研究生医学实验动物学课程的教学改革实践

根据研究生教学特点，对其医学实验动物学课程教学进行改苹实践。根据实验动物学的最新进展、研究生的知识需求及我们的科研方向共分实验动物遗传工程、实验动物胚胎工程、异种移植、实验动物与比较基因组学、实验用小型猪、无菌动物与微生态学、实验动物与生物安全性、动物实验基本技术与方法8个专题向学生授课，力争紧跟学科发展动态，强调知识的前沿性、综合性和交叉性，促进研究生的科研能力和创新能力的培养，创建研究生医学实验动物学教学的新模式。

大鼠糖尿病溃疡动物模型的初步研究

目的构建大鼠糖尿病溃疡动物模型,观察评价该模型的临床及病理特点。方法利用磁片循环压迫的方法,构建大鼠糖尿病溃疡动物模型,并从整体,组织和生化三个层次对糖尿病溃疡进行了研究。结果构建出了一个可以复制的糖尿病溃疡动物模型,该模型具有组织坏死、白细胞聚集以及高浓度晚期糖化终末产物等特征。结论利用缺血再灌注法构建了大鼠糖尿病溃疡动物模型。其病理改变与人极为相似,是一种很好的用于糖尿病溃疡发病机制和治疗研究的动物模型。

抗生素诱导的胃肠道菌群失调动物模型的建立

目的建立稳定的抗生素诱导的胃肠道菌群失调的动物模型。方法SPF级的BALB/c雌性小鼠随机分组,一组随机饮用0.5 mg/mL的头孢曲松溶液,一组灌胃125 mg/mL的头孢曲松溶液,连续4 d后检测盲肠菌群的变化,并且检测停用抗生素一周后菌群是否恢复正常。结果两种途径均能诱导菌群失调,且停用抗生素一周内难以恢复正常水平,但灌胃大剂量抗生素组小鼠的肠黏膜在一周内恢复较快,淋巴结的细菌移位率低于随机饮用抗生素组。结论饮用低浓度的抗生素是一种更优化的诱导菌群失调的方法。

人肺癌转移动物模型建立及其生物学特性的研究

人肺癌转移动物模型建立及其生物学特性的研究Ａｓｔｕｄｙｏｎｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｍｅｔａｓｔａｔｉｃｍｏｄｅｌｓｆｏｒｈｕｍａｎｌｕｎｇｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎｍｉｃｅａｎｄｔｈｅｉｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ魏泓史景...

建立我国规模化无菌动物高效研究应用体系

无菌动物与宏基因组技术是驱动人体健康微生物组研究的两大动力。没有无菌动物菌群(株)移植模型,就无法确立菌群与疾病的因果关系;没有无菌动物,就没有菌群与人体疾病研究飞速发展的今天与明天。无菌动物应用已形成有菌与无菌动物比较、菌群(株)移植、基因工程动物无菌化、无菌动物发育四种通用研究模式,研究模式的标准化将加大无菌动物研究应用规模及速度。本课题组经过十几年努力,已建成国内体量大、技术体系稳定、服务单位多、具有较大影响力的无菌动物平台,为国内生物医学、畜牧、食品微生物组科学问题解决提供了有力支撑。但是,目前我国无菌动物规模小、效率低、供用平台与应用条件分离,无菌动物基础理论与技术体系尚待发展,难以满足日益增长的应用需求。亟待建立规模化无菌动物高效研究应用体系,以适应我国微生物组研究高速发展。

小型猪心血管系统疾病动物模型研究现状及趋势

小型猪在心血管系统动物模型制备方面具有诸多优势，一直是人类心血管疾病模型制备研究的最适动物。国内外已经具有丰富的小型猪心血管疾病模型资源，具备较系统的基本实验技术体系，积累了大量的资料和数据。本文就小型猪心血管系统疾病动物模型研究现状及发展趋势进行总结。

实验动物遗传工程——功能基因组时代的研究平台

本文就实验动物遗传工程在研究基因功能及其表达调控、阐明疾病发生机理、寻找药物治疗靶点等方面的技术突破做了综述.

胃转流手术对模型猪肠道菌群及部分血清学指标的影响

为研究模型猪在实行胃转流手术后肠道菌群以及血清学指标的变化情况。选取6头成年雌性巴马香猪,接受胃转流手术后,检测血清学指标变化,并利用变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)评价该术式对肠道菌群的影响。结果:正常组菌群平均丰富度(Richness,S)为6.44±0.33,术后一月、二月、三月组为5.30±1.50、7.22±0.60、7.47±0.76;正常组Shannon指数(H')为3.29±0.05,术后组分别为3.12±0.34、3.42±0.11、3.40±0.21;正常组术后一月组跟术后二月组、三月组总相似度为63%,组间差异不明显;血清学统计分析中,正常组和术后七月组在肌酐和总胆红素两项有显著差异。结果表明:胃转流手术会对模型猪肠道微生态造成一定影响,但并不显著;另外该手术可能会损伤肝脏,并降低肾小球通过率。

基于无菌动物研究肠道微生物与类风湿关节炎发病相关性

肠道微生物与宿主的生长发育、免疫、代谢等方面均密切相关,但肠道菌群与宿主之间复杂的相互作用在很大程度上仍然是未知的。目前无菌动物已成为探索肠道微生物与宿主相互作用的重要工具,多项研究使用无菌动物模型探讨肠道菌群在宿主代谢、机体免疫系统的发育和成熟等方面的作用,其中包括肠道菌群在自身免疫性疾病发病及预后中的作用。研究发现,肠道菌群作为环境因素之一可能参与类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)发病,然而其因果关系未明。本文将对使用无菌动物探讨肠道微生物参与类风湿关节炎发病的相关性研究作一综述,为进一步深入研究肠道菌群在RA发病中的作用及机制研究提供理论依据。

新生儿坏死性小肠结肠炎动物模型研究进展

新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)是新生儿时期严重的胃肠道疾病,病死率高,多见于早产儿,极低出生体重儿,但确切病因及发病机制尚未阐明。积极探寻其发病机制,需建立可靠的动物模型以助于对该病的病因、发病机制及防治等各方面进行深入研究,以改善NEC患儿预后有重要意义。

无菌动物在饮食干涉肠道菌群研究中的应用

膳食干涉对肠道菌群与健康的影响已成为医学健康领域的研究热点,从发展来看,肠道菌群有可能会成为研究饮食方式、保健食品、中药制剂等对人体健康影响的重要靶标。然而,肠道菌群由于其复杂性,研究它和饮食干涉的关系对动物模型有高标准的要求,无菌动物体内外不携带任何活的微生物和寄生虫,在生物医学及人体疾病和健康等方面均有一定的应用和研究,是当前肠道菌群研究中应用最多的基础动物模型。采用无菌动物构建人源菌群动物是研究饮食、菌群与健康关系的常用方式。本文主要综述无菌动物构建人源菌群动物的研究应用及饮食干涉对肠道菌群的影响。

小型猪CYP3A88基因克隆与其他动物的序列比较

目的克隆我国资源小型猪品系巴马香猪肝脏中的CYP3A88基因,并进行生物信息学分析。方法应用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术对其全长进行扩增,测序,利用Internet和GenBank数据库对其序列进行生物信息学分析。结果首次克隆并鉴定了我国资源小型猪品系巴马香猪肝脏中CYP3A88(GenBank登录号:EF625347)的编码区,获得大小为1965bp的全长cDNA,编码区长为1512bp,编码503个氨基酸;比较核苷酸序列,与小型猪CYP3A39相似性高达94%,而与人等其它动物的CYP3A相似性则在86%以下;推导和分析氨基酸序列表明,与小型猪CYP3A其它成员(CYP3A39、CYP3A29、CYP3A22)进行对比,其相似性分别为92%,89%,80%,而将小型猪与人的CYP3A分别比对,小型猪CYP3A88与人CYP3A4相似性最高,为77%;对其二级结构预测,它可能含12个α螺旋,4个β折叠;经NCBI上的CDD程序分析可知,其39～491氨基酸区域为P4503A亚家族保守结构区域;经聚类分析,小型猪和狗的CYP3A与人有较近的进化关系;通过同源建模法对其在线建模,人CYP3A4晶体结构作为其模建模型,得到了其经典的三维结构。结论在猪CYP3A家族四个基因中,CYP3A88在序列和高级结构上均与人CYP3A4的最为相似。

巴马香猪无细胞真皮与人无细胞真皮动物移植实验效果的比较

目的:比较辐照巴马香猪无细胞真皮与辐照人无细胞真皮移植动物实验效果.方法:以机械去表皮法制备无细胞真皮与人无细胞真皮辐照(剂量30 KGy)处理后移植于W istar大鼠全厚皮肤缺损创面进行比较.结果:辐照处理的巴马香猪无细胞真皮与人无细胞真皮在大鼠创面愈合过程相似,愈合后创面收缩率差异不显著.结论:辐照处理的巴马香猪无细胞真皮与辐照处理的人无细胞真皮移植于W istar大鼠全厚皮肤缺损创面恢复效果无显著差异,可作为人无细胞真皮的替代品进一步用于烧伤治疗的研究.

山羊精子结合外源DNA能力的年龄及品种依赖性

本文应用正交设计L16(44),优化精子和外源DNA处理条件;用建立的方法转染1-4岁川东白山羊和波南F1公羊、2岁波尔山羊和南江黄羊公羊共149只,用原位杂交法检测精子结合外源DNA的效率,比较不同品种、年龄的山羊(Capra hircus)精子结合外源DNA的能力。结果显示川东白山羊1岁时的阳性精子率为39.34%±13.76%,4岁时降为23.40%±19.37%,与1岁和2岁时相比,差异显著;南江黄羊的阳性精子率最高,波尔山羊最低;并筛选到一种山羊精子和外源DNA处理方法。表明实验山羊的精子结合外源DNA的能力有随着年龄的增长而减少的趋势,并表现出品种间差异。

睾丸内注射pEGFP-N_1体内转染精子并在山羊早期胚胎成功表达

目的探讨睾丸内注射法pEGFP-N1在精细胞的整合和在早期胚胎中表达。方法选择4头本地山羊,双侧睾丸注射不同剂量质粒DNApEGFP-N1,注射后PCR和Southern杂交检测pEGFP-N1在精子中的整合。结果pEGFP-N1整合到精子基因组中,转染效率最高发生在注射后第40天,转染阳性率最高为81%;绿色荧光蛋白在精子及其体外受精的部分胚胎中表达,胚胎阳性率最高的达66.7%。结论通过睾丸内注射pEGFP-N1能整合进入精子基因组,并能通过体外受精在山羊早期胚胎中表达;睾丸内注射法可能是一种可行、简单并利于推广的制备转基因山羊的方法。

产生辅酶Q_(10)的光合细菌菌株的分离及鉴定

对水塘污泥中富集分离的13株光合细菌产生的CoQ10进行定性定量分析,筛出CoQ10含量较高的菌株2c并对其进行系统鉴定。菌株2c为革兰氏阴性菌,细胞杆状,菌体大小0.6μm^0.9μm×1.2μm^2.0μm,单极生鞭毛,片层状光合内膜,位于细胞质膜下并与之平行。光照厌氧或黑暗好氧条件下均可生长,光照下菌体产生红色素,菌体含有细菌叶绿素a和类胡萝卜素。最适生长温度30~35℃,pH7.0~8.0。多种有机化合物均可作为光合作用的电子供体和碳源,蛋白胨和硫酸铵是其生长的较好氮源,酵母膏对其生长有明显刺激作用。16S rDNA序列系统发育分析表明,菌株2c在系统进化树上与GenBank中序列号为AY751758、DQ001155、DQ001158的沼泽红假单胞菌聚为一族。菌株2c至少能稳定传代15次。初步确定菌株2c为沼泽红假单胞菌。

乳杆菌黏附抑制致病性大肠杆菌对肠上皮样细胞侵袭的初步研究

目的探讨乳杆菌对肠上皮样细胞HT29黏附的生物学保护作用。方法将乳杆菌和致病性大肠杆菌与肠上皮样细胞HT29共孵育3h后,采用活菌计数的方法来观察致病性大肠杆菌黏附肠上皮样细胞的数量;并通过检测细胞培养液中乳酸脱氢酶的含量,以观察细胞膜通透性的变化;采用MTT法检测细胞的活性。结果路氏乳杆菌JCM1081可以抑制致病性大肠杆菌对肠上皮样细胞HT29的黏附(28%)和侵袭(27.7%),并可减弱致病性大肠杆菌对细胞的损伤。乳杆菌JCM1081单独与肠上皮样细胞HT29黏附作用3h后,细胞结构正常,乳酸脱氢酶的水平没发生明显的变化,细胞活力无明显下降。结论路氏乳杆菌JCM1081通过对肠上皮细胞的黏附占位,竞争性抑制致病性大肠杆菌对肠上皮细胞的黏附和侵袭,保护细胞膜的完整性和细胞活性。

高脂饮食对菌群人源化小鼠肠道菌群结构的影响

采用高脂饮食建立肥胖菌群人源化(HFA)小鼠模型,研究高脂饮食对HFA小鼠肠道微生态结构的影响,探讨肥胖、饮食与肠道菌群之间的关系。将20只无菌小鼠接种健康人志愿者的粪便悬液构建HFA小鼠模型后分为普通组和高脂组,分别用基础饲料和高脂饲料饲喂8周,测定小鼠体质量、血糖血脂以及用PCR-DGGE方法检测肠道菌群的变化。结果显示:与普通组HFA小鼠相比,高脂组HFA小鼠体质量、肝质量、脂肪组织质量及血清中总甘油三酯水平显著增加(P<0.01),血糖水平也显著增加(P<0.05)。同时高脂组HFA小鼠肠道微生物多样性指数显著升高(P<0.05),正常优势菌群丰度降低,零时刻时的非优势菌群丰度增加,测序结果表明高脂饮食可能会诱导HFA小鼠肠道内Staphylococcus lentus、Staphylococcus vitulinus和Shigella flexneri等有害菌生长繁殖。本实验采用高脂饮食成功建立起肥胖HFA小鼠模型并证实了高脂饮食明显改变HFA小鼠肠道菌群结构。肠道菌群组成和细菌丰度发生很大变化导致肠道微生态失调,这提示人源性肠道菌群可能参与饮食结构失衡引起的肥胖的发展。

5种医用益生菌产品的微生物数量和种属分析

目的:比较市售5种医用益生菌产品的活菌数量、种属与产品标签是否一致。方法:采用选择平板菌落计数法检测产品的活菌数量,利用16S rDNA序列分析、鉴定分离菌株的种属。结果:5种产品共25批的活菌数含量只有1批低于标签标注的数量。分离的10株菌中有3株种属与标签标注的不一致。结论:考察的5种产品中,菌株种属与标签标注存在差异,但产品的活菌数量与标签标注基本一致。