计算法鉴定寄生虫基因

许多寄生虫基因组计划已经启动并正在执行中,需对大量有关核苷酸序列的数据进行分析.当前急需一种理论性工具来进行基因组数据的分析,包括蛋白质编码序列的鉴定,为此已建立了多种计算方法.常用的基因鉴定法有序列相似性研究、基因标记(GeneMark)、GLIMMER、GeneId、GRAIL、GENEFINDER和TESTCODE等,它们运用了一系列的数学技术,如神经网络、马尔科夫链分析、隐藏性马尔可夫模型、动态性程序和语言分析等.

约氏疟原虫子孢子入侵wistar大鼠肝内的扫描电镜观察

在约氏疟原虫子孢子接种大鼠１０－３０ｍｉｎ后，通过大鼠的肝脏冷冻断裂，对其断裂面进行扫描电镜观察。结果显示：在接种后１０ｍｉｎ就可见较多子孢子被枯否氏细胞捕获，有些子孢子正侵入肝细胞；子孢子与肝细胞膜接触时，膜内凹，随着侵入继续，内凹加深；部分子孢子似可直接与肝细胞膜接触。

大劣按蚊雄蚊的交配能力和日龄及交配次数对其生殖系统形态学影响的观察

本文在实验室条件下,观察大劣按蚊(Anopheles dirus)雄蚊交配能力和日龄、交配及交配后间歇期对其生殖系统形态学的影响。羽化后1小时可见丝状精子,22小时尾器全部旋转180°。3—12日龄雄蚊交配能力最强。随着日龄增加,精囊数逐渐减少,睾丸内成熟精子占据整个睾丸的比例逐渐增加,附腺透明区宽度变窄直至消失。多次交配比一次交配后,其睾丸内精子量减少、透明区宽度增加明显;交配后经过一定间歇期后,生殖系统能重新恢复活力,但多次交配后其恢复程度和速度远比交配一次者为慢。大劣按蚊雄蚊生殖系统的变化可初步判断其日龄和交配史。

斯氏按蚊总RNA的提取与标本保存方法的研究

本研究利用Tripure试剂盒 ,成功地提取了斯氏按蚊总RNA ,并对不同方法保存的标本所提RNA的质量进行了比较 ,结果显示新鲜标本所提RNA质量最高 ,将标本在Tripure提取液中匀浆后置于 4℃保存的方法 ,较其它两种方法保存效果更好 ,此方法保存的标本 5天内进行RNA提取 ,能够保证质量。

斯氏按蚊血淋巴酚氧化酶与约氏疟原虫卵囊黑化的关系

[目的 ]探讨酚氧化酶 (phenoloxidase,PO)与疟原虫卵囊黑化的关系。 [方法 ]以斯氏按蚊 /约氏疟原虫为模型 ,对 4组斯氏按蚊 (不吸血组、吸正常血组、吸感染血组和硝喹组 )血淋巴进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)和凝胶图像分析 ,检测单酚氧化酶 (monophenoloxidase ,MPO)和二酚氧化酶 (diphenoloxidase,DPO)活性。 [结果 ]吸正常血组和不吸血组蚊血淋巴中MPO及o DPO活性无明显差异 ;与吸正常血组或不吸血组相比 ,感染组MPO及o DPO活性无明显变化 ,但用药组d1 0 则显著增加 ,d1 5 显著降低。 [结论 ]斯氏按蚊血淋巴中PO活性变化与约氏疟原虫卵囊黑化在时间上一致。

大劣按蚊血细胞对约氏疟原虫卵囊黑化作用的观察

大劣按蚊感染约氏疟原虫后第５ｄ和第１５ｄ，电镜下分别观察退变的卵囊周围血细胞的反应。结果表明：感染后第５ｄ卵囊发育较小，卵囊周围即可见血细胞附着；第１５ｄ卵囊有些已明显空泡化，其外周可见较多血细胞，血细胞内、血细胞和卵囊之间、甚至卵囊内有许多微管结构之颗粒及其它颗粒，有些卵囊已黑化，其外周仍可见到血细胞的残骸及黑色素样颗粒。提示对约氏疟原虫不易感的大劣按蚊引起囊退变后可引致血细胞趋附，后者可释放颗粒物质或许还有其它物质，这对包被形成和卵囊黑化起着重要的作用。

大劣按蚊不同时期游离氨基酸的变化

大劣按蚊幼虫期有28种氨基酸,β-丙氨酸含量最高;蛹期有27种氨基酸,雄蛹氨基酸总量比雌蛹高,其中羟脯氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、酪氮酸、β-丙氨酸,精氨酸含量较高;雄蚊有28种、雌蚊有27种氨基酸,雄蚊氨基酸总量比雌蚊高,其中羟脯氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、组氨酸、精氨酸含量较高。结果表明:同一种昆虫,不同时期、雌、雄的氨基酸含量和比例有差异。

感染食蟹猴疟原虫的大劣按蚊血淋巴和胃水解物氨基酸分析

大劣按蚊感染食蟹猴疟原虫B株后第10d,血淋巴内的蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、鸟氨酸、赖氨酸含量均较对照组低。第9d蚊胃水解物分析结果表明,感染蚊胃中的多数氨基酸含量增加,其中缬氨酸、蛋氨酸、酪氨酸的含量是对照组3倍以上,氨基酸的总量比对照组高70％以上。

聚肌胞对大鼠体内约氏疟原虫子孢子入侵及红外期发育的影响

用干扰素诱导剂聚肌胞(Poly I:C)静脉注射(iv)Wistar大鼠体内,18h后,iv约氏疟原虫子孢子,42h时,肝内红外期(EEF)数量显著减少。其子孢子发育率仅为对照组的5—12％,但大小及成熟程度均未受到影响。接种子孢子后2h,使用Poly I:C,则子孢子发育率、EEF大小及成熟程度均与对照组无异。含干扰素血清与子孢子共孵40min,不影响子孢子的入侵及随后的发育。结果提示干扰素的抗疟作用并非针对EEF本身。

约氏疟原虫红外期体外培养的研究

通过药物二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌，取肝癌白色结节用胶原酶消化，体外培养建立肝癌细胞系，筛选出对约氏疟原虫子孢子敏感的大鼠肝癌细胞系，建立了大鼠肝癌细胞──约氏疟原虫体外培养系统。约氏疟原虫子孢子接种单层培养的肝癌细胞，４８ｈ可见红外期裂殖体，７２ｈ后将培养细胞胰酶消化，消化下的细胞及培养上清一并离心，悬液接种健康小鼠，可使之感染疟疾。

枯否氏细胞、肝细胞对疟原虫子孢子感染和发育的影响

１次接种９００万约氏疟原虫子孢子悬液，３０ｍｉｎ后的肝脏超微结构显示，枯否氏细胞吞噬复合体，邻近肝细胞线粒体空泡化，嵴突消失；枯否氏细胞内可见形态退变的子孢子；线粒体、内质网、核糖体丰富的肝细胞内子孢子结构清晰；线粒体空泡化、嵴突消失的肝细胞内子孢子退变；子孢子进入枯否氏细胞或肝细胞的时间不一，１个肝细胞内可见２个子孢子。

大鼠营养不良对约氏疟原虫子孢子侵入及其红外期发育的影响

人类的疟疾流行史表明,处于饥饿或营养不良状态下的人群,其疟疾发病率较低,临床症状较轻,动物实验证明,疟原虫红内期的发育对宿主饲料营养成份的依赖性非常明显。但宿主营养状态对子孢子侵入和红外期发育的影响尚未见有报道。本文观察了大鼠在营养不良条件下对约氏疟原虫子孢子侵入及红外期发育的影响。 将感染约氏疟原虫(Plasmodium y.yoelii)BY265 后14天的斯氏按蚊一批,剪去腹部,研磨。

大劣按蚊生殖营养周期的实验室观察

本文观察大劣按蚊的生殖营养周期。在实验条件下每只雌蚊一生平均产卵326.92个,其中有2只产卵900个以上,雌蚊寿命可达61天,有2只雌蚊吸血9次,完成8个生殖营养周期。

IL-6对约氏疟原虫配子体感染力的影响

在血传感染约氏疟原虫后第５４ｈ、７０ｈ分别皮下注射１０００Ｕ人ＩＬ－６或血传感染后第７０ｈ静注２０００Ｕ人ＩＬ－６，在第７２ｈ分别被斯氏按蚊吸血，吸血后第７ｄ解剖蚊胃，观察其感染率、感染度。结果表明：按不同途径、不同时间给感染小鼠注入ＩＬ－６２０００Ｕ，与对照组相比，对按蚊的感染率和感染度无明显影响。

两种按蚊对食蟹猴疟原虫B株敏感性的比较

用食蟹猴疟原虫B株接种恒河猴后,在最佳感染时机血餐,第7d胃感染率,大劣按蚊平均为94.9％(74/78),斯氏按蚊平均为94.6％(70/74)。第12d涎腺感染率,大劣按蚊平均为93.9％(62/66),斯氏按蚊平均为92.2％(59/64),两者的胃和涎腺感染率无显著性差异。卵囊均数,大劣按蚊为124.2个,斯氏按蚊为47.6个,前者为后者的2.6倍。在欠佳感染时机血餐,大劣按蚊的胃和涎腺感染率均高于斯氏按蚊,大劣按蚊的卵囊均数为斯氏按蚊的3倍余。

梯度离心法与低速离心法分离疟原虫子孢子的效果比较

用泛影葡胺不连续密度梯度离心法分离疟原虫子孢子,回收率可达50～75％,可显著提高子孢子悬液的纯净度。所得子孢子对大鼠和小鼠的感染力无明显降低。在4℃M199中48h后,部分子孢子仍具感染力。用这种子孢子静脉注射感染动物,可大大降低由蚊媒组织所导致的肝细胞退行性变化。

食蟹猴疟原虫B株配子体对中老龄大劣按蚊的感染性

用中老龄（羽化后８．７５—１４．７５和２４．７５日龄）大劣按蚊（海南株）与其４．７５日龄蚊（对照）同时在感染Ｂ株猴疟的同一供血猴上血餐，饱血蚊饲养至第６—８ｄ解剖检查蚊胃、第１２ｄ检查涎腺。结果表明中老龄蚊胃感染率（８５—１００％）与对照（７７—１００％）无显著性差异，涎腺感染率中龄蚊（８３—１００％）与对照（７５—１００％）无显著性差异，胃与涎腺感染率比值中龄蚊（０．９２—１．０）与对照（０．９３—１．０）均很高，中老龄蚊的卵囊均数（７．３—１１５．０）为对照（５．４—８３）的１．Ｏ３—１．５８倍。结果提示Ｂ株猴疟配子体对中老龄大劣按蚊的感染性未下降。感染后的半数存活时间（ＬＴ５０），中龄蚊（１１—１５）比对照（１３—１８）少２—３ｄ。

旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物中46-58kD抗原诱发小鼠保护性免疫的研究

为探讨旋毛虫肌肉期幼虫分泌排泄物（ＴｓＬ１ＥＳ）中４６５８ｋＤ抗原的保护性免疫作用，本文用该纯化抗原组分加福氏完全佐剂（ＦＣＡ）腹腔注射免疫昆明小鼠３次，继以旋毛虫感染性幼虫３００条攻击感染，感染后第７天计数小鼠肠道成虫数、第３０天肌肉幼虫数和血清抗体ＩｇＧ滴度。结果：４６５８ｋＤ抗原免疫鼠的肠道成虫减虫率、肌肉幼虫减虫率和血清抗体ＩｇＧ的几何平均倒数滴度分别为４１８％、４６１％和２８４１２；与ＴｓＬ１ＥＳ诱导的保护性免疫力（４８３％、５０２％和３４５８６）水平接近；显著高于佐剂对照组（４８％、８３％和７４８６）。