糖皮质激素受体及核因子-κB在创伤休克大鼠肝脏中的作用

目的探讨糖皮质激素受体（GR）、核因子-κB（NF—κB）在创伤失血性休克后肝组织中的变化、相互关系，及其对肝损伤的作用机制。方法雄性健康Wistar大鼠96只，采用双侧股骨骨折伴失血性休克创伤模型，随机分成正常对照组6只，创伤休克组30只，GR阻断伴创伤休克组30只，NF—κB抑制伴创伤休克组30只。动态观察伤后0．5、246、8h大鼠肝组织GR、NF—κB，肝脏病理，肝功能，血清TNF—α、IL-6等变化。GR采用免疫印迹法测定蛋白含量，NF—κB采用EMSA法测定结合活性，并进行计算机图像分析。结果肝组织GR的蛋白含量在创伤失血性休克后2h即开始下降，4h明显低于正常对照（P〈0．01），6h降至最低，8h仍显著低于正常（P〈0．01）；NF—κB的活性伤后迅速升高，伤后6h达到高峰（P〈0．01）。光镜下伤后4—8h肝窦内少许淤血，有散在炎性细胞浸润；血清TNF—α、IL-6、ALT、TB伤后4h开始增高。GR阻断后再致伤，NF—κB在伤后各个时相点的表达均较未阻断有明显增高，光镜下伤后2h肝窦内即可见较多炎性细胞浸润，血清TNF—α、IL-6、ALT、TB在伤后2h即有明显升高（P〈0．01）。抑制NF—KB再致伤后，GR在伤后肝组织中的表达增强，TNF—α、IL-6伤后各个时相点均迅速回落，光镜下伤后4～8h肝细胞变性明显好转，肝窦内见淤血减轻，仅见少许淋巴细胞及中性粒细胞浸润；伤后4h，血清ALT、TB即明显下降。结论GR、NF—κB参与了严重创伤失血性休克后肝损伤的发生，阻断GR使NF—κB的表达增强，肝损害程度加重；抑制NFκKB使GR表达增加，肝损害程度减轻。提示GR及NF—κB在严重创伤休克后肝组织细胞损伤过程中关系密切并起着重要作用。

转化生长因子-β1促血管内皮细胞向间质细胞转化的作用研究

目的观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)促进内皮细胞向间质细胞转化[endothelial-mesenchymal(myofibroblast)transition,EnMT]的效应,探讨肌成纤维细胞的来源以及纤维化疾病发生的新机制。方法分离培养人脐静脉内皮细胞,采用不同浓度的TGF-β1(0、10、25、和50ng/ml)刺激细胞72h后,倒置显微镜观察诱导后细胞形态变化,免疫荧光方法检测第Ⅷ因子相关抗原和α-SMA表达变化,RT-PCR检测VE-钙粘蛋白(VE-Cadherin),α-SMA和Ⅰ型胶原基因表达变化。结果正常对照组内皮细胞呈铺路石样生长,TGF-β1刺激组内皮细胞由铺路石样形态向梭形转化。免疫荧光检测可见对照组含有少量FⅧ,α-SMA双阳性细胞。TGF-β1组FⅧ,α-SMA双阳性细胞明显增多,并且具有明显的浓度依赖性(P<0.05,P<0.01)。RT-PCR检测结果显示,TGF-β1刺激导致内皮细胞特异性标记物VE-钙粘蛋白(VE-cadherin)基因的表达显著减少(P<0.05),随着TGF-β1刺激浓度的增加,VE-钙粘蛋白基因表达呈明显的下降趋势;相反,内皮细胞间质性标记物α-SMA和I型胶原基因的表达显著增加(P<0.05,P<0.01),并且具有明显的浓度依赖性。结论 TGF-β1刺激内皮细胞后,细胞表型和功能均表现为间质细胞特性,提示TGF-β1具有促进内皮细胞向间质细胞转化(EnMT)的作用,并且其促EnMT效应具有明显的浓度依赖性。

小鼠急性肺损伤后糖皮质激素受体的活性改变与热休克蛋白的关系

目的研究急性肺损伤(ALI)后机体内糖皮质激素受体(GR)的配体结合活性显著下降与其分子伴侣热休克蛋白(Hsps)改变的关系。方法以小鼠油酸急性肺损伤为模型,用Western blotting和受体的放射配体结合试验动态观察伤后GR、Hsp90、Hsp70和GR的结合容量和亲和力变化。结果伤后小鼠肺组织水肿、肺体指数和肺含水量显著升高;GR在伤后1h升高,然后显著下降,在12h达最低点;Hsp90和Hsp70在伤后的表达逐渐升高,在12h达最高点。配体结合试验显示在伤后GRBmax逐渐下降,Kd值升高,与Hsp90/GR的变化趋势一致。结论急性肺损伤后的GR配体结合活性的改变可能与Hsp90的变化有关。

战伤分级救治体系对灾害医学救援的启示

野战外科学与灾害医学存在许多共同点：如组织管理、分级救治、独特的医学理论、救治对象为大批伤（病）员、救治条件甚为困难等。目前许多国家的军队医院相继设立了长期战备医疗机构-特种医疗部队，以便发生灾情时能快速进入灾区。这同时也表明了战时环境下伤员救治体系与平时条件下灾害医学救援体系的兼容性与互通性。现着重从战伤分级救治体系的起源、发展趋势以及对灾害医学救援的启示三个方面进行阐述。

休克血管低反应性钙失敏机制及防治措施研究

严重创伤、失血、休克,特别是后期的脓毒症和脓毒性休克可出现明显的血管低反应性,这种血管低反应性是引起难治性休克,导致MODS,制约严重战（创）伤休克等临床重症治疗的关键问题.近年来在国家“973”课题、国家杰出青年科学基金和国家自然科学基金重点项目等资助下,研究发现了休克后血管低反应性发生的新机制-钙失敏机制,并提出了针对性的防治药物和措施：（1）针对以往血管低反应性发生机制存在的问题,同时基于肌肉收缩效率取决于力/钙比率的基本概念,提出并证明了休克后血管低反应性发生的钙失敏机制;（2）进一步研究发现RhoA-Rho激酶和PKC通路是休克后血管平滑肌细胞钙敏感性调节的主要通路及潜在的治疗靶点.（3）针对Rho激酶和PKC两个潜在靶点发现药物激活或诱导Rho激酶和PKC表达可显著改善休克的血管反应性和钙敏感性,发挥抗休克作用.为休克等临床重症的治疗提出了新的方法和思路.

肺病理取材定量比较研究及其诊断学意义

目的通过定性和定量的方法比较单纯气管内固定、单纯肺循环固定和气管肺循环联合固定对肺泡结构和细胞抗原的保存效果。方法 15只健康SD大鼠随机均分为单纯气管内固定组、单纯肺循环固定组和气管肺循环联合固定组。分别按3种方法固定,石蜡包埋,行HE和免疫荧光染色,采用定性观察和体视学定量分析不同方法的固定效果。结果定性观察发现,单纯肺循环固定和气管肺循环联合固定对胞质和胞核抗原的保存效果优于单纯气管内固定。定量分析发现,气管肺循环联合固定组的肺泡线性截距大于单纯气管内固定组和单纯肺循环固定组(P<0.05);气管肺循环联合固定组的肺实质体积密度和肺间隔厚度最小,单纯气管内固定组次之,单纯肺循环固定组最大(P<0.05)。结论气管肺循环联合固定可以更好地保存肺泡结构和细胞抗原,适合基于形态定量分析的病理基础和临床诊断研究。

基于Gabor特征的MRI椎间盘定位与退行性变分级算法研究

提出一种基于Gabor特征的非监督、全自动的椎间盘定位与退行性变分级算法。首先通过对一系列脊柱Gabor特征图像的处理,得到脊柱和椎间盘的边缘信息,并基于脊柱边缘信息提取脊柱区域;然后根据以上信息及椎间盘位置的先验信息,在脊柱区域定位椎间盘;最后根据定位结果和Gabor系数图,结合椭圆拟合的方法,得到髓核和纤维环灰度信息,并根据灰度和几何信息实现分级。通过37个病人MRI数据,验证算法的准确率和可行性,其中定位方法的准确率达96.6%,在与已有方法准确率相当的情况下降低了算法复杂度,并将定位精度提高至1.46 mm,而分级算法可以实现前5级的退行性变评定。

冲击波技术在医学领域的应用

冲击波研究长期以来用于解决超音速飞行、宇宙飞船重返大气层等相关的高速气体动力学问题.近30年来,冲击波技术成功地应用于医学领域.本文从阐述体外冲击波碎石机的工作原理开始,对体外冲击波碎除肾结石和尿道结石的作用机制(如应力作用、空化效应)进行评述;在此基础上,重点介绍了冲击波治疗骨不连、假关节、肩周炎、网球肘及其他骨科疾病的临床疗效.通过认识气泡崩裂产生的微型水喷射的特点,综述了水中微爆炸、激光聚焦产生的微型水喷射和微型冲击波进行血运重建的理论和方法;通过认识基于冲击波的DNA/药物的定向转运技术,综述了液态DNA转运、粉末状药物转运、分子转移入胞的实验装置和实验结果.此外,还介绍了冲击波在兽医学中用于治疗马、犬等动物的跟腱、韧带和骨的损伤的疗效.最后,展望了今后值得研究的几个领域:冲击波的新波源、冲击波治疗的新设备、冲击波技术在脑血栓血运重建和癌症治疗中的应用.

以髓磷脂相关抑制因子及其受体为靶点的脊髓损伤免疫治疗策略研究

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)往往导致患者下肢活动功能受限,甚至瘫痪,降低患者生活质量,且治愈率低。髓磷脂相关抑制因子(myelin associated inhibitors,MAIs)是抑制受损中枢神经系统(central nervous system,CNS)再生修复的一个重要因素。对MAIs及其信号通路的干扰能有效逆转CNS神经再生抑制信号,促进脊髓损伤后轴突的再生。MAIs抑制轴突再生信号通路的发现及其深入研究为损伤脊髓的免疫治疗提供了充分的理论依据和研究靶点。将对抑制神经再生信号通路中MAIs及其受体的生物学功能新进展以及以此为治疗靶点设计的脊髓损伤免疫治疗策略作一综述。

人p75NTR荧光真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

构建了人p75神经营养素受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)cDNA序列的绿色荧光真核表达载体,并鉴定其在人胚肾293(human embryo kidney 293,HEK293)细胞中的表达.采用PCR方法从含人p75NTR的pDC316-HP75质粒中扩增目的片段,经EcoRI和SalI双酶切,定向克隆于pEGFP-N1质粒中,构建绿色荧光真核表达载体pEGFP-N1-HP75,经酶切及测序鉴定后,通过脂质体转染HEK293细胞,激光共聚焦及Western blot法鉴定人p75NTR的表达.结果表明,酶切鉴定和序列分析证实重组质粒含有人p75NTR编码序列,转染实验表明,重组质粒能够在HEK293细胞中表达出具有活性的人p75NTR片段.

基于动态孔径控制的剪切波传播速度检测方法

目的超声剪切波弹性成像临床应用前景广阔,其中剪切波传播速度检测是其技术的核心步骤。针对在小焦距下传统基于静态孔径聚焦超声发射方式的剪切波传播速度检测准确度低的问题,本文提出一种基于动态孔径控制的剪切波传播速度检测方法。方法对不同的焦距以控制活跃阵元数目的方式动态控制孔径大小;采用峰值时间法结合最小二乘法计算剪切波传播速度;利用超声仿真平台FieldⅡ,采用控制变量法对多个小焦距下的声辐射力场、标记点"位移-时间"曲线及剪切波传播速度进行了仿真研究。结果本方法可有效抑制栅瓣的出现,能获取呈现出明显主峰的走势良好的标记点"位移-时间"曲线。剪切波传播速度检测结果与理论值的相对误差更低,例如在焦距为7 mm时,与理论值相对误差降低了16.585%;在焦距为9 mm时,降低了15.205%。结论基于动态孔径控制的剪切波传播速度检测方法能合理控制小焦距下的声辐射力,提升剪切波传播速度检测准确度,为超声剪切波弹性成像技术的进一步发展提供理论依据。

野战外科培训课程需求分析与改进策略

野战外科培训是战创伤救治医务人员任职教育的重要组成部分.本文通过对第三军医大学大坪医院野战外科研究所2005年～2016年野战外科培训班学员的调查结果分析,发现现有培训存在多样化和实用性不足、普及推广效果较差、评估体系过于单一等问题,从而提出在理念、模式、评估等方面改进野战外科任职教育体系的策略.

核酸疫苗的安全性及其优化策略研究

核酸疫苗是20世纪90年代兴起的一种新型疫苗,已在免疫学及预防医学等方面显示出巨大潜能,迄今已有10余种被FDA批准进入非临床和临床试验。然而,目前仍存在许多尚未解决的问题,如生产工艺、质量标准、制剂和效应,特别是安全性方面的问题,它直接关系到核酸疫苗的应用。因此,解决安全问题是目前核酸疫苗研究的热点和焦点。核酸疫苗的安全隐患主要包括基因整合、免疫学疾病、种属、个体差异性及生产带来的一些安全隐患。为此,对其进行优化设计及生产主要应从表达载体、免疫佐剂、免疫途径及免疫程序等方面进行优化。主要就核酸疫苗的安全性方面问题及有关优化策略作一综述,希望对核酸疫苗的基础研究与临床应用具有一定的指导意义。

整合素链接激酶在蛋白激酶Cα、ε调节失血性休克大鼠血管钙敏感性中的作用

目的观察失血性休克后，整合素链接激酶（ILK）在蛋白激酶C（PKC）α、ε调节失血性休克大鼠血管钙敏感性中的作用。方法观察抑制ILK对PKCα、ε激动剂的增高休克2h的Wistar大鼠肠系膜上动脉（SMA）血管环钙敏感性的影响，以及血管平滑肌细胞（VSMC）中PKCα、ε激动剂对ILK蛋白表达、活性的影响。结果PKCα、ε激动剂可显著增高失血性休克后SMA钙敏感性，使Ca2＋的Emax由正常对照组的47．2％分别增至66．5％和66．3％（P〈0．01）；抑制ILK可显著降低PKCα和ε激动剂的作用，Ca2＋的Emax分别降低至正常对照组的50．1％和56．2％（P〈0．01）。缺氧VSMC中，ILK蛋白表达和活性降低，PKCα、ε激动剂可增高缺氧VSMC的ILK蛋白表达和活性。结论PKCα、ε通过改变ILK的蛋白表达和活性，调节失血性休克血管钙敏感性。

咳嗽的评定方法及其临床应用

咳嗽是呼吸系统疾病的常见症状，对咳嗽的强度及频率进行评估可以为慢性咳嗽患者的评估提供有价值的临床信息。在长期的临床实践和研究中，由于缺乏有效的仪器，咳嗽评估受到限制。近年来，随着咳嗽监护系统及咳嗽相关的生命质量调查表的发展，咳嗽评估有了很大的发展。

吴茱萸碱对人结肠癌细胞自吞噬的影响

目的 观察吴茱萸碱对结肠癌Lovo细胞自噬的影响,探讨吴茱萸碱对Lovo细胞的生长抑制作用及其机制.方法 联合应用MTT法和形态学变化观察吴茱萸碱对Lovo细胞的生长抑制作用,借助激光共聚焦显微镜观察自噬现象,并用丹（磺）酰戊二胺染色测定对自噬进行定量分析,Western blot方法检测微管相关蛋白轻链3的表达,确认自噬的发生.同时检测吴茱萸碱和3-甲基腺嘌呤对Lovo细胞活力及凋亡的影响.结果 吴茱萸碱呈浓度依赖性抑制结肠癌Lovo细胞的生长活力（P＜0.05）,尤其在浓度为60 μmol/L时最为明显（60%）,且在光镜下形态表现为细胞裂解和细胞间隙增宽.吴茱萸碱可诱导结肠癌Lovo细胞发生自噬（P＜0.05）,阻断自噬后,吴茱萸碱抑制结肠癌Lovo细胞生长活力的能力进一步增强（P＜0.01）.结论 吴茱萸碱可诱导结肠癌Lovo细胞发生自噬,但自噬却拮抗吴茱萸碱的抗肿瘤活性.联合应用吴茱萸碱和自噬凋节剂可增强其抗肿瘤作用,逆转其对化疗药物的耐药性.

车-人碰撞事故中行人胫骨撞击响应的二维数值分析

目的基于两相多孔弹性胫骨模型，建立一种车-人碰撞事故中行人胫骨撞击响应的二维数值分析方法。方法选用健康成年男性胫骨行CT分层扫描，结合数值插值方法获得胫骨的结构参数；在两相饱和多孔弹性理论的框架内，建立胫骨动力学控制方程组；采用自行开发的流-固耦合两相多孔介质有限元数值分析程序，数值模拟小汽车车头从侧向撞击行人下肢的动力学过程，并计算撞击载荷作用下0-200ms内行人胫骨的动力学响应。结果胫骨的弯曲变形主要集中在撞击载荷作用的区域；胫骨骨干上节点107处的侧向位移响应，约在75ms时刻出现峰值位移（-6mm），对撞击载荷有明显的时间滞后；胫骨骨干上单元E77中心处的轴向应力响应，约在30ms时刻出现峰值应力（140MPa），对撞击载荷也有明显的时间滞后。结论本研究所建立的对车-人碰撞事故中行人胫骨撞击响应的二维数值分析方法，能够近似地模拟胫骨撞击区的弯曲变形、侧向位移响应和轴向应力响应以及胫骨中骨髓流体组分对骨架固体组分动力学特性的影响。下一步研究将在现有初步结果的基础上提高胫骨动力学模型的生物仿真性。