阴道分泌物清洁度流式细胞学检验方法的建立与初步应用研究

目的探索阴道分泌物清洁度流式细胞学检验的可行性、分级标准和参考范围,为阴道微生态学调查及妇科疾病诊疗提供阴道分泌物清洁度的快速定量检验方法。方法随机收集门诊患者阴道分泌物标本82份,采用TM、FCM和革兰染色显微镜镜检法进行分析。结果以FCM上皮细胞百分率与白细胞百分率的比值(R)将白带清洁度分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ5级,其中上皮细胞百分率依次是(92.48±3.86)%、(72.95±9.06)%、(44.83±6.93)%(、25.35±4.08)%和(11.14±2.70)%;白细胞百分率依次是(13.65±8.67)%(、38.72±13.45)%、(50.18±7.45)%(、72.03±3.67)%和(85.63±4.14)%。经t检验证实,相临清洁度之间各数据差异有统计学意义(P<0.01)。结论FCM可以对阴道分泌物进行快速定量分析,且通过此方法建立的清洁度分析较现行传统方法,具有快速、定量、更客观、更准确的特点,重复性好,能更好地指导临床并为阴道微生态的研究提供了分析手段。

流式细胞术DNA分析用于良恶性胸腹水鉴别诊断的回顾性研究

目的探讨流式细胞术(FCM)胸腹水细胞DNA分析对恶性胸腹水的鉴别价值。方法用FCM分析正常健康人外周血有核细胞和102例胸腹水细胞DNA特性。以临床最终诊断为黄金标准,采用回顾性调查方式,筛选最佳FCM恶性胸腹水细胞诊断指标。结果正常健康组外周血有核细胞G1/0期、S期、G2/M期百分率和DI值参考范围依次是(90.35±7.16)%、(3.01±2.71)%、(5.27±3.38)%和1.00±0.07;良性胸腹水组细胞依次为(86.52±8.54)%、(7.24±4.82)%、(5.56±4.92)%和1.00±0.15;恶性胸腹水组细胞依次为(66.14±11.53)%、(15.85±5.30)%、(15.05±7.12)%和1.94±1.42。以G1/0期百分率≤76.06%、S期百分率≥11.14%、G2/M期百分率≥12.03%和DI值≥1.14作为联合诊断标准用于临床恶性胸腹水的鉴别诊断,FCM的敏感性为93.33%、特异性为89.47%、准确性为91.18%、漏诊率为6.67%、误诊率为10.53%、阳性预测值为89.36%和阴性预测值为94.44%。结论FCM细胞DNA分析用于恶性胸腹水的鉴别诊断具有灵敏度高、特异性强、准确、快速的特点,该联合诊断标准值得同行借鉴使用。

检验医学专业临床分子生物学实习带教

检验医学在疾病预防、诊断、疗效评价等方面都有着重要的地位,同时也是与临床医学密切相关的学科。分子生物学是检验医学中的前沿学科[1-2]。伴随着分子生物学理论和技术的发展成熟,分子生物学技术已逐渐应用于临床[3]。目前,国内越来越多的医院建立了临床基因扩增检验实验室,有力地推动了检验医学由细胞水平向分子水平、基因水平的发展[4]。

重庆地区不同育龄围产期女性B族溶血性链球菌的研究

目的探讨该地区不同育龄女性围产期B族溶血性链球菌（GBS）感染情况。方法采用聚合酶链式反应（PCR）和实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术,对该院2015年1月至2016年1月3 206例标本进行GBS核酸检测。结果 GBS阳性标本226例,阴性2 980例,感染率为7.05%,20-25岁组为6.88%,26-30岁组为6.51%,31-35岁组为7.50%,36-40岁组为11.46%,40岁以上组为11.11%,其中30-40岁组感染率最高。不同组别之间两两比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。该地区育龄女性与北京、南京、上海等地区比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论对该地区34-37周围产期女性开展GBS筛查,降低感染率,为围产期保健提供临床价值。

重庆地区汉族人群HLA-A、B、DRB1、DQB1等位基因多态性的研究

目的研究重庆地区人群HLA-A、B、DRB1和DQB1位点等位基因的多态性特点。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)技术对1 664名重庆籍健康人进行HLA-A、B、DRB1、DQB1等位基因的低分辨分型,并与国内其他地区汉族人群进行比较。结果本次研究共检出HLA-A、B、DRB1、DQB1位点等位基因62种,其中A位点14种,B位点27种,DRB1位点13种,DQB1位点8种。A位点中A*11(34.62%)、A*02(28.81%)、A*24(14.93%)、A*30(5.53%)为重庆人群的优势基因。B位点中B*46(14.92%)>B*40(12.96%)>B*13(12.39%)>B*51(7.26%)。DRB1位点中,频率最高的为DRB1*09(15.65%),其次为DRB1*12(14.78%)、DRB1*14(14.49%)、DRB1*04(14.49%)。DQB1位点中,频率最高的为DQB1*07(26.04%),其次为DQB1*05(19.94%)、DQB1*09(15.51%)。与其他地区不同人群相比,HLA-A、B、DRB1、DQB1各位点等位基因的分布均有显著的差异。结论重庆地区人群的HLA-A、B、DRB1、DQB1位点等位基因符合南方汉族人群分布特点,具有复杂的多态性,中国各地常见的基因均有分布,白血病及其他器官移植患者在重庆不难找到合适的供者。

沙眼衣原体和解脲支原体感染与输卵管性不孕症关系的研究

目的探讨女性生殖道沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)和解脲支原体(ureaplasma urealyticum,UU)感染与输卵管性不孕症的关系。方法检测152例不孕症患者(原发不孕症69例,继发不孕症83例)宫颈黏液的CT(免疫荧光法)和UU(液体培养法),于检查后1～6个月内月经后3～7d行子宫输卵管碘油造影或腹腔镜检查,了解输卵管通畅情况。结果输卵管堵塞患者中,UU阳性率为25.0%,CT阳性率为15.6%,合并感染者12.5%;而输卵管通畅患者中,UU阳性率为11.3%,CT阳性率5.7%,合并感染者3.4%。二者相差均显著(P<0.05)。结论支原体及衣原体感染在输卵管性不孕症的发病中起重要作用。

重庆地区脑卒中患者Hcy水平及MTHFRC677T基因多态性研究

目的 研究重庆地区脑卒中患者血浆同型半胱氨酸（Hcy）水平及亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T基因多态性的分布。方法 选取2015年4~11月在该院神经内科住院并诊断为脑卒中的患者共292例,其中排除52例未检测Hcy水平的患者,选取剩余的240例（男116例,女124例）作为本次研究对象。采用酶循环法检测患者Hcy水平。提取患者全血DNA,采用基因芯片技术检测其MTHFR C677T基因的多态性。结果 共检测出3种不同的MTHFR基因型：C677C型、C677T型、T677T型,频率分别为42.9%、44.2%、12.9%,其中C等位基因频率为65%,T等位基因频率为35%。CC基因型在男女之间的分布比较,差异有统计学意义（P=0.003）,C等位基因在男性患者中的频率明显高于女性患者（P〈0.05）。重庆地区与河南豫北地区脑卒中患者MTHFR C677C基因型与T677T基因型分布比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。TT型的Hcy水平与CC、CT型比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 重庆地区脑卒中患者MTHFR C677T基因存在多态性分布,且与河南豫北地区存在差异;MTHFR C677T基因多态性与Hcy水平相关,TT基因型的Hcy水平明显高于CC、CT基因型。

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药性和基因分型研究

目的调查重庆地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的耐药性及基因型分布。方法采用纸片扩散法测定10种抗菌药物对产ESBLs肺炎克雷伯菌的敏感性,应用PCR方法检测产酶株的TEM、SHV及CTX-M基因。结果35株产ESBLs菌对亚胺培南全部敏感,对头孢吡肟耐药率为22.9%;但对其他抗菌药物耐药率均>50%,其中对头孢噻肟、头孢他啶和头孢曲松的耐药率分别为82.9%、68.5%和65.7%;基因型分析显示有26株携带CTX-M基因,24株携带TEM基因,15株携带SHV基因。结论产ESBLs的肺炎克雷伯菌耐药严重,重庆地区以CTX-M型ESBLs多见。

锌指蛋白A20对小鼠内毒素性肝损伤的保护作用研究

目的探讨锌指蛋白A20对小鼠实验性内毒素性肝损伤的保护作用。方法以内毒素血症小鼠为动物模型,采用尾静脉注射A20表达质粒的方法,观察A20转基因处理对内毒素血症小鼠肝组织内TNF-αI、L-1β水平以及肝脏病理损伤的保护。结果A20组LPS注射24h后肝组织匀浆TNF-α表达水平为(923.2±11.97)pg/ml、IL-1β为(996.43±15.32)pg/ml,与LPS对照组比较,t检验显示P值均<0.05,A20组与LPS对照组之间TNF-α和IL-1β水平差异有统计学意义。病理分析提示A20组24h后小鼠肝脏病理损伤明显较LPS对照组轻。结论A20能够明显抑制内毒素血症小鼠肝组织的炎症反应,减轻肝组织炎症损伤。

分子生物学技术应用于病原微生物分子分型的研究进展

病原微生物的分型检测在临床感染性疾病的诊断中发挥着重要作用。随着人类基因组计划的完成,分子生物学技术为病原微生物的分型检测提供了更多的分子靶点,进一步促进了病原微生物分型技术的发展,逐步取代了传统的分型方法。本文就近年来分子生物学技术应用于病原微生物分子分型的研究进行了综述。

表面等离子体免疫传感器同步定量尿液中多种微量蛋白的研究

目的探讨并建立表面等离子体免疫传感器芯片同步定量尿液中多种微量蛋白的方法。方法采用EDC/NHS方法将微量白蛋白(MA)、α-1微球蛋白(A1M)、β-2微球蛋白(B2M)、尿IgG的单克隆抗体固定于免疫传感器芯片之上,并用表面等离子体共振传感器(surface plasmon resonance,SPR)检测样本中微量蛋白的含量。利用4种微量蛋白的标准血清建立标准曲线,然后对其进行灵敏度、特异性等指标的方法学评价。以免疫散射比浊方法为参考方法,检测125例临床患者24 h尿液样本的微量蛋白浓度,比较2种方法检测相同样本时的结果差异。结果该表面等离子体共振免疫传感器芯片具有良好的操作性能和检测特异性。其标准曲线的R2均在0.98以上。其检测灵敏度分别是A1M为5μg/L,B2M为7.3μg/L,MA为11.5μg/L,IgG为22μg/L。所有4项指标可在20 min之内同步完成。与微量蛋白检测的经典方法免疫散射比浊法相比,两者的相关性和一致性较高。结论表面等离子体免疫传感器芯片可实现尿液中多种微量蛋白的快速、准确、同步定量。

RCA技术检测甲型H1N1流感病毒耐药基因单碱基突变的应用研究

目的建立一种检测甲型H1N1流感病毒耐药基因单碱基突变的滚环扩增技术(rolling cycle amplification,RCA)。方法以甲型H1N1流感病毒耐药基因M2基因和NA基因为研究对象,设计检测该基因突变位点的环化探针,环化探针通过与发生单碱基突变的基因特异性结合并被连接成闭合环状,进行滚环扩增后从而特异性地检测单碱基突变。讨论用于该检测的RCA技术的合适反应条件,通过对人工合成的野生型和突变型靶序列检测,确定该方法的特异性和灵敏度。最后通过对临床标本的检测及与测序结果比对,验证该方法的准确性。结果检测单碱基突变需要严格的反应条件,采用热循环连接法和提高连接温度(65℃),保证了检测特异性。通过对含有不同浓度突变靶序列标本的检测确定了该方法能检测出最低1%含量的突变株。RCA技术检测结果与测序方法结果一致。结论成功建立检测甲型H1N1流感病毒耐药基因单碱基突变的RCA技术。

mdr1基因C3435T多态性与口服FK506后血药浓度关系的实验研究

目的调查中国汉族肾脏移植人群mdr1基因C3435T单核苷酸多态性与口服FK506后血药浓度的关系。方法采用不同引物进行PCR扩增了17例中国汉族人群的基因组,判断人群的C3435T基因型,结合其口服FK506 12 h后血药浓度,判断二者是否存在关联。结果口服相同剂量的FK506以后,基因类型为T/T的患者血药浓度最高,C/T次之,C/C最低,三者存在显著差异(P<0.05)。结论mdr1基因的C3435T与口服FK506后的血药浓度密切相关,检测汉族肾脏移植患者mdr1基因的C3435T,对指导临床上FK506的使用有一定帮助。

系统性红斑狼疮患者静脉血BCMA和CD138^+浆细胞的研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者和健康者静脉血B淋巴细胞成熟抗原(BCMA)表达和CD138+浆细胞数量的差异。方法将40例SLE患者血液标本作为SLE组,30例健康人血液标本作为对照组,采用荧光定量实时聚合酶链反应及酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测BCMA的表达,流式细胞技术检测静脉血CD138+浆细胞数量。结果 SLE组患者静脉血中BCMA mRNA水平、蛋白含量以及CD138+浆细胞的数量明显高于对照组(P<0.05)。结论 SLE患者中浆细胞数量的增多可能与BCMA高表达相关。

漏声表面波传感器生物信号放大系统的研究

目的研究利用"RecA蛋白-互补单链DNA"探针与bis-PNA/dsDNA复合物相结合,作为生物信号放大系统提高传感器检测灵敏度的可行性。方法漏声表面波传感器检测通道金膜表面先固定针对人乳头瘤病毒(HPV)的bis-PNA探针,加入HPV基因组DNA与之完全反应后,再加入不同浓度的"RecA蛋白-互补单链DNA"探针,在反应过程中加入ATPγS提供能量,分别探索优化RecA蛋白及ATPγS的最佳反应浓度。结果当RecA蛋白浓度为45μg/ml,所引起的相位变化值为(11.74±1.03)°,显著高于其他浓度组(P<0.01);在最佳RecA蛋白浓度下,当ATPγS浓度为2.5 mmol/L时,所引起的相位变化值为(10.71±0.73)°,显著高于其他ATPγS浓度组(P<0.01)。结论"RecA蛋白-互补单链DNA"探针复合体与bis-PNA/dsDNA复合物相结合可以有效提高传感器的检测灵敏度,并明显缩短检测时间。

临床生化检验见习带教方法探讨

临床见习是医学教学中的重要环节，是理论与实践相结合的第一步，是使学生获得临床感性认识并培养其能力的一种重要教学形式，在现代医学教学中起着承前启后的重要作用。而临床生化检验是一门集基础理论与专业技术紧密相结合的应用性专业学科，

检验医学专业临床见习中问题式教学法的应用

目前,检验专业临床见习仍然采用传统的教学方式,造成学生的临床知识比较有限,对疾病的诊疗过程不甚了解,只能机械、被动按照临床医生的检验要求进行项目检测。问题式教学法是一种以解决问题为主的教学模式,与传统教学模式相比,能够加强学科间的渗透与综合,能扩大学生知识面,培养学生综合素质,提高其解决临床问题的能力,激发其学习的积极性、主动性和创造性,有助于培养出具有个体发展优势的、全面发展的高素质人才。

结核感染者外周血单个核细胞NLRP3的表达研究

目的检测NLRP3mRNA在潜伏期、活动期结核患者及健康者中的表达差异,探讨NLRP3在结核感染中的作用。方法选取10例活动期结核患者(活动期结核组),20例潜伏期结核患者(潜伏期结核组),20例健康体检者(正常对照组)作为研究对象,利用反转录PCR方法检测各组研究对象外周血单个核细胞中NLRP3mRNA的表达水平,并比较各组间的差异。结果活动期结核组NLRP3 mRNA表达量是正常对照组的3.71倍,差异有统计学意义(P<0.05);潜伏期结核组NLRP3 mRNA表达量是正常对照组的1.60倍,差异无统计学意义(P>0.05)。结论NLRP3可能参与了结核活动期的炎症反应过程,为进一步研究其在抗结核感染中的作用打下了基础。

MIF水平及MIF-173 G/C多态性与结核病关系研究

目的研究结核病患者巨噬细胞移动抑制因子(migration inhibitory factor,MIF)表达水平,分析MIF-173G/C多态性与结核杆菌易感性关系。方法选取第三军医大学大坪医院野战外科研究所呼吸科2009年9月至2010年9月结核病患者68例及70例健康体检者,采用RFLP-PCR的方法分析2组MIF-173基因型,ELISA法检测血清中MIF水平。结果结核病组中MIF-173 CC纯合基因型及MIF-173*C等位基因频率较正常对照组明显升高(OR值分别为3.99和1.58,P=0.003和0.02),结核组MIF水平明显高于对照组[(705.21±67.98)pg/mlvs(355.31±57.29)pg/ml,P<0.01],表达水平平均升高1倍左右。结论 MIF-173*C基因型与结核杆菌易感有关,在结核病发病中可能发挥重要作用。

铜绿假单胞菌lasR基因反义肽核酸序列筛选及其抑制生物被膜形成的研究

目的筛选靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸序列,探讨其对铜绿假单胞菌的生物被膜形成能力的影响。方法针对铜绿假单胞菌lasR基因设计4条反义寡核苷酸序列,利用斑点杂交筛选出与lasR基因结合最佳的反义寡核苷酸序列,以此合成与穿膜肽连接的肽-肽核酸序列。分别用不同浓度的肽-肽核酸导入铜绿假单胞菌生物被膜模式菌PAO1中,测定不同时相点细菌生长光密度[D(600)]值并进行菌落计数,观察肽-肽核酸对其生长的抑制作用。利用光学显微镜和扫描电镜观察生物被膜形成情况。q PCR方法检测lasR mRNA表达。结果斑点杂交实验结果显示:4条反义寡核苷酸序列中3条有杂交信号产生,其中第1条序列信号最强,以此为基础合成反义肽核酸。不同浓度的肽-肽核酸对铜绿假单胞菌表现出不同程度的体外抗菌活性,且随着浓度增加,抗菌活性增强。结论有效筛选出高效反义核苷酸序列,经筛选出的靶向铜绿假单胞菌lasR基因的反义肽核酸对铜绿假单胞菌的生长及生物被膜形成能力有明显抑制作用,同时抑制lasR mRNA的表达。