琼脂糖明胶皮下埋植法富集、分离具有自发NETs倾向的小鼠中性粒细胞

目的建立小鼠中性粒细胞富集、分离的方法,为进一步探讨中性粒细胞及中性粒细胞胞外捕网（NETs）的免疫损伤效应奠定基础。方法制备2%琼脂糖0.2%明胶块,埋植于健康6-8周龄C57雌性小鼠皮下富集中性粒细胞,96 h后取出明胶块置于PBS中进行游离释放,收集细胞。荧光染色进行细胞形态学观察,采用Gr-1及CD11b进行流式细胞分析鉴定。结果不同表面积的明胶能够分离出106-107数量级细胞,具有中性粒细胞典型的分叶核形态学特征,流式细胞分析鉴定为Gr-1＋CD11b＋的中性粒细胞,纯度可达95.7%,并观察到典型NETs形成,其数量随分离时间的延长而增加。结论通过皮下埋植琼脂糖明胶成功富集、分离大量高纯度且具有自发NETs倾向小鼠中性粒细胞。