以小鼠精子/睾丸特异性抗原为基础的合成肽免疫避孕效应研究

目的 研制以精子 睾丸特异性抗原为基础的多价嵌合肽避孕疫苗。方法 选择小鼠精子 睾丸特异性抗原Sp17、Cy ritestin作为对象 ,采用分子设计的方法与外源性牛核糖核酸酶非选择性T细胞表位组合合成新型嵌合肽 3 5肽 ,并对其免疫效应进行研究。结果 该嵌合肽可刺激小鼠产生较高效价的血清和阴道粘膜特异性抗体 ,诱导脾脏淋巴细胞增殖 ,促进细胞因子IL 4的分泌 ;将其与佛氏佐剂混悬 ,免疫雌性BALB c小鼠可明显降低受孕率和每胎产仔率 ,其抗血清可显著抑制体外精 卵结合和融合。结论 新型嵌合肽具有较明确的抗生育作用 ,提示以分子设计、蛋白质优化方案进行多价避孕疫苗的研究是可行的。

《医学免疫学》本科生教学的几点体会

医学免疫学是医学院校本科教育开设的一门重要基础课.由于免疫学的一些概念和理论非常抽象,新理论和新技术进展迅速,它成为医学生难学的课程之一.如何使其内容由难变易、由抽象变具体、由深奥变浅显,这是授课教师在教学上值得探讨的问题.几年来,我们在免疫学教学中,注重加强教学改……

慢性乙型肝炎患者HBV特异性CTLs的KIR表达研究

目的检测慢性乙型肝炎患者外周血中HBV特异性CTL细胞表面杀伤细胞抑制性受体(KIR)的表达情况。方法利用MHC-Ⅰ-肽-五聚体(pentamer)技术结合流式三色分析技术,直接离体情况下检测(directex vivo)慢性乙型肝炎患者不同HBV特异性CTL细胞表面KIR的表达情况。结果在慢性乙型肝炎患者,KIR阳性的CD8+T细胞明显增加;KIR阳性的HBcAg(18-27)特异性CTL、HBeAg(335-343)特异性CTL、HBp(575-583)特异性CTL的百分比分别为12%、20%、35%。结论慢性乙型肝炎患者不同HBV特异性CTL表达KIR,这可能与慢性乙型肝炎患者HBV特异性CTL功能低下密切相关。

免疫磁珠负性分离纯化小鼠脾脏CD8^+ T细胞

目的探讨小鼠脾脏CD8^+ T细胞的免疫磁珠负性分选方法,并对分选后所得细胞进行纯度、活力及功能检测。方法以免疫磁珠负性分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD8^+ T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝检测细胞活力并用ConA刺激检测增殖能力。结果经过流式细胞仪测定免疫磁珠负性分选后的小鼠脾脏CD8^+ T细胞纯度达到(91.6±3.6)%,台盼兰染色细胞活力为(94.9±3.2)%,ConA刺激72h后有(56.3±1.7)%的细胞增殖。结论免疫磁珠负性分选法能够分选出高纯度的CD8^+ T细胞,并且不影响分选靶细胞的细胞活力和功能。

宫颈癌细胞GM-CSF与COX-2/iNOS表达的相关性研究

目的研究宫颈癌细胞中人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的表达对环氧合酶-2(COX-2)和诱导性一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探讨GM-CSF在宫颈癌发生发展中的作用。方法收集临床宫颈癌标本52例及正常宫颈15例和宫颈上皮内瘤变(CIN)组织标本21例作为对照进行免疫组织化学染色,分析宫颈癌组织GM-CSF的表达与COX-2和iNOS表达的相关性;为了从细胞水平进一步论证其相关性,本实验使用宫颈癌细胞系Caski细胞,Caski细胞经GM-CSF转染后过表达GM-CSF,并通过RT-qPCR和Western blot检测COX-2和iNOS mRNA及蛋白的表达情况,以空质粒转染的Caski细胞为对照,在细胞模型中探讨GM-CSF强制表达对COX-2和iNOS表达的影响。同时,通过GM-CSF siRNA干扰Caski细胞GM-CSF表达后,用RTqPCR及Western blot方法检测iNOS/COX-2 mRNA及蛋白表达情况。结果免疫组化结果显示,宫颈癌组织GM-CSF表达明显低于正常组和CIN组(P均<0.05),而COX-2及iNOS的表达显著高于正常组(P<0.01),但与CIN组无明显差异;统计学分析发现GM-CSF与COX-2/iNOS的表达呈负相关(r=-0.542/-0.499)。细胞水平结果显示与空质粒转染的细胞相比,转染GM-CSF的Caski细胞COX-2/iNOS在mRNA及蛋白表达水平都有显著下降(P均<0.05);GM-CSF在被干扰后,干扰组与对照组相比COX-2/iNOS在mRNA及蛋白表达水平有明显差异(P均<0.05)。结论在组织和细胞表达水平GM-CSF与COX-2/iNOS的表达均呈负相关,GM-CSF可能通过下调COX-2/iNOS表达而具有抗宫颈癌作用。

小鼠肝素酶H-2Kb限制性CTL表位的实验鉴定

目的实验鉴定H-2Kb限制性小鼠肝素酶(mHpa)CTL表位。方法5条mHpa表位分别负载C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞,并进一步诱导产生表位特异性的效应细胞,采用标准4 h51Cr释放试验检测效应细胞对不同靶细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果5条mHpa CTL表位中,仅mHpa398-405和mHpa519-526可以诱导小鼠产生特异性CTL,对同来源的B16黑色素瘤细胞、Lewis肺癌细胞和EL-4淋巴瘤细胞具有明显的免疫杀伤效应,而对H-2Kb阴性的P815肥大细胞瘤细胞不具有免疫杀伤效应,进一步研究发现,上述多肽特异性CTL对自体淋巴细胞和DC细胞不具有杀伤效应,另一方面,mHpa398-405和mHpa519-526还可促进效应细胞分泌IFN-γ的能力。结论mH-pa398-405、mHpa519-526为小鼠肝素酶来源且受H-2Kb限制性CTL表位,小鼠体内可以诱导产生表位特异性的CTL反应。

胸腺肽α1体外刺激胃癌患者外周血单个核细胞对淋巴细胞亚群影响

目的观察胸腺肽α1(thymosin α1,Tα1)体外刺激培养胃癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mono-nuclear cells,PBMCs)对淋巴细胞亚群分化及分泌细胞因子谱的影响,分析Tα1对肿瘤患者免疫功能的影响。方法分离32例胃癌患者及18例健康自愿者PBMCs,50、10、1μg/mlTα1体外刺激培养2d;流式细胞仪检测CD4+、CD8+、CD4+CD25+Foxp3+T细胞百分比、CD4+/CD8+变化及分泌Th1/Th2细胞因子谱变化。结果 Tα1体外刺激PBMCs后,胃癌患者及健康自愿者的CD4+、CD8+T细胞水平及CD4+/CD8+比值均无明显变化;健康自愿者CD4+CD25+Foxp3+T细胞水平无明显变化,胃癌患者CD4+CD25+Foxp3+T细胞水平明显提高(P<0.05);1μg/mlTα1促进胃癌患者PBMCs分泌IL-1β、TNF-α,10μg/ml促进胃癌患者PBMCs分泌IL-6(P<0.05),健康自愿者PBMCs分泌细胞因子谱变化不明显(P>0.05)。结论 Tα1体外刺激胃癌患者PBMCs,提高CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞亚群水平,可能对肿瘤患者抗肿瘤免疫起抑制效应。

Toll-like receptor激动剂耐受分子机制和疟原虫慢性感染

小剂量LPS预刺激可引起内毒素耐受,能提高小鼠在致死剂量LPS再次刺激后的存活率,其机制可能与铎样受体TLR(Toll-like receptor)4信号通路的下调有关。近年来的研究发现,其他TLR激动剂同样可以引起宿主对相应TLR激动剂和LPS的耐受,后者称为交叉耐受(cross tolerance),而且疟原虫慢性感染同样能诱导类似TLR激动剂耐受的现象,因此,研究TLR激动剂耐受分子机制有助于脓毒血症预防和对慢性感染机制的理解。

LncRNA LOC100506123对胰腺癌细胞增殖及迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)LOC100506123对胰腺癌细胞增殖及迁移的影响。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)技术检测胰腺癌组织及细胞系(AsPC-1、BxPC-3、Panc-1、CFPAC-1,以正常胰腺导管上皮细胞HPDE为对照)中LOC100506123的表达情况。并通过siRNA技术下调LOC100506123表达,构建siRNA经Lipofectamine 2000^(TM)脂质体转染细胞(对照组为siR-NC,实验组为siR-1、siR-2),采用CCK-8、Transwell小室实验分别检测胰腺癌细胞增殖和转移能力。结果 1LncRNA LOC100506123在胰腺癌组织及细胞系中表达显著升高(P<0.05)。2下调LOC100506123表达,胰腺癌细胞的增殖及迁移能力显著降低(P<0.05)。结论高表达的LncRNA LOC100506123能促进胰腺癌细胞的增殖及迁移。

轮状病毒致腹泻机制的研究进展

轮状病毒(Rotavirus,RV)是发展中国家致5岁内婴幼儿胃肠道感染,引起感染性腹泻的重要原因,每年因此而死亡的病例高达600,000多人。[1]近年来对此的研究也越来越多,但是其引起腹泻的具体病理生理机制始终未达成统一的说法。目前主要是有两种假说,即轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)假说和肠道神经系统(ENS)假说。对于轮状病毒腹泻的预防及治疗,现阶段主要是进行减毒活疫苗预防,但其疗效不甚令人满意,并且有可能导致肠梗阻。[2-3]本文将对轮状病毒致婴幼儿腹泻的可能机制及其研究进展进行综述,此外,针对其独特的致病机制将讨论轮状病毒感染可能的预防策略。

C5a/C5aR通路对约氏疟原虫增殖和小鼠生存的影响

目的观察C5a/C5aR通路对约氏疟原虫17XL(P.y17XL)的增殖及其对BALB/c小鼠致死率的影响。结论将实验小鼠分为正常BALB/c组和C5aR-/-BALB/c组,每组5只,相同剂量的P.y17XL(2×105)分别感染正常BALB/c组小鼠和C5aR-/-BALB/c组小鼠,于感染后0、2、4和6d观察两组小鼠原虫血症和存活率的变化,并且采用ELISA检测感染P.y17XLBALB/c小鼠血清中C5a的水平。结果与正常组小鼠相比,C5aR-/-组小鼠生存期缩短,P.y17XL在C5aR-/-组小鼠的原虫血症较野生株小鼠高(P<0.05),而P.y17XL感染小鼠的血清中C5a含量低于未感染的小鼠。结论 C5a/C5aR能够抑制P.y17XL的增殖,并能延长感染小鼠的生存期。

Toll样受体激动剂不同给予时间对P.y17XL感染BALB/c小鼠原虫血症及存活率的影响

目的观察Toll样受体(TLR)激动剂不同给予时间对约氏疟原虫17XL(P.y17XL)感染BLAB/c小鼠原虫血症及存活率的影响。方法BALB/c小鼠分为6组,每组5只,感染前(D-1)和后(D+1)24 h分别尾静脉注射20μg TLR3激动剂Poly(I:C)和10μg TLR7激动剂R837(以注射或未注射200μl PBS组为阴性对照),然后每只小鼠腹腔注射2×105P.y17XL,感染后隔天查小鼠的原虫血症,记录原虫血症和存活率。结果与对照组小鼠比较,给予Poly(I:C)D-1组生存期缩短,原虫血症较野生株小鼠高,差异有统计学意义(P<0.05),而给予TLR7激动剂R837组,无论是D-1或D+1组,其生存期均延长,原虫血症较野生株小鼠低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TLR3激动剂Poly(I:C)D-1能够促进P.y17XL的增殖,降低感染小鼠的生存期;而TLR7激动剂R837无论是D-1或D+1给予均能抑制P.y17XL的增殖,并能延长感染小鼠的存活时间。