剂量维生素 B6新疗法对创伤性凝血功能障碍动物模型凝血功能的影响。方法实验动物为雄性 SD 鼠24只，随机分为假手术组、生理盐水组以及新疗法治疗组，每组8只。采用 Feeney′s 自由落体硬膜外撞击法加大腿骨折与放血制作大鼠多发伤模型，颈静脉插管输注20AA 复方氨基酸注射液（丰诺安）＋大剂量维生素 B6，生理盐水组输注等量的生理盐水，24 h 后，检测大鼠的凝血功能变化。结果治疗后新疗法治疗组与生理盐水组比较，血栓弹力图 R 值新疗法治疗组[（2．24±0．68）min]显著低于生理盐水组[（3．21±0．30）min]，（t ＝－0．98，P ＜0．05）；血栓弹力图 Angle 值新疗法治疗组[（81．98±1．78）deg]显著高于生理盐水组[（79．54±2．13）deg]，（t ＝2．43，P ＜0．05）。传统凝血试验结果：凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）新疗法治疗组均比生理盐水组低，而纤维蛋白原（FIB）新疗法治疗组高于生理盐水组，但其差异不显著。结论20AA 复方氨基酸注射液（丰诺安）＋维生素 B6联用能够明显改善创伤后大鼠凝血功能。

慢性特发性荨麻疹患者外周血单个核细胞分泌IFN-γ和IL-4水平检测及意义

目的 探讨Th1 /Th2细胞因子水平变化在慢性特发性荨麻疹(CIU)发病机制中的作用。方法 采用ELISA法检测37例CIU患者外周血单个核细胞(PBMC)培养上清中的细胞因子IFN γ和IL 4。结果 CIU患者IFN γ水平低于正常对照组(P<0. 05),其浓度分别为170. 58±230. 28pg/ml及340. 76±220. 35pg/ml;CIU患者IL 4水平高于正常对照组(P<0. 05),其浓度分别为41. 53±12. 57pg/ml与27. 01±13. 54pg/ml。结论 Th2细胞功能亢进及Th1功能低下在CIU发生发展中可能发挥一定的作用。

罗格列酮对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的体外抗肿瘤作用

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞MDA-MB-231体外生长影响,以评价其在人乳腺癌治疗上的应用潜力.方法:噻唑蓝(MTT)法检测罗格列酮对MDA-MB-231细胞体外生长抑制作用;应用PPARγ拮抗剂GW9662,分析罗格列酮对MDA-MB-231细胞增殖影响与PPARγ受体关系;流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-FITC和TUNEL法检测细胞凋亡.结果:罗格列酮干预下MDA-MB-231细胞G0/G1期比例上升,而S期比例下降,呈量-效关系抑制其生长,IC50=5.2μmol/L.PPARγ拮抗剂GW9662可部分逆转罗格列酮对MDA-MB-231细胞增殖抑制作用(P<0.05);100μmol/L罗格列酮还可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,TUNEL法检测的凋亡率(18.4±3.1)%与Annexin V-FITC法检测的结果一致[(16.6±2.7)%](P>0.05).结论:罗格列酮通过PPARγ介导,使MDA-MB-231细胞G1期阻滞而抑制其增殖,高浓度时还可诱导其发生凋亡,罗格列酮有望成为治疗乳腺癌的有效药物.

携带人PPARα基因高效真核表达载体的构建及其意义

目的构建可以高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体(αhPPARα)的真核细胞表达载体,为筛选作用于PPARα受体的药物提供分子平台。方法将HepG2细胞总RNA经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆hPPARα全长基因,用BamHⅠ、SalⅠ双酶切后,与相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建phPPARα-IRES2-EGFP重组质粒,用酶切及基因测序鉴定重组质粒中hPPARα基因的完整性和可靠性;重组质粒转染293细胞,荧光显微镜观察EGFP报告基因表达强度,并对转染细胞的hPPARα表达进行荧光定量PCR及免疫细胞化学检测。结果经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的293细胞中获得hPPARα的高效表达。结论成功构建重组质粒phPPARα-IRES2-EG-FP,为基于hPPARα受体靶点的药物筛选平台的建立提供了高效表达hPPARα的重组载体。

维持性血液透析患者血管平滑肌细胞p53的表达与血管钙化的关系

目的探讨维持性血液透析患者血管平滑肌细胞p53的表达与血管钙化的关系。方法选择慢性肾脏疾病5期维持性血液透析患者17例(透析时间在1年以上),均为自体桡动脉-头静脉内瘘作为透析通路的患者,因自体动静脉内瘘失功拟重建血管通路。在动静脉内瘘重建过程中,取失功动静脉内瘘动脉段作为实验组标本,同龄人群(取材于尸体肾供者)腹主动脉作为对照组。以von Kossa染色法对血管钙化进行定性检测,甲酚酞络合酮化学法对血管钙化进行定量检测,磷酸苯二钠法测定血管组织碱性磷酸酶活性,Western blotting检测血管组织p53蛋白水平,并对血管钙含量和碱性磷酸酶活性与p53的表达进行相关性分析。结果维持性血液透析患者桡动脉血管平滑肌细胞p53的表达(p53/β-actin灰度比为0.81)显著低于同龄人群腹主动脉血管平滑肌细胞p53的表达(p53/β-actin灰度比为1.72),而血管平滑肌细胞钙含量和碱性磷酸酶活性分别较同龄人群腹主动脉血管平滑肌细胞增加69%和105%(P均<0.01)。相关性分析发现,p53的表达与血管平滑肌细胞钙含量和碱性磷酸酶活性均成显著负相关(r=-0.77和r=-0.86,P均<0.01)。结论在5期慢性肾脏疾病维持性血液透析患者中血管钙化广泛存在,血管钙化伴随着血管平滑肌细胞p53蛋白表达的显著下降,这一现象提示慢性肾脏疾病患者血管平滑肌细胞p53表达的抑制可能参与了血管钙化的发生机制。

重组人PPARα基因载体phPPARα-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系的建立

目的建立体外phPPARα-IRES2-EGFP质粒高效转染并获得重组基因hPPARα高效表达的体系。方法采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将phPPARα-IRES2-EGFP转染入293细胞,荧光显微镜观察质粒转染的293细胞绿色荧光蛋白(GFP)报告基因表达强度及转染效率,并对转染细胞hPPARα的表达进行荧光定量PCR和Western Blot检测。结果荧光显微镜下可见转染phPPARα-IRES2-EGFP的293细胞GFP报告基因高表达,转染效率高达(83±9)%;并且,其hPPARαmRNA表达水平高于空载体转染对照组3个数量级,hPPARα蛋白表达也远高于对照组(P<0.01),说明导入的重组质粒能够高效表达hPPARα。结论成功建立重组质粒phPPARα-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系,为hPPARα受体功能的研究及基于hPPARα为靶标的药物筛选平台的建立奠定了基础。

含人过氧化物酶体增殖物激活受体δ基因高效真核表达载体的构建及其意义

目的构建高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体δ(hPPARδ)的真核表达载体,为hPPARδ受体功能和基于hPPARδ受体靶点的药物筛选提供分子研究平台。方法采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),从HepG2细胞总RNA克隆hPPARδ全长基因,与经BamHI、SalI相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建重组质粒phPPARδ-IRES2-EGFP,经酶切及基因测序鉴定重组质粒中hPPARδ基因的完整性和忠实性;荧光显微镜观察重组质粒转染的293细胞GFP报告基因表达强度,并对转染细胞hPPARδ的表达进行荧光定量PCR和免疫细胞化学检测。结果经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的293细胞中获得hPPAR6的高效表达。结论成功构建phPPARδ-IRES2-EGFP重组质粒。

携带人PPARγ1受体基因高效真核表达载体的构建及其意义

目的:构建高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体γ1(hPPARγ1)的真核表达载体,为hPPARγ1受体功能和基于hPPARγ1受体靶点的药物筛选提供分子研究平台。方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从HepG2细胞总RNA克隆hPPARγ1全长基因,与经XhoI、SmaI相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建重组质粒phPPARγ1-IRES2-EGFP,经酶切及测序鉴定重组质粒中hPPARγ1基因的完整性和忠实性;荧光显微镜观察重组质粒转染的293细胞GFP报告基因表达强度,并对转染细胞hPPARγ1的表达进行荧光定量PCR及免疫细胞化学检测。结果:经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的293细胞中获得hPPARγ1的高效表达。结论:成功构建phPPARγ1-IRES2-EGFP重组质粒,为基于hPPARγ1受体靶点的药物筛选平台的建立及受体功能研究提供了高效表达载体。

重组质粒phPPARδ-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系的建立

目的:建立phPPARδ-IRES2-EGFP重组质粒高效体外转染表达的体系。方法:采用阳离子脂质体Lipofectamine2000将phPPARδ-IRES2-EGFP转染入293细胞,荧光显微镜观察质粒转染细胞GFP报告基因表达强度及转染效率,并对转染细胞hPPARδ的表达进行荧光定量PCR和Western Blot检测。结果:荧光显微镜下可见转染phPPARδ-IRES2-EGFP质粒的293细胞绿色荧光蛋白(GFP)报告基因高表达,转染效率高达(85±10)%;荧光定量PCR和Western Blot检测的结果表明,phPPARδ-IRES2-EGFP转染的293细胞其hPPARδ表达水平高于空载体转染对照组(P<0.01)。结论:成功建立phPPARδ-IRES2-EGFP质粒的高效体外转染表达体系,为hPPARδ受体功能的研究及基于hPPARδ为靶标的药物筛选平台的建立奠定了基础。

加热对大鼠表皮干细胞HSP70表达及细胞增殖的影响

目的：分离、培养并鉴定SD大鼠表皮干细胞；观察不同温度加热对表皮干细胞热耐受预测因子HSP70表达和细胞增殖的影响。方法体外分离培养大鼠表皮干细胞，用倒置显微镜观察其形态，以角质形成细胞作为对照；采用细胞免疫荧光技术对β1-整合素、干性标志物K19、α6及分化标志物K10进行鉴定；实验对37、41、43、45、47、49℃热处理的表皮干细胞采用MTT法测定细胞吸光度值，计算细胞存活率；Western blot法测定HSP70表达的变化。结果分离的细胞体积小，核质比大，集落生长，呈典型的铺路石样结构；实验组细胞干性标志物K19、β1-整合素及α6呈阳性表达，分化标志物K10表达阴性；随着温度升高，细胞HSP70表达增加，于47℃时表达量达到峰值，同时细胞随温度升高存活率逐渐降低，于45℃～49℃时降低幅度下降成一水平趋势。结论成功建立了SD大鼠表皮干细胞分离、培养方法，升高温度可抑制表皮干细胞增殖能力，细胞存活率下降，提示HSP70表达增加对表皮干细胞热损伤可能具有保护作用。

防御素调节腹盆腔放疗肠道微生态失调的研究进展

防御素作为内源性的抑菌/杀菌剂对胃肠道菌群平衡有重要作用,还可用来改善肠内菌群生态失调。放疗在杀伤癌细胞同时对正常细胞有较大影响,影响肠道屏障和肠内菌群平衡。而防御素有协同抗微生物活性和免疫应答作用,可改善腹盆腔放疗后胃肠道微生态失调。本研究对防御素、肠道微生态、腹盆腔放疗后防御素与微生态失调以及防御素对腹盆腔治疗的影响等做一综述。

中国人群IL-1R1基因变异及其对跨膜区功能影响的预测

目的 检测中国人白细胞介素 1Ⅰ型受体基因 (interleukin 1receptortypeⅠ ,IL 1)调控区和编码区的单核苷酸多态性 (singlenucleotidepolymorphisms ,SNPs) ,并初步探讨其可能对中国人IL 1R1的功能影响。方法 采用直接测序的方法检测基因的 5′区、编码区、部分内含子区和 3′区 ,以确定中国人群中IL 1R1基因SNP的位置和类型 ,用生物信息学方法对编码区SNP的功能进行了预测。结果 在 964 3bp的测序长度中 ,共发现了 16个SNP ,包括 5′区 4个 ,内含子区 4个 ,编码区 1个 ,3′非编码区 7个。其中一个SNP能引起IL 1R1跨膜区氨基酸的替代 ,生物信息学分析显示它能够引起跨膜区结构的改变。结论IL 1R1基因变异可能对IL 1R1的功能产生影响。