基于协同创新理念下的基础医学学科群建设的研究

党的十八大明确提出创新驱动发展的重大战略部署,要积极推动协同创新,建立协同创新的战略联盟,加快创新型国家建设步伐。如何加强基础医学学科协同创新,提升基础医学＂人才、学科、科研＂三位一体的创新能力,成为当下思考的重点。本文紧扣协同创新概念在新时期的意义,结合工作实践进行理论思考,探索基础医学学科协同创新模式。

天然免疫细胞对急性HBV感染作用机制研究进展

研究表明HBV感染能引起肝脏免疫损伤。过去认为适应性免疫应答在机体抗HBV感染及其引起的肝脏病变中发挥着主要作用。现在研究证实被誉为"机体天然免疫核心器官"的肝脏拥有大量天然免疫细胞,在HBV感染过程中扮演着重要角色,而且很有可能直接决定着急性HBV感染的临床结局和预后。急性HBV感染是感染HBV发病后的初期阶段,是乙肝治愈和防止转为慢性乙肝的关键。研究肝脏天然免疫细胞在急性HBV感染中的作用及机制对阐明HBV免疫致病机制、指导临床科学开展抗病毒治疗、防止急性感染的慢性化发展等方面有非常重要的意义。

CTL体外杀伤效应的特异性和敏感性影响因素的研究

目的 观察影响CTL体外杀伤效应的特异性和敏感性的主要因素。方法 抗原OVA免疫小鼠C5 7BL 6 ,取免疫后小鼠脾细胞 ,先用ELISPOT法检测CTL的活化 ,然后抗原肽OVA2 57- 2 6 4体外刺激免疫后的脾细胞 5d ,51 Cr释放法观察不同因素对CTL的体外杀伤效果的影响。结果 ELISPOT检测结果显示抗原免疫组产生了强CTL应答 ,而PBS免疫组没有应答。游离多肽的存在显著降低杀伤的效率 ,IL 2和Ficoll Hypaque离心去除死细胞可提高体外杀伤的效率。ConA的存在可以使CTL体外非特异的杀伤靶细胞。结论 CTL体外杀伤实验中必需尽量去除游离多肽 。

基于survivin的“模拟病毒”瘤苗对结肠癌免疫治疗的作用

背景与目的:结肠癌的免疫治疗在肿瘤的综合治疗中发挥了重要作用。本研究以结肠癌的survivin为靶分子,构建基于survivin的"模拟病毒"瘤苗,并探讨该瘤苗对结肠癌的免疫治疗作用。方法:制备基于survivin的"模拟病毒"瘤苗,用扫描电镜和免疫印迹(Western blot)进行鉴定。酶联免疫斑点试验(Enzyme linked immunos-pot assay,ELISPOT)和标准51Cr释放试验分别检测瘤苗所诱导的特异性CTL活性,并对Babl/c小鼠荷瘤模型进行免疫学效应评价。结果:扫描电镜和免疫印迹证实"模拟病毒"瘤苗制备成功,并能有效介导"模拟病毒"瘤苗所携带基因的表达。ELISPOT和标准51Cr释放试验显示体内有效激发抗原特异性CTL效应,可诱导CTL产生IFN-γ等细胞因子,对结肠癌细胞系CT26有明显的杀伤毒性,杀伤率为56.4%;肿瘤治疗实验证实"模拟病毒"瘤苗能有效抑制肿瘤的生长速度,提高荷瘤动物的生存率,与对照组相比差异显著(P<0.05)。结论:基于survivin的"模拟病毒"瘤苗能有效激发出特异性CTL应答,并在荷瘤动物模型中有效抑制结肠癌细胞CT26的生长,提高荷瘤动物的生存率,为新型结肠癌治疗性疫苗的设计提供了新思路。

基于survivin的肿瘤生物治疗研究进展

survivin是一种细胞凋亡抑制蛋白,属于IAP(inhibitor apoptosis protein)蛋白质家族。由于其独特的结构、特殊的组织学分布,成为肿瘤生物治疗领域的研究热点,已有大量研究证明其作为治疗靶点的有效性。本文着重综述survivin在肿瘤生物治疗策略中的研究进展。

MHCⅠ类分子胞内转运机制研究进展

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子在细胞内的转运过程大致可分为以下3个环节:1)新合成的MHCⅠ类分子在内质网(endoplasmic reticulum,ER)腔内装载抗原肽;2)肽-MHC分子复合体经过囊泡转运由高尔基体(Golgi apparatus)到达细胞膜表面,活化CD8+T细胞;3)细胞对MHCⅠ类分子的回收过程。近年来的研究显示,此转运过程中涉及泛素化、内吞作用等机制,而多种病毒可干扰MHCⅠ类分子的各转运环节,达到免疫逃避的目的。故本文针对近年该领域的研究进展作一综述。

医学本科生免疫学实验课程建设的探讨

医学免疫学是一门重要的医学基础课程,实验课程是医学免疫学的重要部分。为了提高实验课的教学质量,对免疫学实验课程体系进行了较系统的改革,取得了较好的教学效果。

乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达研究

目的:检测乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达情况及PD-1在Treg中发挥的作用。方法:用流式细胞术检测乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达情况。结果:乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率为(48.7±2.9)%,显著高于乙肝疫苗应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率(16.3±1.4)%。结论:乙肝疫苗无应答者外周血Treg细胞的PD-1表达率的显著上调,有可能参与了Treg的抑制机制。

慢性乙型肝炎患者外周血T细胞KIR表达研究

目的:检测慢性乙型肝炎患者外周血T细胞表面KIR的表达情况。方法:采用三色流式细胞术检测慢性乙型肝炎患者外周血CD4+T细胞和CD8highT细胞表面KIR分子表达,并与正常外周血比较。结果:慢性乙型肝炎患者外周血中CD8highT细胞KIR表达明显高于对照组CD8highT细胞。正常外周血CD4+T细胞几乎不表达KIR,慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+T细胞表达KIR。结论:慢性乙型肝炎患者T细胞表面KIR表达明显增加。

基于HPV16的新型伪病毒治疗MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的实验研究

目的构建基于人乳头状病毒(human papilloma virus,HPV)16型的新型伪病毒,探讨对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用,为临床治疗系统性红斑狼疮提供实验依据。方法将12只3月龄MRL/lpr狼疮小鼠随机均分为治疗组和对照组,治疗前后测定尿蛋白、血清尿素氮、肌酐及抗ds-DNA抗体滴度。结果治疗组小鼠治疗后的尿蛋白、血清尿素氮、肌酐及抗ds-DNA抗体均下降,与治疗前有显著性差异(P<0.05),而对照组治疗前后无显著性差异(P>0.05),并且治疗组小鼠的平均生存期比对照组明显延长(P<0.05)。结论基于人乳头状病毒16型的新型伪病毒可显著改善MRL/lpr小鼠的免疫状况和肾脏功能,提高平均生存期。该研究结果为临床治疗系统性红斑狼疮提供了新的启示。

靶向DNA特异性B细胞在系统性红斑狼疮中的治疗研究进展

系统性红斑狼疮（SLE）主要是由多克隆自身反应性B细胞介导的自身免疫性疾病。其直接的致病因子是多克隆自身抗体。并以免疫复合物的形式造成多种组织器官损伤。SLE患者普遍性的特点是其血清中存在多种自身抗体。其中。抗双链DNA抗体不仅具有诊断学价值。而且是导致皮肤黏膜、关节和肾脏疾病的主要致病性抗体^[1,2]。作为抗双链DNA抗体来源的DNA特异性B细胞，在发病中扮演关键角色^[3]。

HPV16的新型伪病毒对DNA特异性B细胞的靶向实验研究

目的:构建人乳头状病毒(human papilloma virus,HPV)16型的新型伪病毒,并检测其对DNA特异性B细胞(R4A)的靶向性。方法:利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外变性与复性过程中将病毒蛋白包装绿色荧蛋白EGFP表达型质粒,形成伪病毒。透射电镜观察病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的结构,并转染R4A细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测其转染效率。结果:透射电镜观察证实病毒蛋白可自我组装成VLP,在转染R4A细胞后,荧光显微镜和流式细胞仪成功检测到荧光的表达。结论:HPV16的新型伪病毒能成功转染R4A细胞,为系统性红斑狼疮(SLE)的靶向治疗提供了理想的策略。

基于Survivin的模拟病毒瘤苗体外激发CTL杀伤活性的实验研究

目的探讨基于Survivin的模拟病毒瘤苗体外激发细胞毒性T细胞(cytotoxicTlymphocytes,CTL)对乳腺癌细胞的杀伤作用。方法制备含有Survivin的模拟病毒瘤苗,体外刺激HLA-A2·1阳性健康者外周血单个核细胞(peripheralbloodmononu-clearcell,PBMC),用酶联免疫斑点实验(enzymelinkedimmunospotassay,ELISPOT)和标准51Cr释放实验分别检测瘤苗所诱导的特异性CTL活性。结果Survivin模拟病毒瘤苗能够在体外诱导出特异性CTL,对HLA-A2·1阳性的乳腺癌细胞系MCF-7有明显的杀伤毒性,杀伤率为56·4%;并可诱导CTL产生IFN-γ等细胞因子,ELISPOT显示斑点数为287个/105细胞,P<0·05。结论模拟病毒瘤苗能有效激发出特异性CTL应答,为新型乳腺癌治疗性疫苗的设计提供了新思路。

肝癌患者CD4^+CD25^+调节性T细胞的检测及其临床意义

背景与目的CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+regulatoryTcells)在自身免疫耐受、移植和抗肿瘤应答中起着重要的作用,它们在肿瘤患者中的作用机制尚未阐明。本研究分析、探讨肝癌患者肿瘤组织和外周血CD4+CD25+调节性T细胞频率的临床意义。方法应用流式细胞仪分析肝癌患者的肿瘤组织、外周血和非肝癌对照组中单个核细胞(PBMCs)的CD4+CD25+调节性T细胞频率。结果肝癌患者外周血CD4+CD25+T细胞占PBMCs(6.9±2.8)%,肝癌组织CD4+CD25+T细胞占(6.7±1.6)%,均较对照组显著增高。并且CD4+CD25+T细胞的阳性率与淋巴结转移率和TNM分期存在相关性。淋巴结转移阳性和TNM分期越晚,CD4+CD25+T细胞的阳性率越高。结论CD4+CD25+调节性T细胞在肝癌患者中比例升高,可能是肝癌患者细胞免疫功能削弱的机制之一。

小鼠巨噬细胞功能极化可塑性的初步探讨

目的通过鉴定小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)的功能表型,从而研究巨噬细胞功能极化的可塑性及其内在机制。方法采用流式细胞术检测体外诱导分化的小鼠骨髓来源巨噬细胞纯度;采用荧光定量PCR技术检测由RAW264.7极化的M1、M2巨噬细胞中M1、M2特定标记基因的表达来鉴定RAW264.7的功能状态;小鼠BMDM极化为M1、M2巨噬细胞时,荧光定量PCR技术检测M1、M2中特定标记基因TNF-α、IL-6、Arginase、Fizz-1 mRNA水平的表达,组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin A(TSA)、DNA去甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞(Aza)刺激M1、M2巨噬细胞后,检测TNF-α、IL-6、Arginase、Fizz-1 mRNA水平表达的变化。结果 RAW264.7细胞经LPS刺激8 h极化为M1巨噬细胞;RAW264.7细胞经IL-4体外刺激24 h极化为M2巨噬细胞。小鼠BMDM在LPS、IL-4刺激下,分别极化为M1、M2巨噬细胞,改变体外刺激条件,M1巨噬细胞可重分化为M2样巨噬细胞,M2巨噬细胞可重分化为M1样巨噬细胞,M1样巨噬细胞和M2巨噬细胞是介于M1、M2中间状态的2种巨噬细胞;药物TSA、Aza的加入使M1、M2中特定标记基因TNF-α、IL-6、Arginase、Fizz-1 mRNA水平表达增加。结论巨噬细胞的功能极化具有可塑性,巨噬细胞的极化可能与染色质状态的改变有关。

多肽序列的结构特征与其MHC限制性

从多肽序列的一级结构出发,基于多肽序列中氨基酸侧链间距离和氨基酸侧链的电性特征,构建了多肽序列特征矢量,简称ζ矢量,选取文献中主要组织相容性复合物(MHC)中的14个A^d限制性和14个非A^d限制性多肽序列作为训练集建立辅助性T细胞(helper T lymphocytc,Th)表位预测的定量模型,为了检验该预报系统的精确性,进行了随机抽样检验和交互检验。结果表明,该预报系统具有稳定性好、预测能力强的特点,该方法可用于人的MHC Ⅰ和Ⅱ类表位的预测、蛋白质抗原免疫识别、亚单位疫苗分子设计及研制。

鼠胰岛素B链HLA-A*0201限制性CTL表位拮抗型改造肽的设计与鉴定

目的设计并鉴定具有负调致病细胞毒性T细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)免疫应答功能的改造肽配体(al-tered peptide ligand,APL),为基于胰岛素自身抗原的I型糖尿病特异性免疫治疗奠定基础。方法利用InSilico技术模拟构建TCR-pMHC(TCR-HLA-A*0201-mInsB5-14)复合物三维结构,根据结构选择改造位点P6;通过保守/不保守单个氨基酸虚拟替换得到若干候选APL;通过自由能变化计算、相对亲和力检测、细胞因子分泌水平检测等体外功能实验,初步鉴定具有拮抗效应的APL。结果筛选得到的APL mInsB5-14H6F(H→F)与天然肽mInsB5-14空间结构相似,能与HLA-A*0201分子结合,其HLA-A*0201分子的相对亲和力与mInsB5-14相近。该APL作用下mInsB5-14刺激CD8+T细胞分泌IFN-γ的水平明显低于天然肽单独刺激下特异性CTL分泌IFN-γ的水平(P<0.05)。结论基于天然自身抗原表位mInsB5-14改造得到的mInsB5-14H6F是HLA-A*0201限制性的APL,该APL通过降低致病CTL特异性分泌IFN-γ的水平,可能诱导HLA-A*0201转基因NOD小鼠的自身耐受,从而为I型糖尿病治疗性疫苗的研发奠定了基础。

泰素耐药相关基因-3细胞毒性T淋巴细胞表位负载树突状细胞疫苗的体外免疫效应研究

目的探讨泰素耐药相关基因(TRAG)3来源的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位负载树突状细胞疫苗的体外免疫效应,为临床开展基于TRAG3表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法采用标准Fmoc方案合成表位肽,以反相高压液相色谱仪(RPHPLC)纯化、分析多肽,质谱鉴定多肽;从外周血单个核细胞(PBMC)分离培养树突状细胞(DC),应用相差显微镜和电镜从形态学上鉴定DC,采用流式细胞仪(FACS)分析DC表型;将TRAG3CTL表位肽(50μg/ml)负载的DC体外刺激PBMC3周,应用51Cr释放分析检测效应细胞CTL活性,同时应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测效应细胞IFNγ的分泌。结果Fmoc方案合成的表位肽纯度>90%,质谱鉴定的分子量与预计值一致;PBMC分离培养的DC在光镜、电镜下显示了其特殊形态,FACS分析证实其具有成熟DC的表型;经TRAG3表位肽负载的DC在体外能够有效活化特异性抗瘤CTL反应,并能显著刺激效应细胞内IFNγ的释放。结论TRAG3CTL表位肽负载的DC疫苗在体外能够有效激发抗瘤CTL免疫反应,可开展进一步的临床实验。

IL-17与肺部感染性疾病的相关性研究进展

白细胞介入17(Interleukin17,IL-17)是CD4+的T细胞亚群Th17细胞所产生的一种炎症细胞因子,由于其具有强大的募集粒细胞以及促进各种炎症细胞因子释放的作用,其与哮喘、肺部感染等疾病有密切相关性,其在肺部感染疾病中发挥重要作用,如:IL-17在气道炎症疾病中的机制等,鉴于IL-17的生物活性较多,而参加各种肺部疾病有明显的相关性。现就IL-17与肺部感染性疾病的相关性做一综述。