人凝血因子Ⅸ基因cDNA在大肠杆菌中表达的初步报告

我们首次将人凝血因子Ⅸ基因cDNA亚克隆于原核细胞表达载体pKK233-2,以期获得人重组凝血因子Ⅸ。实验结果,我们得到重组表达质粒pKK233-FIX1和pKK233-FIX2,以IPTG诱导,在大肠杆菌JM103中表达出一特定的、与人凝血因子Ⅸ基因cDNA表达相关的蛋白质。ELISA定性实验表明:这一特定的蛋白质具有人凝血因子Ⅸ抗原性。此项研究为最终获得人重组凝血因子Ⅸ打下了基础。

人X染色体单拷贝序列的分离及鉴定的研究

本研究以人/鼠(CHO-K1)细胞总DNA为探针对人X染色体DNA文库进行了3轮筛选,单拷贝顺序的检出率为1.45％。其中DXFD52,71,73,75分别与一组含人X染色体及不含人X染色体的人/鼠杂种细胞DNA进行Southern杂交分析,确定DXFD52,71,73,75含人X染色体专性DNA顺序。采用染色体原位杂交的方法,将DXFD52精确定位于Xq12-q13。并对其进行了部分DNA顺序分析,结果证实DXFD52是人基因组中至今未被分离到的一个单拷贝DNA片段。继而对DXFD52进行限制性酶切图谱分析,并以其为探针在中国重庆地区正常人群中(随机个体38例、3个正常家系成员11例)进行了RFLP研究,发现该探针具有识别Hind Ⅲ,Bgl Ⅱ,Hinf Ⅰ的RFLP。