PBL教学模式在临床微生物学实验教学中的应用

临床微生物学检验是一门以实验为基础的学科,实验教学是强化学生理论知识、培养学生实践技能和科研素质的重要工具。PBL的全称是Problem-Based Learning,是以问题为基础、以学生为中心、以教师为引导的小组讨论,发展学生综合思考能力和解决实际问题能力的教学方法。

生物波理论的研究

生物波理论的研究第三军医大学检验系临床微生物教研室重庆６３００３８刘俊康，郭刚，张守印，徐启旺生物学的发展，进入今天的阶段，已显示出令人惊叹的特点，主要表现为变化急骤：还原主义的代表研究是分子生物学，它使人类的研究继亚细胞水平后达到更细微的水平，进入...

大肠杆菌不耐热肠毒素的分子生物学特性

大肠杆菌不耐热肠毒素是由A、B两种亚单位组成的AB5型蛋白 ,其中A亚单位具有ADP 核糖基化酶活性 ,B亚单位具有与肠粘膜上皮细胞膜上的神经节苷脂 LT的受体结合的作用。它能引起人和猪等动物的腹泻。另外 ,它还是强有力的粘膜免疫原和粘膜免疫佐剂。

人IL-24基因的克隆、表达、纯化及体外诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的:克隆人白细胞介素-24(IL-24)基因,在大肠杆菌中融合表达,纯化复性,研究此融合蛋白的抗肿瘤活性。方法:分离人外周血单个核细胞,ConA刺激培养,提取细胞总RNA,RT-PCR技术克隆人IL-24基因。将IL-24插入到pET32a(+)中,构建重组表达载体IL-24/pET32a,IPTG诱导在E.coli表达。Edman法N端测序,将鉴定正确的蛋白亲合层析纯化。MTT比色法体外分析杀伤肿瘤细胞的活性。结果:获得人IL-24基因,序列分析与GenBank公布一致。表达载体用双酶切和PCR鉴定正确。重组工程菌经IPTG诱导后表达相对分子质量(Mr)约为35000的融合蛋白。N端测序正确,鉴定该蛋白以包涵体形式表达。包涵体经洗涤、溶解后,亲合纯化得到纯度大于95%的融合蛋白。复性后表达产物能显著诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡(P<0.05)。结论:IL-24融合蛋白在原核细胞中高效表达,并获得高纯度、在体外明显诱导乳腺癌细胞凋亡的重组蛋白,为后续的研究提供实验基础。

类鼻疽杆菌基因组学概述及进展

类鼻疽伯克霍尔德杆菌是一种人体机会致病菌,导致的疾病称类鼻疽,是一种典型的热带疾病,能感染机体几乎任何器官。类鼻疽杆菌分布广泛,主要存在于水及土壤中,其耐受性极强,能在土壤中存活几十年之久,被美国CDC列为B类生物恐怖剂。随着病原菌的扩散和人类活动的影响,全球范围内关于类鼻疽病例报道的增加,越来越多的证据表明类鼻疽是一种正在扩散的人兽共患病。海南、广东等地正是类鼻疽感染的重灾区,而国内类鼻疽杆菌的研究尚少,也没有类鼻疽杆菌研究的标准株和基因组学理论基础,获取国际标准菌株资源受到西方国家的限制,鉴于类鼻疽杆菌的特殊性、类鼻疽流行的严峻形势及科研壁垒,加强类鼻疽的研究有着重要的社会意义和军事价值。本文总结了类鼻疽杆菌(K96243标准株)的全基因组的特点,结合当今的DNA测序的发展现状,指出开展国内类鼻疽杆菌全基因测序的必要性和紧迫性。

类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染RAW264.7细胞模型的建立

目的建立类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染小鼠巨噬细胞RAW264.7的细胞模型,为进一步研究其致病机制奠定基础。方法摸索类鼻疽伯克霍尔德氏菌培养条件、构建模型的感染条件(e.g.感染复数,感染时间),通过吉姆萨染色、透射电镜、活细胞工作站动态观察等确证胞内感染和宿主细胞的形态变化,分析病原菌侵袭率、胞内复制率和宿主反应性来评价该模型中病原菌侵入RAW264.7特点和病理损伤类型。结果确定了类鼻疽伯克霍尔德氏菌的一般培养条件,感染复数MOI=100感染宿主细胞,170g离心5min后37℃共孵1h以利于细菌侵入胞内,含250μg/ml卡那霉素的DMEM-10培养以杀死胞外病原菌。形态观察,类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染后最早8h可观察到异物多核巨细胞(MNGC),RAW264.7细胞伸出伪足,相互融合。感染初期(<3h)TNF-α升高较快,9h后则下降至低值,直至感染后期(15～24h)再次升高。结论成功构建类鼻疽伯克霍尔德氏菌胞内感染模型,拟为进一步研究其致病机制提供了条件。

幽门螺杆菌HspA与大肠杆菌LTB基因融合及表达

目的:构建和表达人幽门螺杆菌(Hpylori)热休克蛋白A亚单位(HspA)与E. coli不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的重组融合蛋白,并对其基本的生物学及免疫学特性进行研究.方法:采用PCR技术从人H pylori染色体DNA中扩增出354 bp的HspA基因,并克隆至pPLtB载体中与1tB基因融合,形成含有1tB-H spA融合基因的原核表达载体pPLH,并在工程菌E.coli JM109中诱导表达.结果:经序列分析,1tB-HspA融合基因由684个碱基组成,为编码228个氨基酸残基的多肽.SDS-PAGE和Westernblotting检测发现,融合蛋白的Mr 25×103,并与Hpylori感染的阳性血清发生抗原抗体反应,ELISA检测显示融合蛋白中存在LTB组分,并保持与LT受体-神经节苷脂GM1结合的活性.结论:LTB-HspA融合蛋白有可能用于Hpylori基因工程疫苗的研究.

铝佐剂在幽门螺杆菌疫苗中的应用

铝佐剂是到目前为止唯一被批准用于人用疫苗的佐剂,长期普遍用于多种疫苗。最近,在幽门螺杆菌(Helico-bacter pylori,Hp)疫苗的研究中,有一些关于铝佐剂的报道。本文就铝佐剂的组成、制备、免疫机制及在抗幽门螺杆菌疫苗中的研究状况做一综述。

微粒载体控释投递抗原与佐剂的应用进展

本文综述了近年来 。

流式细胞术在细胞凋亡检测中的应用

多细胞生物通过维持细胞增殖和死亡之间的均衡来实现其细胞数的动态平衡,细胞凋亡(Apoptosis)是正常生理条件下的细胞死亡现象,是维系正常生命活动的重要“杠杆”之一。对凋亡的研究将有助于揭示健康与疾病转化的机制、肿瘤的发生与转归等生命现象的本质。因此,细胞凋亡是近年来细胞生物、遗传、免疫、病理、药理、肿瘤等生命学科研究的热点。快速、准确的检测细胞凋亡的发生,是开展凋亡基础研究及临床应用的首要条件。检测凋亡的传统方法均具有一定的局限性,而流式细胞术(flow cytometry,FCM)正以其独特的优越性成为检测细胞凋亡的新技术。

细菌拉丝试验的应用

本文报道48种1267株细菌(包括:革兰氏阴性菌664株,革兰氏阳性菌603株)的拉丝试验,其结果与革兰氏染色完全一致,二者符合率为100％。拉丝试验不但能正确区别革兰氏阴性菌和阳性菌,还有助于复核革兰氏染色结果的正确性,也是此种染色质控的有力措施。

幽门螺杆菌粘附素的研究进展

幽门螺杆菌与胃的上皮细胞的强力粘附作用是幽门螺杆菌的粘附素与胃上皮细胞上受体相结合所致，其粘附作用的特异性揭示存在着复杂的粘附素和受体系统。本文综述了有关幽门螺杆菌粘附素的理化特性、基因与受体及其致病性等研究进展。

幽门螺杆菌UreB与大肠杆菌LTB基因融合及表达的研究

目的 构建和表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位 (UreB)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)的重组融合蛋白 ,并对其基本的生物学及免疫学特性进行研究。方法 采用PCR技术从幽门螺杆菌染色体DNA中扩增出 1713bp的ureB基因 ,并克隆至pFS2 .2载体中与ltB基因融合 ,将ltB ureB融合基因插入改造后的原核表达载体PinPointTMXa Ⅱ ,并在工程菌E .coliJM10 9中诱导表达。结果 经序列分析 ,ltB ureB融合基因由 2 10 3个碱基组成 ,为编码 70 1个氨基酸残基的多肽。SDS PAGE和Westernblot检测发现 ,融合蛋白的相对分子质量 (Mr)约为 75× 10 3 ,并与幽门螺杆菌感染的阳性血清发生抗原抗体反应 ,ELISA检测显示 ,融合蛋白中存在LTB组分。同时发现所表达的融合蛋白无尿素酶活性 ,但保持与LT受体 神经节苷脂GM1结合的活性。结论 LTB

小鼠巨噬细胞RAW264.7的培养技巧及经验总结

RAW264.7细胞具有很强的黏附和吞噬抗原的能力,是研究微生物学、免疫学的常用细胞株。很多研究者发现这种细胞形态极不稳定,细胞状态的评价也很困难。本文作者结合RAW264.7培养经历及文献资料探讨RAW264.7细胞培养的经验教训和评价细胞状态的方法,旨在为培养该细胞的科研工作者提供一定的借鉴。