血管平滑肌肌浆网膜RyR2调节血管反应性的研究进展

血管平滑肌细胞肌浆网RyR2介导内钙的释放是调节血管平滑肌张力及其对血管活性物质反应性的重要环节。不同的蛋白分子(如FKBP12.6与sorcin)通过与雷诺定敏感受体2(ryanodinereceptor 2,RyR2)结合形成复合子构成RyR2的不同激活方式,在血管张力调节中具有截然不同的作用;与失血性休克病生过程密切相关的组织缺血缺氧、ATP缺乏、氧自由基等均可诱导FKBP12.6及/或sorcin与RyR2的解离,通过调节肌浆网RyR2介导的内钙释放并偶联不同的胞内信号通路,参与外周动脉血管对血管活性物质反应性的降低。

γ-干扰素对过氧化氢诱导血管内皮氧化应激损伤的作用研究

目的观察γ-干扰素（IFN-γ）对血管内皮氧化应激损伤的保护作用，并评价26S蛋白酶体在其中的作用。方法建立由过氧化氢（H2O2）诱导的血管内皮氧化应激损伤细胞及离体器官模型，以细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）及丙二醛（MDA）浓度评价血管内皮细胞（VEC）的损伤程度，以内皮依赖性血管松弛反应评价离体器官水平VEC的损伤程度。结果H2O2。可呈剂量依赖性和时间依赖性引起VEC损伤，表现为细胞培养上清液中LDH及MDA浓度增加（P〈0．05或P〈0．01），由乙酰胆碱（Ach）诱导的血管内皮依赖性松弛反应明显降低，表现为10^-5mol／LAch引起血管最大舒张反应由（95．82±9．25）％降至（12．61±2．96）％（P〈0．01）；采用20ug／LIFN-γ预孵育VEC48h后可明显降低由H2O2引起的LDH及MDA生成（P均〈0．05），改善内皮依赖性血管松弛反应，由Ach诱导的血管最大舒张反应增至（72．68±18．82）％（P〈0．01）；26S蛋白酶体抑制剂lactacystin可取消由IFN-γ诱导的内皮抗氧化保护作用。结论IFN-γ可诱导血管内皮对氧化应激的保护，其机制与26S蛋白酶体有关。

脂多糖致脓毒血症大鼠血管内皮细胞凋亡的实验观察

目的:观察细菌脂多糖(LPS)致脓毒血症大鼠血管内皮细胞(VEC)凋亡的器官靶向性及时相性特征。方法:70只SD大鼠经尾静脉一次性注射LPS(10mg/kg)复制脓毒血症模型后平分为30min组、1h组、2h组、4h组、8h组、16h组和24h组。另选10只SD大鼠作为正常对照组。眼眶采血,ELISA检测各组血清中血管性血友病因子(vWF)及炎性介质白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化特征。断头处死对照组、1h组、4h组和8h组大鼠,取肺、肝、心、脑、肾制作组织切片,采用地高辛标记凋亡细胞,免疫组化染色检测上述各组大鼠各脏器VEC凋亡。结果:2h-24h组TNF-α浓度均较对照组升高,4h组达峰值(P<0.01);IL-1β在2h组和4h组显著高于对照组,2h组为峰值(P<0.01),8h-24h组与对照组无显著差异(P>0.05)。4h-8h组大鼠血清vWF浓度较对照组升高,4h组达峰值(P<0.05),其它时相组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。LPS致脓毒血症大鼠肺、肝、心、脑、肾存在不同程度VEC凋亡现象,其中肺部受累较早。结论:LPS(10mg/ml)所致脓毒血症大鼠重要脏器可出现VEC凋亡,以肺部较早。

光敏剂叶酸-卟啉对宫颈癌HeLa细胞的靶向性和光动力活性

目的评价光敏剂卟啉Ⅰ对宫颈癌HeLa细胞的肿瘤靶向性和光动力活性。方法采用荧光测定法和激光共聚焦扫描显微镜观察宫颈癌HeLa细胞对卟啉Ⅰ的吞噬作用;采用MTT试验观察卟啉Ⅰ在有或无光照条件下对人正常肝L-02细胞、肺腺癌A549细胞和宫颈癌HeLa细胞的生长抑制作用。结果孵育24 h后HeLa细胞对卟啉Ⅰ的吞噬量是前体卟啉A的35倍,且这种吞噬作用可被过量叶酸的加入明显抑制;卟啉Ⅰ对HeLa细胞呈现出很低的暗毒性和明显的光毒性,光照下在卟啉Ⅰ浓度为5.0×10-5mol/L时,HeLa细胞的生长抑制率达到84.6%;并且这种光毒性具有明显的叶酸受体阳性细胞选择性,在相同条件下,对正常L-02肝细胞和叶酸受体阴性A549细胞无光毒性。结论卟啉结构中引入叶酸单体后,由于叶酸受体的介导作用明显改善了该光敏剂的肿瘤靶向性和光动力活性。

失血性休克不同时相sorcin转位及其与血管反应性变化的相关性分析

目的:观察失血性休克后不同时相大鼠肠系膜动脉平滑肌sorcin蛋白表达及其对去甲肾上腺素(NE)的反应性,初步探讨sorcin是否参与失血性休克血管反应性的调节。方法:36只SD大鼠,12只用作非手术对照组,其余采用经股动脉放血法制成失血性休克(动脉压40 mmHg)模型。分别将成模大鼠再分为休克早期(30min)组及晚期(2h)组;各组开腹分离肠系膜动脉,采用离体器官张力测定技术检测肠系膜动脉对NE的反应性;采用Western Blotting(WB)检测肠系膜动脉平滑肌sorcin的表达及其分布;采用免疫共沉淀联合WB检测sorcin-肌浆网2型雷诺定受体(RyR2)表达,并分析休克大鼠sorcin水平与肠系膜动脉对NE反应的相关性。结果:失血性休克早期组大鼠肠系膜动脉对NE的收缩反应较对照组明显增强(P<0.05),而晚期组对NE较对照组明显降低(P<0.05)。早期组和晚期组大鼠肠系膜动脉血管平滑肌sorcin总蛋白表达无显著差异(P>0.05),但发生了明显转位现象,即早期组sorcin在胞浆及质膜内表达无明显差异(P>0.05),但晚期组sorcin在胞浆内的表达明显增强,而在质膜的表达显著降低(均P<0.05);免疫共沉淀发现,早期组大鼠肠系膜动脉平滑肌sorcin-RyR2复合子表达与对照组无显著性差异(P>0.05),而晚期组较对照组明显减少(P<0.05);相关性分析显示,晚期组sorcin由质膜向胞浆移位与其血管反应性呈显著负相关(P<0.01)。结论:失血性休克后2h,大鼠肠系膜动脉平滑肌sorcin从RyR2解离,导致sorcin从肌浆网向胞浆转位,至少部分参与肠系膜动脉对NE低反应性的形成。

cdk5在LPS诱导培养实验大鼠腹主动脉内皮细胞凋亡中的可能作用

目的:探讨周期素依赖性蛋白激酶5(cdk5)在脂多糖(LPS)诱导培养血管内皮细胞(VEC)凋亡中的可能作用。方法:采用原代培养的大鼠腹主动脉EC,经LPS刺激培养不同时间后,ELISA测定cdk5和半氮酶酸蛋白酶-3(caspase-3)活性,同时观察cdk5特异性抑制Roscvitine(Ros)对caspase-3活性的影响;WesternBlot-ting检测cdk5蛋白表达。结果:培养的大鼠腹主动脉EC经LPS(10μg/ml)刺激培养4～24h,其caspase-3活性升高,cdk5活性也明显增强(P<0.05或P<0.01),Ros(25～50μM)可显著抑制LPS刺激培养后VECcaspase-3活性(P<0.05)。培养的EC胞浆及胞核均有cdk5蛋白表达,LPS刺激培养15～30min,cdk5由胞浆向胞核转位,1～8h胞浆及胞核cdk5表达均显著增强(P<0.05或P<0.01)。结论:cdk5可能参与LPS致VEC凋亡。