骨髓切片组织病理检查在血液病诊断中的临床应用

目的研究骨髓切片组织病理检查对血液病的诊断价值。方法采用骨髓活组织病理学、骨髓涂片细胞形态学检测方法。结果300例血液病患者中骨髓细胞形态学检查与骨髓活检结果完全吻合者215例(占71.67%),骨髓形态学不能肯定诊断而经骨髓活检结果确诊的病例30例(占10%),骨髓细胞形态学检查与骨髓活检结果不相吻合的有55例(占18.33%)。结论骨髓活检病理诊断是对骨髓形态学检查的补充和修正,二者合用能提高血液病诊断的正确率。在MDS、AA、MF的诊断上,骨髓活检病理检查具有决定性的意义,对转移性肿瘤和急性髓细胞白血病是否合并骨髓纤维化的诊断也具有特殊价值。

外周血干细胞移植治疗血液肿瘤283例临床观察

目的观察外周血干细胞移植（PBSCT）治疗血液肿瘤临床疗效。方法自2001年3月～2007年4月，对283例血液肿瘤患者施行外周血干细胞移植，其中自体移植231例，异基因移植52例，观察其临床疗效和并发症。结果除1例ALL外，230例患者行自体外周血干细胞移植后造血功能均快速重建。异基因移植中急性移植物抗宿主病发生率23.1%，慢性移植物抗宿主病发生率21.2%，其中局限型占15.4%；9例患者于移植后1～16个月分别死于移植物抗宿主病、感染和疾病复发或进展，35例患者已无病存活3～46个月。结论外周血干细胞移植是治疗血液肿瘤的有效方法，依据患者疾病诊断、年龄、身体状况、供者情况选择移植方式。

自体造血干细胞移植治疗结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型9例临床分析

目的观察放/化疗加APBSCT治疗NK/T细胞淋巴瘤鼻型的疗效。方法用CHOP＋Lasp方案1个疗程、CHOP（或MOED、COED）＋HD-MTX方案化疗2～3个疗程，行干细胞动员、采集，CEAC方案预处理及APBSCT及移植后局部病灶的放疗；病程中共行3次鞘内注射化疗药，6～8次联合化疗。结果Ⅰ～Ⅱ期患者移植后1年生存率55.6%（5/9例），2年生存率为44.4%（4/9例）；Ⅲ～Ⅳ期患者移植后3个月～1年内由CR到病情复发，死亡4例，2年生存率为0。结论NK/T细胞淋巴瘤鼻型分期晚的治疗效果差，大剂量化/放疗＋APBSCT治疗NK/TCL可能是有效的措施之一。

人脐血源基质细胞移植促进裸鼠造血损伤修复的实验研究

目的观察人脐血源基质细胞(hUCBSCs)移植对裸鼠造血损伤的修复效果。方法6.5Gy辐照裸鼠后,分别从尾静脉输入1×105个人脐血源基质细胞及生理盐水,分别于移植+1、+3、+5、+7、+10、+14、+21d观察裸鼠血象、骨髓象以及不同时相点CFU-F、CFU-GM、BFU-E、CFU-Meg动态变化。结果HUCBSCs移植组裸鼠在血象、骨髓象恢复时间、不同时相点骨髓CFU-F、CFU-GM、BFU-E、CFU-Meg等方面与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论HUCBSCs移植具有促进裸鼠造血损伤修复的作用。

外周血造血干细胞动员采集264例临床分析

目的探讨外周血造血干细胞动员采集的方法及其效果。方法对恶性血液病患者及健康供者经单一生长因子和化疗联合生长因子方案动员后,使用CS3000 Plus3000血细胞分离机(Baxter公司)进行外周血造血干细胞采集,对不同动员方案、疾病、年龄、性别及供者的动员采集效果进行分析。结果所有患者均成功动员采集。健康供者较恶性血液病患者动员效果佳;在恶性血液病中,非霍奇金淋巴瘤动员效果最好,多发性骨髓瘤最差。恶性血液病患者中,采集所获得的单个核细胞数中,非霍奇金淋巴瘤最好,多发性骨髓瘤最差,在采集所获得的CD34+细胞数中,急性淋巴细胞白血病最好,多发性骨髓瘤最差;化疗联合G-CSF和IL-11为最好的动员方案;成人采集效果最好,老年患者最差;男性较女性好。健康供者男女采集效果无差别;健康供者较恶性血液病患者采集效果好。无论是健康供者还是恶性血液病患者,动员采集过程中不良反应较小。结论根据不同的疾病、性别、年龄,采用不同的动员采集方案,一般可以成功采集。

格列卫治疗慢粒白血病发生严重体液潴留1例报道及文献复习

目的探讨应用伊马替尼(格列卫)治疗慢性粒细胞白血病发生严重水潴留的处理及其可能的发生机制。方法报道1例在应用格列卫治疗慢性粒细胞白血病加速期患者的过程中,发生严重全身水肿、胸腹腔积液的处理过程及经验,结合文献对其发生的可能机制进行综述。结果在用格列卫治疗慢粒的各阶段均有少数患者可能发生严重的水肿和体液潴留的不良反应,但在急变期和高龄患者较多见,若不及时处理有可能危及生命,需高度重视。格列卫引起严重水肿的机制目前认为与其抑制PDGF受体的活性相关。结论在应用格列卫治疗慢粒时应警惕该类不良反应的发生,一旦出现需及时对症处理并严密观察,必要时停药,待症状消失后再开始用药是安全的。

异基因造血干细胞移植55例GVHD的临床观察

目的探索异基因造血干细胞GVHD的有效防治方法。方法异基因移植患者55例，慢性粒细胞白血病（CML）30例，急性髓系白血病（ALM）12例，急性淋巴细胞白血病（ALL）11例，急性混合细胞白血病（MAL）2例。同胞间人类白细胞抗原（HLA）全相合移植45例，非血缘异基因移植7例，HLA半相合移植3例。43例患者采用MMF、CsA联合短程MTX方案。12例患者采用MMF、CsA、短程MTX联合ATG方案。结果所有患者造血均顺利重建，12例（21.1%）发生Ⅰ～Ⅱ度aGVHD；11例（20%）发生cGVHD，局限型8例，广泛型3例。aGVHD和广泛型cGVHD经甲强龙冲击治疗后均得到控制。结论MMF、CsA、MTX、ATG三联方案能有效控制同胞间HLA全相合移植的aGVHD，加用ATG能理想的预防同胞间HLA半相合移植和非血缘异基因移植aGVHD的发生。

PINCH-1基因RNAi慢病毒载体的构建及鉴定

目的构建人PINCH-1基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,并转染人骨髓基质细胞初鉴定转染效果。方法利用RNAi设计软件,设计合成针对人PINCH-1基因的特异性siRNA序列,利用酶切反应合成包含特异性shRNA序列的pGC-SIL-GFP慢病毒载体GC-shBC047440,通过GC-shBC047440与pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染包装293FT细胞产毒,并利用GFP蛋白表达水平进行滴度测定。获取的病毒上清筛选最适感染复数(MOI值),并感染骨髓基质细胞,RT-PCR和Western blot检测重组慢病毒对骨髓基质细胞PINCH-1蛋白和RNA表达的影响。结果酶切鉴定证实成功构建针对人PINCH-1基因的RNAi慢病毒干扰载体GC-shBC047440,载体感染人骨髓基质细胞后PINCH-1RNA表达较未感染组和空载体对照组显著下降。结论成功构建针对人PINCH-1基因的RNAi慢病毒载体,该载体能有效沉默PINCH-1基因的表达。

Rh阴性血型同胞间半相合造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病临床研究

目的总结国内首例Rh阴性血型同胞间半相合造血干细胞移植经验。方法对1例53岁慢性粒细胞白血病慢性期女性患者实施同胞间半相合造血干细胞移植(外周血干细胞加骨髓干细胞混合移植),观察造血重建及移植相关并发症。结果患者ANC>0.5×109/L,PLT>20×109/L的时间分别为+15d,+18d;染色体检查提示有XY染色体;+39d内未观察到急性移植物抗宿主病、肝静脉闭塞病、肝肾功能损伤等移植并发症。结论半相合造血干细胞移植可解决供者来源困难,是治疗慢性粒细胞白血病的有效手段。

rhG-CSF联合rhTPO促进异基因造血干细胞移植后造血重建的临床研究

目的探讨重组人粒细胞刺激因子(recombinant human-granulocyte colony sti mulating factor,rhG-CSF)和重组人血小板生成素(recombinant human-thrombopoietin,rhTPO)促进异基因造血干细胞移植后造血功能重建的作用。方法选取15例异基因造血干细胞移植患者,其中同胞间全相合移植6例,非血缘全相合移植7例,半相合移植2例,于移植后+1d予以rhG-CSF(300μg/d)和rhTPO(15 000u/d)治疗,观察患者造血重建的时间和相关并发症发生情况。结果患者于移植+15d(+8^+20d)N>0.5×109/L,移植+19d(+11^+23d)PLT>30×109/L,提示造血功能重建。移植+30d复查短串联重复序列(STR)检测,均提示重建造血为供者造血。随访至今,所有患者造血稳定重建。15例患者中10例出现感染、发热;15例患者均出现不同程度的皮下出血,多表现为皮肤淤点淤斑,2例患者出现鼻出血;3例患者在造血重建前夕出现全身骨痛。3例出现Ⅱ度以下急性移植物抗宿主病(GVHD),2例患者出现轻度的慢性GVHD。结论rhG-CSF联合rhTPO促进异基因造血干细胞移植后造血重建疗效肯定,减少移植感染、出血等并发症的发生率,缩短层流病房住院日,减少血小板、红细胞等血液制品的输入量,降低移植费用。

激光共聚焦扫瞄显微镜检测急性白血病骨髓基质细胞Cx43表达

目的观察急性白血病骨髓基质细胞上connexin43蛋白的表达以及GJIC功能。方法体外培养正常及急性白血病骨髓基质细胞,采用激光共聚焦扫瞄显微镜观察二者Cx43表达的变化;采用荧光漂白恢复技术比较二者之间GJIC功能的差异。结果正常及急性白血病骨髓基质细胞上Cx43表达的像素密度分别为(81.04±8.84)%和(34.10±17.91)%,两组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较正常骨髓基质细胞明显减弱。

VCAM-1和EGFP双基因共表达重组腺病毒的构建

目的构建VCAM-1和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体。方法采用DNA重组技术,将目的基因VCAM-1克隆至含有报告基因EGFP的穿梭质粒;在BJ5183细胞中与pAdeasy-l质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体。结果(1)VCAM-1基因与pAdTrack-CMV载体成功连接,经NotⅠ/XhoⅠ双酶切后电泳可见2个大小约为9kb和2kb左右条带,经PCR法扩增后电泳可见一个600bp左右条带,证明pAdTrack-CMV-VCAM-1重组质粒构建成功;(2)pAdTrack-CMV-VCAM-1质粒与pAdeasy-l质粒同源重组后,产物经PacⅠ酶切后电泳可观察到2个大小约为31kb和4kb左右条带,与预期结果相符。结论Ad-VCAM-1-EGFP重组腺病毒载体构建成功。

柔红霉素诱导白血病细胞凋亡和抑制增殖的实验研究

目的观察不同浓度柔红霉素(DNR)对Jurkat细胞生物学特性的影响。方法采用不同浓度的DNR作用Jurkat细胞,观察细胞的生长状况,在不同的时间点收获细胞,检测DNR作用前后Jurkat细胞生物学特性的改变。结果当0.5μmol/LDNR作用12h或18h,可以保证低死亡率的同时,细胞发生凋亡的比率最高;DNR抑制Jurkat细胞bcl-2、PCNA蛋白的表达,使更多细胞受阻于G0/G1期。结论在合适的DNR浓度及作用时间条件下,可能通过抑制Jurkat细胞bcl-2、PCNA蛋白的表达达到诱导凋亡、抑制增殖的作用。

HIF-1α基因miR RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建人HIF-1α的mi R RNAi慢病毒载体。方法利用已经构建成功的针对人HIF-1α基因的mi RNA干扰质粒pcDNATM6.2-GW/EmGFP-HIF-1αmi R,通过BP/LR反应,将EmGFP-HIF-1α-mi R表达框整合重组到产毒质粒pLenti6/V5-DEST中测序鉴定,用PLP1、PLP2和PLP/VSVG质粒共转染包装293FT细胞产毒,并利用GFP蛋白表达水平进行滴度测定。结果经测序鉴定证实成功构建针对人HIF-1α基因的mi RNA慢病毒干扰载体pLenti6/V5-GW/EmGFP-HIF-1αmi R。结论成功构建针对人HIF-1α基因的mi RNA慢病毒RNA干扰载体。

bFGF预防小鼠半相合造血干细胞移植后a-GvHD的实验研究

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对半相合造血干细胞移植(HSCT)小鼠急性移植物抗宿主病(a-GVHD)的影响及其可能机制。方法建立小鼠半相合HSCT模型,随机分为分为实验1组(n=12):每只小鼠按100μg/kg输注bFGF;实验2组(n=12):每只小鼠按20μg/kg输注bFGF;空白对照组:半相合HSCT移植后不作任何处理。观察各组小鼠的a-GVHD临床表现及生存时间,移植后14 d对小鼠皮肤、肝脏和小肠进行病理分析,并检测小鼠间充质干细胞(MSC)变化情况。结果和对照组相比,实验组的GVHD明显减轻。Kaplan-Meier生存曲线显示实验1组的生存率明显高于实验2组和对照组(P<0.05)。病理切片显示实验1、2组的GVHD严重程度显著轻于对照组,实验1组骨髓间充质干细胞增殖良好。结论 bFGF对半相合HSCT小鼠的a-GVHD具有一定的预防作用。

人脐血源基质细胞对小鼠MHC半相合骨髓移植后GVHD的影响

目的探讨人脐血源基质细胞(hUCBDSC)对MHC半相合移植小鼠(移植物抗宿主反应)GVHD的影响及其可能机制。方法参照本室的方法从人脐血中分离培养hUCBDSC。建立小鼠MHC半相合骨髓移植GVHD模型,同时输注一定数量的hUCBDSC,观察小鼠的临床表现并进行GVHD评分,绘制Kaplan-Meier生存曲线,移植后14 d对小鼠皮肤、肝脏和小肠进行病理分析,流式细胞术分析小鼠脾脏中CD4+Tregs的比例。结果和对照组相比,实验组的GVHD临床表现明显减轻。Kaplan-Meier生存曲线显示实验组的生存率明显高于对照组。移植后14d的病理切片HE染色结果显示实验组的病理程度显著低于对照组,脾脏CD4+Tregs阳性率为10.5±0.7%,显著高于对照组6.6±0.5%。结论 hUCBDSC可能通过CD4+Tregs减轻MHC半相合移植小鼠GVHD临床表现和病理变化,提高小鼠生存率。