白细胞蛋白酶抑制因子在真皮多能干细胞中的表达

目的研究白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI)在真皮多能干细胞中的表达以及同伤口液刺激的关系。方法采用前期建立的技术分离、纯化并扩增真皮多能干细胞,收集伤后1d伤口液,比较伤口液刺激前后真皮多能干细胞和创伤前后大鼠皮肤组织中SLPI mRNA表达的变化。通过Western blot了解伤口液刺激前后真皮多能干细胞中SLPI蛋白表达的变化。结果分离、纯化的真皮多能干细胞形态较为均一,增殖能力强,RT-PCR和Western blot提示,SLPI在真皮多能干细胞中表达,伤口液刺激后表达增强。同时检测到SLPI在创伤后1d大鼠皮肤组织中表达升高。结论SLPI高表达可能是真皮多能干细胞参与创伤修复的重要途径之一。

通过基因芯片筛选创伤修复差异表达基因

目的通过基因芯片筛选同真皮间充质干细胞相关的创伤修复差异表达基因。方法利用贴壁生长的特性分离大鼠真皮间充质干细胞,用Tripure提取伤口液刺激前后dMSCs和创伤前后大鼠皮肤组织中总RNA。PCR扩增已构建抑制消减杂交差异表达文库中485个克隆的插入片断,送北京博奥制作基因芯片。提取的RNA反转录后分别同芯片杂交,找出在细胞水平和组织水平同时高表达的克隆。将这些克隆测序,进行生物信息学分析。结果分离的大鼠真皮间充质干细胞呈纺锤形,在体外显示多向分化潜能。抽提伤口液刺激前后dMSCs和创伤前后大鼠皮肤组织中总RNA,反转录后和基因芯片杂交,发现可能同创伤愈合相关的13条基因,其中热休克蛋白70(HSP70),基质金属蛋白酶3(MMP3),白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)等可能在创伤愈合中有重要意义。结论抑制消减杂交和基因芯片结合是筛选差异表达基因的一种有效方法。伤口液刺激前后dMSCs中差异表达基因的发现能为从基因水平探讨dMSCs参与创伤愈合的分子机制提供新的研究靶点。

白细胞蛋白酶抑制因子对真皮间充质干细胞增殖的影响

目的:研究白细胞蛋白酶抑制因子(SLPI)在真皮间充质干细胞(dMSCs)中的表达以及促dMSCs增殖的作用。方法:采用前期建立的技术分离、纯化并扩增真皮多能干细胞,在大鼠背部置入聚乙烯酒精海绵收集伤后1天伤口液,用Tripure细胞裂解液提取伤口液刺激前后dMSCs和创伤前后大鼠皮肤组织中总RNA。通过RT-PCR检测伤口液刺激前后dMSCs和创伤前后大鼠皮肤组织中SLPImRNA的表达。用M-PER抽提细胞蛋白,了解伤口液刺激前后dMSCs中SLPI蛋白表达的变化。无血清IMDM培养液培养细胞48h,加入不同浓度的SLPI因子刺激dMSCs,通过[H3]Thymidine掺入实验研究SLPI对真皮间充干细胞的增殖作用。结果:分离的大鼠dMSCs呈梭形,在体外显示多向分化潜能。RT-PCR和Westernblot提示SLPI在dMSCs中表达,伤口液刺激后表达增强。通过[H3]Thymidine掺入实验发现加入SLPI因子后,细胞增殖明显增强。结论:SLPI在dMSCs中表达,能够促进dMSCs的增殖,通过高表达SLPI可能是dMSCs参与创伤修复的重要途径之一。