多巴胺D4受体对血管紧张素Ⅱ介导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察多巴胺D4受体对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)介导的血管平滑肌细胞(vascular smoothmuscle cells,VSMCs)增殖的影响。方法以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞)、原代的Wistar-Kyoto(WKY VSMCs)和自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉血管平滑细胞(VSMCs)为研究对象,观察刺激D4受体对AngⅡ促增殖作用的影响以及D4受体特异性阻断剂L745870对该作用的阻断效应。细胞增殖采用MTT和细胞计数方法测定。结果 AngⅡ(10-7mol/L)可促进A10细胞增殖,最大增殖幅度为64%。D4受体激动剂PD168077本身对A10细胞无增殖影响,但D4受体特异激动剂PD168077可抑制AngⅡ(10-7mol/L)介导的血管平滑肌细胞的增殖作用,最大抑制幅度为40%;应用D4受体阻断剂L745870后该抑制作用丧失;D4受体对AngⅡ介导血管增殖的作用在SHR和WKY大鼠的VSMCs之间并无区别。结论 D4受体对AngⅡ介导的血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用,该作用可能在一定程度上抑制了高血压病所伴发的血管平滑肌细胞增殖。

细颗粒物(PM2.5)对大鼠心肌梗死和心肌组织中MG53蛋白表达的影响

目的探讨细颗粒物（fine particulate matter,PM2.5）对SD大鼠心肌梗死（myocardial infraction,MI）的影响及心肌组织中Mitsugumin 53（MG53）蛋白表达的变化。方法将40只体质量210~250 g的雄性SD大鼠分为假手术（Sham）组、MI组、Sham＋PM2.5组、MI＋PM2.5组（n=10）。通过结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型。Sham＋PM2.5组及MI＋PM2.5组经气道滴灌PM2.5混悬液（10 mg/m L,40μL/次,3次/周,共4周）,Sham组及MI组同法滴灌等量PBS缓冲液作为对照。4周后观察各组大鼠肺组织病理变化、心肌梗死面积、心功能情况、大鼠生存率及心肌组织中MG53蛋白表达的变化。结果 HE染色显示气道滴灌PM2.5的大鼠肺组织可见细颗粒物沉积,表明滴灌成功。MI＋PM2.5组与MI组大鼠相比,4周后心肌梗死面积明显增大[（17.78±2.13）%vs（11.49±2.23）%,P〈0.05],射血分数（EF%）显著降低[（37.14±5.14）%vs（47.13±4.09）%,P〈0.05],生存率下降,心肌梗死区MG53蛋白的表达也明显降低。结论 PM2.5会加重大鼠心肌梗死的程度,其原因可能与PM2.5抑制心肌受损的膜修复因子MG53蛋白的表达有关。

胃泌素通过STAT3途径对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤发挥保护作用

目的探讨胃泌素（gastrin,GS）对SD大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用以及STAT3在其中所起的作用。方法选取SPF级雄性健康SD大鼠48只（体质量250~300 g）,采用随机数字表法将其分为4组（n=12,其中随机6只检测左心室功能、TTC染色及心肌酶谱,其余6只进行TUNEL及Western blot检测）：空白对照组（B组）、胃泌素预处理对照组（GS组）、缺血再灌注组（IR组）、胃泌素预处理缺血再灌注组（GIR组）。应用Langendorff装置进行离体心脏灌注。B组持续灌注Krebs-Henseleit（K-H）缓冲液130 min,GS组在持续灌注过程中的10~30 min时间段给予了胃泌素（10-9mol/L）预处理;IR组及GIR组在阻断全心灌注前灌注30 min,阻断灌注40 min后再灌注60 min,其中GIR组在阻断前20 min给予胃泌素（10-9mol）预处理。每组中随机6只于阻断灌注前即刻（T0）,再灌注15（T1）、30 min（T2）、45（T3）、60 min（T4）时记录左心室舒张末压（LVEDP）、左室发展压（LVDP）、左心室最大上升速率（＋dp/dtmax）;于T0、T4时收集冠状窦流出液,测定乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）浓度;灌注结束后留取心脏标本进行氯化三苯基四氮唑法（TTC）染色观察心肌梗死面积;每组其余6只进行TUNEL染色法观察心肌细胞凋亡情况以及Western blot检测STAT3及磷酸化STAT3（p-STAT3）蛋白表达水平。结果 B组与GS组各项指标无统计学差异（P〉0.05）;与前两组相比,IR组与GIR组从T1~T4时间点LVEDP增加,LVDP及＋dp/dtmax降低,心肌梗死面积增大,LDH与CK-MB释放增加,凋亡细胞增加,p-STAT3蛋白表达增加,差异均有统计学意义（P〈0.05）;与IR组比较,GIR组从T1时间点开始左心室功能各项指标均有显著恢复（P〈0.05）,心肌梗死面积减少,LDH和CK-MB释放降低,心肌凋亡细胞显著减少[（19.2±1.0）%vs（14.2±1.0）%,P〈0.05],且p-STAT3蛋白表达显著增加[（1.14±0.10）vs（1.63±0.10）,P〈0.05]。结论胃泌素通过STAT3途径在SD大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中发挥保护作用。

MG53在下肢远程缺血预适应保护肺缺血再灌注损伤中的作用

目的研究MG53在下肢远程缺血预适应保护肺组织缺血再灌注损伤中的作用。方法肺缺血再灌注损伤模型通过开胸阻断左侧肺门进行缺血1 h后再灌注1 h建立。下肢远程缺血预适应模型是在进行肺缺血再灌注损伤前0.5 h阻断左侧股动脉血流5 min,然后再灌注5 min,重复3个循环来实现的。将60只10~12周龄SD大鼠[雌雄各半,体质量（235±15）g]采用完全随机分组方法分为3组（n=20）：假手术组（sham组）、肺缺血再灌注损伤组（IR组）、下肢远程缺血预适应＋肺缺血再灌注损伤组（RIP组）。将24只8~12周龄MG53敲除小鼠[雌雄各半,体质量（27.5±2.5）g]采用完全随机分组方法分为2组（n=12）,即肺缺血再灌注损伤组（IR组）、下肢远程缺血预适应＋肺缺血再灌注损伤组（RIP组）。在缺血及再灌注时间结束后,观察动脉氧分压、计算肺组织湿干比（W/D）,通过Western blot检测3组之间肺组织上MG53蛋白表达量的改变,并记录其生存情况。结果对SD大鼠,在进行肺缺血再灌注损伤后其血氧分压降低到（46.60±5.94）mm Hg,而下肢远程缺血预适应能显著改善肺组织的缺血再灌注损伤,使其血氧分压恢复至（73.40±5.94）mm Hg（P〈0.05）,同时对反映肺组织水肿程度的W/D值、生存情况都有显著的改善,通过Western blot方法检测到RIP组肺组织上MG53蛋白的表达量（2.03±0.53）较IR组（0.79±0.17）显著增加（P〈0.05）。在MG53敲除小鼠上,下肢远程缺血预适应组的血氧分压（48.20±12.15）mm Hg较肺缺血再灌注损伤组（45.60±10.53）mm Hg并未得到改善,同时也不能改善肺组织的水肿情况。结论 MG53参与了下肢远程缺血预适应对肺组织缺血再灌注损伤的保护作用。

核转录因子YY1对缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨核转录因子阴阳1(yin yang 1,YY1)对体外缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法体外分离培养新生大鼠心肌细胞,利用无糖培养基及含95%N2+5%CO2混合气体的缺氧装置(Billups-rothenberg)诱导建立缺血缺氧心肌细胞凋亡模型,通过建立过表达YY1重组质粒并将其转染入心肌细胞内,观察YY1对缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡的影响。实验分为对照组、YY1组、缺血缺氧组、缺血缺氧+YY1组、缺血缺氧+LY294002组、缺血缺氧+YY1+LY294002等6组(n=4)。CCK-8法检测各组心肌细胞活力,TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡情况,f QT-PCR检测YY1 mRNA表达水平,Western blot法检测YY1、磷酸化丝氨酸苏氨酸激酶(p-Aktser473)及生存素(Survivin)蛋白表达水平。结果与对照组相比,缺血缺氧组在缺血缺氧刺激6 h后心肌细胞活力下降、凋亡率明显增高[(0.55±0.02)vs(1.14±0.02)、(38.25±1.65)%vs(1.38±0.15)%,P<0.01]。缺血缺氧前预转染YY1重组质粒后,与缺血缺氧组相比,缺血缺氧+YY1组心肌细胞活力上升、凋亡率降低、p-Aktser473和Survivin蛋白表达增加[(0.78±0.03)vs(0.55±0.02)、(14.50±1.56)%vs(38.25±1.65)%、p-Aktser473相对灰度值:(0.82±0.03)vs(0.28±0.03)、Survivin相对灰度值:(0.93±0.02)vs(0.36±0.02),P<0.01]。经PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂LY294002干预后,缺血缺氧+YY1+LY294002组与缺血缺氧+YY1组相比,心肌细胞活力下降、凋亡率增加、p-Aktser473和Survivin蛋白表达显著降低[(0.62±0.02)vs(0.78±0.03)、(27.75±1.12)%vs(14.50±1.56)%,p-Aktser473相对灰度值:(0.43±0.02)vs(0.82±0.03),Survivin相对灰度值:(0.27±0.02)vs(0.93±0.02),P<0.01]。结论核转录因子YY1可抑制缺血缺氧诱导的心肌细胞凋亡,且该作用与PI3K/Akt信号通路的激活相关。