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人pri-miR-155重组腺病毒的制备及其表达与活性鉴定
被引量:
1
1
作者
黄钢
王海燕
+2 位作者
王凯
蒋建新
白云
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期246-250,254,共6页
目的制备表达人成熟miR-155的重组腺病毒,检测该免疫调控分子在肺癌细胞A549的表达及其生物学活性。方法以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增约1000bp完整的pri-miR-155基因序列,克隆到T载体pTA2上,测序证实后,正向亚克隆入腺病毒穿梭载体p...
目的制备表达人成熟miR-155的重组腺病毒,检测该免疫调控分子在肺癌细胞A549的表达及其生物学活性。方法以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增约1000bp完整的pri-miR-155基因序列,克隆到T载体pTA2上,测序证实后,正向亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建pAdTrack-CMV/pri-miR-155重组质粒,与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒重组并扩增后转染293FT细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增,对其进行安全性、滴度的测定。用此腺病毒感染A549细胞,采用RT-PCR法检测成熟miR-155的表达,双报告基因法检测其干扰活性。结果构建的人pAdTrack-CMV/pri-miR-155重组质粒经酶切及测序鉴定正确;用此腺病毒感染A549细胞后,RT-PCR检测成熟miR-155表达较无关序列病毒感染对照组显著增强。腺病毒感染A549细胞后,通过转染后双报告基因检测相对萤光素酶活性较对照组降低,显示此腺病毒感染A549细胞后,可有效表达成熟miR-155,并具有生物学活性。结论成功制备人pri-miR-155重组腺病毒,并在感染肺腺癌细胞A549后高效表达成熟有活性miR-155。
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关键词
MIR-155
重组腺病毒
免疫调控
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职称材料
题名
人pri-miR-155重组腺病毒的制备及其表达与活性鉴定
被引量:
1
1
作者
黄钢
王海燕
王凯
蒋建新
白云
机构
第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室全军交通医学研究所全军交通伤重点实验室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室
第三军医大学
基础部
医学
遗传教研室
出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期246-250,254,共6页
基金
重庆市自然科学基金(CSTC,2007BB5077)
中国博士后科学基金(20070420769)资助项目
文摘
目的制备表达人成熟miR-155的重组腺病毒,检测该免疫调控分子在肺癌细胞A549的表达及其生物学活性。方法以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增约1000bp完整的pri-miR-155基因序列,克隆到T载体pTA2上,测序证实后,正向亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建pAdTrack-CMV/pri-miR-155重组质粒,与pAdEasy-1腺病毒骨架质粒重组并扩增后转染293FT细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增,对其进行安全性、滴度的测定。用此腺病毒感染A549细胞,采用RT-PCR法检测成熟miR-155的表达,双报告基因法检测其干扰活性。结果构建的人pAdTrack-CMV/pri-miR-155重组质粒经酶切及测序鉴定正确;用此腺病毒感染A549细胞后,RT-PCR检测成熟miR-155表达较无关序列病毒感染对照组显著增强。腺病毒感染A549细胞后,通过转染后双报告基因检测相对萤光素酶活性较对照组降低,显示此腺病毒感染A549细胞后,可有效表达成熟miR-155,并具有生物学活性。结论成功制备人pri-miR-155重组腺病毒,并在感染肺腺癌细胞A549后高效表达成熟有活性miR-155。
关键词
MIR-155
重组腺病毒
免疫调控
Keywords
miR-155
Recombinant adenovirus
Immunoregulation
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人pri-miR-155重组腺病毒的制备及其表达与活性鉴定
黄钢
王海燕
王凯
蒋建新
白云
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
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