第五次全国人体寄生虫学教学改革与课程建设研讨会在第三军医大学召开——突出学科特色,提升人体寄生虫学课程建设水平

2011年7月13日,第五次全国人体寄生虫学教学改革与课程建设研讨会在重庆召开。会议由第三军医大学基础部病原生物学教研室承办,来自全国30多所高等医学院校从事人体寄生虫学教学与研究的近60位教师代表出席了本次研讨会。第三军医大学王云贵副校长、训练部黄建军副部长、

云南省威信县24例肺吸虫病病原追踪调查

目的对云南省威信县肺吸虫病病原进行疫点追踪调查。方法收集2008～2011年确诊的来自威信县的肺吸虫病患者24例,根据病例追踪,自当地疫点采集溪蟹,带回实验室检查并殖吸虫囊蚴,鉴定虫种。结果 24例患者中游走性包块11例,占45.83%,胸腔积液型11例,占45.83%,脑型1例,占4.16%,睾丸鞘膜积液1例,占4.16%。患者主要来自扎西镇、长安乡和双河乡。检查溪蟹278只,斯氏并殖吸虫囊蚴感染率为34.17%(95/278),其中扎西镇溪蟹囊蚴感染率为33.08%(43/130),平均感染度11.63(500/43),长安村溪蟹囊蚴感染率为35.14%(52/148),平均感染度8.98(467/52)。结论云南威信县是肺吸虫病疫源地,第二中间宿主为锯齿华溪蟹,致病虫种为斯氏并殖吸虫,应加强当地肺吸虫病防治。

病原菌和宿主遗传背景在败血症发生中的作用和机制研究进展

败血症是指感染所致的全身炎症反应,是临床上导致患者死亡的重要原因之一。阐明其发生机理可为败血症的临床防治提供新思路和新方案,因此,败血症机制的研究一直来都是关注的焦点。本文就近年来对病原菌和宿主遗传背景在败血症发生中的作用和机制的研究作一综述。

三种显微技术对人毛囊蠕形螨的观察和研究

目的采用荧光显微镜、扫描电镜和激光共聚焦显微镜对人体毛囊形蠕形螨进行形态学观察。方法选用5μg/mL碘化丙啶(propidine iodide,PI)对虫体进行荧光染色,避光染色15min,分别置于荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察;2.5%戊二醛固定虫体标本,梯度酒精和叔丁醇脱水,金喷镀后扫描电镜观察。结果荧光显微镜下碘化丙啶对虫体有很强的结合力,虫体荧光信号均匀展示于细胞表面,充分展现虫体形态,扫描电镜更加清楚、细致地展示人体毛囊型蠕形螨的超微结构,激光共聚焦显微镜将虫体分层扫描图片进行三维重建,真实、完全、直观地展露了虫体。结论三种显微技术均可展示蠕形螨超微形态。PI对虫体有很好的荧光染色作用,使激光扫描共聚焦显微镜能够获得更加精准的超微形态结构,结合三维重建技术有着广泛的应用价值。

约氏疟原虫环子孢子蛋白对TNF-α刺激人肝癌细胞株核转录因子活化的抑制作用

目的观察约氏疟原虫环子孢子蛋白(CSP)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激人肝癌细胞株HepG2核转录因子-κB(NF-κB)活化的影响。方法以约氏疟原虫BY265株子孢子总RNA为模板,用RT-PCR扩增CSP基因的编码区序列并克隆至pFLAG-CMV8载体,构建重组质粒pFLAG-CMV8-CSP。以兔抗CSP多克隆抗体间接免疫荧光法观察pFLAG-CMV8-CSP能否在HepG2细胞中正确表达,及其在细胞中的分布。实验分为3组,A组(阴性对照组)为转染质粒pFLAG-CMV8的HepG2细胞,B组以100ng/ml TNF-α刺激转染质粒pFLAG-CMV8的HepG2细胞,C组以100ng/ml TNF-α刺激转染质粒pFLAG-CMV8-CSP的HepG2细胞。采用双荧光素酶试验和凝胶迁移试验(EMSA)检测NF-κB的核转位及其活化,观察pFLAG-CMV8-CSP对于TNF-α刺激HepG2细胞活化NF-κB是否具有抑制作用。结果质粒pFLAG-CMV8-CSP主要在HepG2细胞胞浆中表达。检测HepG2细胞浆中NF-κB活性,C组萤火虫荧光素酶活性与海肾荧光素酶活性比值为0.228±0.029,明显低于B组(0.571±0.030)和A组(0.438±0.085)(P<0.05)。EMSA结果显示,C组的条带明显弱于B组。结论位于细胞浆中的疟原虫CSP蛋白通过抑制NF-κB核转位,从而抑制TNF-α刺激HepG2细胞活化NF-κB。

胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸-脱氧寡核苷酸抑制疟原虫红前期发育

目的观察胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸-脱氧寡核苷酸(cytidine-phosphate-guanosine oligodeoxynucleotide,CpG ODN)对疟原虫红前期发育的影响。方法通过构建约氏疟原虫BY265株18S rRNA外标准品质粒,与小鼠三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)内标准品共同组成TaqMan RT-PCR分析模型。用不同剂量(0.05×105、0.1×105、0.5×105、1×105和2×105个)约氏疟原虫唾液腺子孢子感染BALB/c小鼠,42h后处死小鼠取其肝脏,制备约氏疟原虫cDNA进行TaqMan RT-PCR反应,以小鼠肝脏虫荷指标检验模型的有效性。将12只BALB/c小鼠随机均分为CpG组、CpG对照组和PBS对照组,CpG组和CpG对照组小鼠分别尾静脉注射脱氧寡核苷酸1826(ODN1826)及其对照(ODN1826 control)各30μg,PBS对照组注射0.01mol/LPBS溶液200μl。24h后各组每鼠感染100个子孢子,于感染后42h处死小鼠取肝脏,制备约氏疟原虫cDNA进行TaqMan RT-PCR,定量分析感染疟原虫24h前CpGODN预处理小鼠肝脏虫荷的变化。结果构建的约氏疟原虫外标准品质粒所插入的BY265株18Sr RNA基因与17XNL株18Sr RNA基因相似性为98%,它与小鼠GAPDH内标准品共同组成的TaqMan RT-PCR分析模型能够正确反映小鼠肝脏虫荷与唾液腺子孢子感染量的正比关系。感染疟原虫24h前给予CpG ODN处理,CpG组小鼠肝脏虫荷为CPG对照组的1/5(0.28/1.33),两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论本实验建立的TaqMan RT-PCR分析模型适用于红前期疟原虫(肝脏)虫荷指标的研究。CpG ODN能显著抑制红前期疟原虫的发育。

约氏疟原虫卵囊黑化与卵囊内游离钙关系的研究

目的 研究大劣按蚊蚊胃的约氏疟原虫卵囊黑化时卵囊内Ca^(2+)的变化,探讨疟原虫感染不易感蚊种时卵囊黑化与囊内Ca^(2+)的相互关系。方法 以荧光染料Fluo-3/Am作卵囊内钙指示剂,应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察不同时期约氏疟原虫卵囊内Ca^(2+)分布、变化以及检测的实验条件。结果 3μmol/L Fluo-3/Am同时加入1μl/ml 25%Pluronic F-127在37℃恒温下,孵育约氏疟原虫卵囊60min即可达到最佳的负载效果。Fluo-3/Am浓度的提高和孵育时间延长只能增加背景染色,若降低孵育浓度和缩短孵育时间则难于达到最佳的负载效果。约氏疟原虫成熟卵囊的囊内Ca^(2+)为(137.15±7.02)nmol/L,完全黑化卵囊为(18.44±1.75)nmol/L,并在囊壁出现明显的钙沉着。 结论 约氏疟原虫卵囊完全黑化时,囊内Ca^(2+)明显减少,并有外排现象。

按蚊血淋巴丝氨酸蛋白酶与疟原虫卵囊黑化关系研究

目的 探讨丝氨酸蛋白酶与疟原虫卵囊黑化的相互关系。 方法 将斯氏按蚊分为吸糖水组、吸正常小白鼠血组、吸约氏疟原虫感染血组和吸硝喹糖水组 ,挤压法收集雌斯氏按蚊血淋巴 ,Bradford法检测血淋巴蛋白浓度 ,继而对血淋巴进行SDS PAGE ,电转移后检测丝氨酸蛋白酶的表达差异。 结果 4组斯氏按蚊丝氨酸蛋白酶Western印迹均呈现两条带 ,分子质量分别约 160和 15 0ku ,与吸糖水组比较 ,吸正常小白鼠血组丝氨酸蛋白酶表达稍高 ,而感染约氏疟原虫后斯氏按蚊血淋巴丝氨酸蛋白酶表达明显增强 ,感染第 6d达高峰 ,之后表达下调 ,而硝喹诱导黑化后丝氨酸蛋白酶表达水平呈逐日下调趋势。 结论 斯氏按蚊血淋巴丝氨酸蛋白酶参与了疟原虫卵囊黑化包被反应。

约氏疟原虫感染大鼠肝脏、腹腔巨噬细胞B7·1、B7·2、TGF-β、IFN-γ基因表达研究

建立约氏疟原虫——斯氏按蚊——哺乳动物模型，在感染约氏疟原虫后2h、12h、24h、48h、72h分别提取大鼠肝脏和腹腔巨噬细胞总RNA，通过RT-PCR定量分析发现在宿主体感染约氏疟原虫后2～72h时间段内，B7．1表达水平没有变化，而B7．2、TGF-β、IFN-γ转录水平显著上调。该现象提示疟原虫子孢子入侵引起宿主体内免疫相关基因B7．1、B7．2、TGF-β、IFN-γ mRNA转录水平发生改变，可能与哺乳动物机体针对疟原虫感染产生的免疫防御、免疫调控密切相关。

二阶导数紫外分光光度法测定粉防己碱凝胶的含量

目的 建立粉防己碱外用凝胶制剂中粉防己碱的含量测定方法。方法 采用二阶导数紫外分光光度法 ,以 2 87nm波长处半振幅 (H)测定制剂中粉防己碱的含量。结果 粉防己碱在 10～ 5 0 μg·ml-1范围内 2 87波长处半振幅 (H)值呈良好线性关系 (r=0 .999) ,平均回收率 10 0 .0 5 % ,RSD 为 0 .132 %。结论 本法简单、准确、灵敏 ,能够排除凝胶辅料的干扰 。

载药脂质体物理化学稳定性的研究进展

脂质体是一种新型药物载体,研制出稳定的脂质体是脂质体作为药物载体走向实用的前提,具有十分重要的意义。本文综述了影响脂质体物理、化学稳定性的主要因素及部分作用机制;并对改进脂质体稳定性的方法,从加入抗氧化物质、应用冰冻干燥和选择合适的磷脂种类等几个方面进行了阐述。结果表明,单纯的将脂质体的稳定性分为化学和物理稳定性是不够的,弄清楚影响脂质体稳定性的机制,找到确切的影响因素和影响程度,建立评价脂质体稳定性的可靠方法和参数,预测制剂的储存时间才是当前研究需要解决的问题所在。

疟原虫感染的免疫应答及效应分子的研究进展

疟原虫生活史复杂,各期的抗原成分多样化,随着恶性疟原虫抗药性不断扩大,目前仍无特效药物和疫苗预防感染。对恶性疟原虫感染引起的免疫应答的深入研究,提供了大量关于免疫在疟原虫感染中的作用信息。并且随着基因组测序计划的完成,有助于认识疟原虫不同期生长发育的分子机制,为疟疾的预防控制提供理论依据。

综合性实验应用于寄生虫学实验教学的探讨

人体寄生虫学实验在培养医学院校学生的综合素质能力方面起重要作用，分析了传统寄生虫实验教学存在的问题，探讨对传统实验内容进行改革，通过综合性实验的开展，优化人体寄生虫学实验的教学内容，激发学生的学习兴趣等，提高人体寄生虫学实验课的教学效果。

大劣按蚊前酚氧化酶基因部分序列的克隆与序列分析

目的 克隆大劣按蚊 (Anophelesdirus)前酚氧化酶 (Prophenoloxidase,PPO)基因部分序列。 方法 根据已报道的多种昆虫 PPO的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊总 RNA为模板进行 RT- PCR扩增 ,目的片段经 TA克隆后测定其核酸序列 ,然后进行序列查询与比对。 结果 大劣按蚊 PPO基因 (Ad PPO)部分序列长 5 98bp,编码 199个氨基酸 ;Ad PPO与冈比亚按蚊 PPO5基因的核酸和氨基酸序列同源性分别达 84 .2 3%和 88.89%。 结论 成功克隆出Ad PPO部分序列 ,其与冈比亚按蚊 PPO基因序列具有很高同源性。

cDNA疫苗预防寄生虫感染的优势与缺陷

近年来DNA疫苗技术的快速发展 ,为研制能有效激活机体的体液免疫和细胞免疫机制的多价疫苗提供了良好的前景。cDNA疫苗的出现为一些重要的寄生虫病 ,如疟疾、利什曼病、弓形虫病、血吸虫病、片形吸虫病的预防提供了可能性。然而接种疫苗的效果更多取决于疫苗的接种方式、剂量、接种途径、疫苗接种宿主的种甚至是株。为了解决上述问题 ,还需要作进一步的研究工作 ,尤其是后续新的cDNA序列的克隆及检测 ,基因组计划 ,疫苗的不同接种方法 。

半胱氨酸蛋白酶在寄生虫与宿主的相互关系中的作用

半胱氨酸蛋白酶是一类蛋白水解酶,在寄生虫与宿主的相互关系上有着极其重要的作 用。该酶除了具有蛋白水解作用外,在宿主体内还具有较强的免疫原性,并在寄生虫对宿主的入 侵、免疫逃避和致病机制中发挥着重要的作用。寄生虫与宿主相互关系的阐明,将为寄生虫病的 免疫诊断和治疗开辟新的思路。

NK细胞胞浆内游离Ca^(2+)浓度和分布的测定

目的 :确定NK细胞胞浆内Ca2 +的浓度及分布的检测方法。方法 :应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察人外周血中NK细胞胞浆内Ca2 +的分布 ,并用Fluo- 3/AM和PluronicF - 12 7对胞浆内游离Ca2 +的浓度进行测定。结果 :最佳负载条件是用 2 μmol/ml的Fluo - 3/AM在 37℃恒温下孵育 6 0分钟 ,同时加入 1μl/ml 2 5 %的PluronicF - 12 7以阻断Ca2 +荧光示踪剂Fluo - 3/AM的外排和房室化。静息状态下NK细胞胞浆内Ca2 +分布不均衡 ,Ca2 +浓度为 91 3± 4 8nM( x±s)。结论 :应用Fluo - 3/AM和PluronicF - 12 7结合CLSM技术是研究NK细胞胞浆内游离Ca2 +的准确 ,简单 ,灵敏的方法之一。