以科研优势带动研究型教学的《生物技术制药》教学改革

当前,我国的生物技术制药领域具有自主创新能力的复合型专业人才紧缺,高等教育要以市场需求为导向培养研究型学生.传统教学形式已不能满足研究型人才的培养需求,笔者所在单位借助国家免疫生物制品工程技术研究中心的科研平台,在《生物技术制药》课程实施教学及考核两大环节的教学改革,获得了一些教学心得,力争能开辟出一条适合现代生物技术制药课程的研究型教学改革之路.

基于自主创新的产学研一体化生物技术制药人才培养实践

实施基于自主创新的产学研一体化药学人才培养实践,建立了基于自主创新与"产学研"一体化的创新教育新体系、生物技术制药学研究型教学学科平台及课程体系,显著提升了本学科教育水平.

肿瘤相关中性粒细胞在胃癌中的分布、表型及其免疫抑制功能研究

目的分析胃癌患者外周血中及不同类型胃组织中的中性粒细胞的分布情况,并研究其表型,探讨胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞对CD3+T细胞功能的影响。方法采用流式细胞术检测并分析42例胃癌患者的胃癌组织、癌旁组织、正常胃组织及外周血中CD66b+中性粒细胞的比例及表型,同时采用免疫组织化学染色技术针对中性粒细胞表面标志CD15原位分析不同类型胃组织石蜡切片中中性粒细胞的浸润情况,最后用胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞与CD3+T细胞共培养,检测其对T细胞增殖能力的影响。结果胃癌患者外周血中性粒细胞比例明显高于健康成人(P<0.01),胃癌组织中的中性粒细胞的频率也高于癌旁组织(P<0.05)和正常胃组织(P<0.05);在胃癌患者外周血及不同类型胃组织浸润的中性粒细胞可能主要为成熟的分叶核粒细胞;相较于正常胃组织,胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞能显著抑制CD3+T细胞增殖(P<0.01)。结论中性粒细胞在胃癌微环境中浸润增高,其可能通过抑制CD3+T细胞增殖而促进胃癌进展。

幽门螺杆菌感染的慢性胃炎与凋亡基因的相关性研究

目的探讨幽门螺杆菌(HP)感染相关胃炎程度与胃黏膜细胞凋亡基因表达的相关性。方法将2013年11～12月大坪医院消化内镜中心45例慢性胃炎患者纳入研究,快速尿素酶实验和13 C-呼气实验检测HP感染情况,病理分析HP感染部位胃炎严重程度,实时定量PCR(qRT-PCR)法检测HP感染部位胃黏膜组织和无HP感染的胃黏膜组织中凋亡相关基因Bax、Bak、Bcl-2的表达,Person相关分析HP感染的慢性胃炎程度与凋亡基因表达的相关性。结果 45例患者13 C-呼气实验和胃窦黏膜快速尿素酶实验均阳性,提示HP感染。病理结果显示45例(100%)患者均为慢性胃窦胃炎,其中28例(62.2%)为轻度,16例(35.6%)为中度,1例(2.0%)为重度;9例(20.0%)肠化生,5例(11.1%)低级别上皮内瘤变。45例患者胃体黏膜尿素酶实验阴性,提示无HP感染,其中6例胃体组织显示轻度慢性炎症(13.3%),39例无炎症(86.7%);无肠化生及上皮内瘤变。qRT-PCR结果显示HP感染胃黏膜中Bax mRNA的表达明显高于HP未感染胃黏膜患者(P<0.01)且与胃炎程度呈明显正相关(P<0.01),而Bak和Bcl-2的表达在两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HP感染的慢性胃炎程度与胃黏膜细胞凋亡呈正相关,提示HP感染可能导致胃上皮细胞中Bax基因的表达从而促进细胞凋亡。

幽门螺杆菌黏附素HpaA重组蛋白的表达、纯化及晶体生长

目的构建幽门螺杆菌黏附素Hpa A的原核表达载体,并用纯化的重组Hpa A蛋白进行晶体培养,为其三维结构解析、基于结构的Hpa A抗原表位分析和黏附拮抗剂研究奠定基础。方法用生物信息学方法分析Hpa A蛋白序列二级结构并预测跨膜区,利用PCR技术扩增幽门螺杆菌标准株NCTC 26695编码Hpa A蛋白的hp0797基因非跨膜区片段,构建重组质粒并p ET22b(+)-r Hpa A,在大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达重组蛋白,经Ni离子亲和层析、阴离子交换层析、凝胶过滤层析纯化蛋白并分析其聚集状态。用Hampton Research结晶试剂盒搜索结晶条件,并系统优化,在上海同步辐射光源进行衍射实验。结果成功构建了重组质粒p ET22b(+)-r Hpa A,并在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性表达;重组Hpa A蛋白在溶液中以二聚体形式存在,SDS-PAGE分析单体相对分子质量约24 000,HPLC分析纯度达95%;培养出晶形较好的重组Hpa A蛋白单晶,大小约70μm×30μm×20μm,衍射分辨率2.03魡。结论利用经典的蛋白质表达、纯化技术和晶体培养技术,获得了衍射能力较强的重组Hpa A蛋白单晶,为其三维结构解析和基于结构的幽门螺杆菌疫苗研究提供了重要基础。

鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S1969的克隆表达及免疫保护机制初步研究

目的制备鲍曼不动杆菌(Ab)A1S_1969重组蛋白,利用小鼠全身脓毒血症感染致死模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,探讨可能的免疫保护机制,为筛选Ab疫苗有效的保护性抗原奠定基础。方法基于反向疫苗学技术筛选出Ab外膜蛋白A1S_1969,利用p GEX-6P-2质粒构建GST融合表达载体,重组表达的A1S_1969蛋白经亲和层析高效纯化后与铝佐剂吸附制备而成重组A1S_1969免疫原;采用Balb/c小鼠全身感染模型评价A1S_1969重组蛋白的免疫保护效果,通过ELISA检测免疫小鼠Ig G抗体滴度和Ig G抗体亚型。制备A1S_1969重组蛋白抗血清进行体外调理吞噬杀菌实验。结果成功克隆、表达并纯化A1S_1969重组蛋白,纯度>90%。动物免疫保护结果显示A1S_1969重组蛋白组小鼠存活率为55.6%,对照组小鼠存活率为20.0%(P<0.05);末次免疫7 d后小鼠体内总Ig G抗体滴度为1∶64 000,以Ig G1亚型为主;体外调理吞噬杀菌实验结果显示A1S_1969特异性血清抗体可以增强中性粒细胞对Ab的杀菌作用,实验组杀菌率可达55%,对照组无杀菌活性。结论 A1S_1969重组蛋白可显著提高全身脓毒血症感染致死模型小鼠的存活率,具有良好的免疫保护效果。

超级细菌疫苗研究进展

＂超级细菌＂（superbugs）是指对抗生素有超强耐药性细菌的统称。随着抗生素滥用问题日益严重,耐药细菌不断出现并呈全球化流行趋势,＂超级细菌＂的家族也越来越庞大,已成为引起临床感染的严重病原菌,可能面临无药可治的境地。2014年世界卫生组织发布的《抗菌素耐药：全球监测报告》显示：每年美国因感染超级耐药细菌而死亡的人数高达6.3万人,

药学专业实习生的毕业课题设计与科研能力培养

毕业课题的设计与实践是药学专业本科生教学计划中的重要环节，也是训练和提升其科研能力的良好机会。基于药学专业本科生的实习带教工作经验，分别从毕业课题选取、实验方案设计与实施、数据采集与整理、论文撰写与汇报四方面，探讨如何培养学生独立思考和解决实际问题能力。通过毕业课题的设计与实践，可有效提升学生综合素质和科研能力，为其以后从事科研工作或胜任药物研发岗位奠定良好基础。

从临床对检验医师的要求谈学校职业素养培养方式

"大检验"时代的到来对检验人员提出了更高的要求,为培养适合行业发展的新型检验人才需要学校和医院的配合,让职业素养的培育贯穿于整个大学学习过程中,根据不同阶段特点制订不同目标,并通过多种方式进行培养并考核,以期提高实习生质量,为各岗位输送合格人才。

幽门螺杆菌感染小鼠胃黏膜CD8 T细胞的免疫表型及应答特征

目的探究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H. pylori)感染后小鼠胃黏膜CD8 T细胞的表型特征及应答规律。方法建立H. pylori感染的小鼠模型,同时设立对照组。流式细胞仪检测胃黏膜CD8 T细胞的频率、表型、趋化因子受体及细胞因子。Real-time PCR检测胃黏膜H.pylori的定植量。结果实验组小鼠胃黏膜CD8 T细胞的频率显著高于对照组(P<0.01)。胃黏膜CD8 T细胞高表达CD44、CD103、CD69,低表达CD62L、CCR7。与对照组相比,感染组胃黏膜CD8 T细胞上调表达趋化因子受体CCR3、CCR4、CCR5、CXCR5。非特异和特异刺激CD8 T细胞均分泌细胞因子IFN-γ。结论 H.pylori感染后,小鼠胃黏膜CD8 T细胞是一群通过趋化因子受体上调从而募集到胃黏膜的Trm细胞(常驻记忆型T细胞),主要通过分泌细胞因子IFN-γ进行免疫应答。

幽门螺杆菌感染过程中特异性抗体消长规律的研究

目的研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.py）感染Balb/c小鼠后多种抗原特异性抗体应答的消长特征,评估可用于血清学分析的抗原种类与检测窗口期。方法 70只Balb/c小鼠分为感染组和对照组,ELISA法检测血清中CagA、UreB、HpaA、KatA特异性IgG水平,Real-time PCR法检测胃组织H.py定植数量。结果小鼠感染组胃组织H.py定植数量显著高于对照组（P〈0.01）,且感染组小鼠胃组织中H.py定植数量较为恒定,拷贝数维持在106左右。在H.py感染的16周内,4种抗原特异性IgG水平存在不同的消长规律和阳性应答窗口期,其中CagA抗体阳性窗口期为4~12周,UreB抗体阳性窗口期为6~9周,HpaA抗体阳性窗口期为2~16周,KatA抗体阳性窗口期为5~6周和11~12周。结论由于不同抗原特异性IgG应答存在不同消长规律,可能影响H.py感染的血清学检测的准确性。

淋巴细胞胞浆蛋白1在免疫系统和肿瘤中的研究进展

细胞通过细胞骨架来运动、极化、分化和维持多细胞组织形态。而肌动蛋白是构成细胞骨架的基石,它可以被超过100种的肌动蛋白结合蛋白（Actin binding proteins,ABPs）所不断地重构。

肥大细胞在肿瘤免疫中的研究进展

肥大细胞(MC)是一种充满颗粒的免疫细胞,主要位于与外界接触的黏膜上皮下。MC主要被熟知的生物功能是参与过敏反应,但MC也参与很多其他重要的生理和病理过程。在一些人类肿瘤或动物肿瘤模型中也发现MC的浸润,然而它在肿瘤微环境中的功能还存在争议。本文综述了MC的基本生物学特征,横向比较了MC在多种肿瘤进展中发挥的不同功能,以及MC重塑肿瘤微环境的机制,以期为以MC为靶点的肿瘤免疫治疗提供新策略。

鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_0115的克隆、表达及免疫保护性研究

目的构建鲍曼不动杆菌外膜蛋白A1S_0115胞外区(A1S_0115A)与GST标签融合表达的原核表达载体,在大肠杆菌XL-1 blue中表达、纯化A1S_0115A蛋白后,进行抗原免疫保护性的初步研究。方法利用生物信息学技术分析A1S_0115蛋白结构,确定蛋白的胞外区片段,PCR扩增该基因片段后,构建重组表达载体p GEX-6P-2-A1S_0115A,将重组载体转化大肠杆菌XL-1blue,IPTG诱导表达GST-A1S_0115A融合蛋白,采用GST亲和层析填料纯化并酶切获得A1S_0115A蛋白。利用已建立的Balb/c小鼠鲍曼不动杆菌全身感染模型对该蛋白抗原的免疫保护性进行初步评价。结果重组质粒经过Bam HⅠ和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达及酶切后蛋白的SDS-PAGE分析表明,A1S_0115A蛋白胞外区相对分子质量大小约50 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期设想符合,目的蛋白纯度在95%以上。用A1S_0115A蛋白对小鼠进行2轮次免疫保护性实验及其抗体的被动免疫实验,免疫攻毒后小鼠的保护率分别为50%和55%,被动免疫保护率为45%和50%。结论成功构建重组表达载体p GEX-6P-2-A1S_0115A,利用大肠杆菌可溶表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得了高纯度的A1S_0115A蛋白。动物免疫攻毒保护实验结果表明A1S_0115A蛋白具有较好的免疫保护性,为研制新型有效的鲍曼不动杆菌疫苗奠定实验基础。

MicroRNA-30a在胃癌组织的表达分析及其靶基因成纤维活化蛋白α的鉴定

目的分析microRNA-30a(miR-30a)在胃癌中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法选取29例胃癌患者的肿瘤组织和癌旁组织,利用qRT-PCR检测miR-30a的表达。通过miRNA靶基因预测数据库Target Scan预测miR-30a的靶基因。构建含有miR-30a结合位点的3'UTR片段的荧光素酶载体(p MIR-FAPα),通过荧光素酶报告实验对预测靶基因进行检测。利用Western blot和qRT-PCR对预测靶基因成纤维活化蛋白α(fibroblast activation proteinα,FAPα)的表达进行检测。结果 miR-30a在胃癌组织样本中的表达明显下调,通过生物信息学预测(Target Scan)和荧光素酶实验表明miR-30a mimic可与FAPα基因结合,qRT-PCR和Western blot结果表明miR-30a mimic可抑制FAPαmRNA和蛋白质水平的表达。结论 miR-30a在人胃癌组织样本中表达下调,FAPα是其靶基因。

基于自主创新的生物技术制药产学研教学案例库构建及应用

产学研合作的教育模式在生物技术制药领域仍然存在着重理论轻成果转化、校企合作的优势未切实落到教学上、原始创新不足等问题。通过产学研平台构建涵盖生物技术制药的学习-研究-生产全环节综合知识的案例库，将有助于教师利用校企合作的优势资源．更有效地教育学生如何将理论知识的精华转化为应用产品。而基于自主创新的产学研案例教学．将更有效地启发学生的创新意识。国家免疫生物制品工程技术研究中心立足药学专业创新型人才的培养目标，精心筛选教学案例；灵活应用多种教学方式，注重学生信息筛选能力、批判式思维能力、凝练科学问题的能力、实践应用能力及职业认知能力的培养；同时涉及职业人文教育及法规案例的教学，应用效果明显。

基于“卓越工程师教育培养计划”的《生物技术制药》教学改革

《生物技术制药》是药学专业的重要课程，其课程设置和教学方式存在很多不足。为了培养复合型生物技术人才，依托本单位“国家免疫生物制品工程技术研究中心”的平台优势，基于“卓越工程师教育培养计划”的培养目标，进行课程教学改革。通过优化课程标准和教学设计,突出“生物技术制药”与“工程学”有机结合，强化实践教学环节，加强师资队伍建设，结合翻转课堂、PBL教学等；提高学生创新思维和科研应用能力。

金黄色葡萄球菌肠毒素B在不同动物模型中的应答及治疗策略的研究新进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的感染引起的多种临床症状均与其分泌的金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)密切相关,临床对SEB毒素中毒尚无特效疗法。本文对SEB在不同动物模型中的应答及治疗策略的研究新进展作一综述。

医学本科教学中构建创新教育体系

通过“产学研一体化”教学平台的实践，分析创新教育管理体制、创新教育资源、创新教育模式及创新教育评价标准，探索创新教育体系在医学本科教学中的实践与优化。

幽门螺杆菌黏附素A的原核表达、纯化及其结晶条件搜索

目的原核表达、纯化幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，11．pylori）黏附素A（麒pyloriadhesinA，HpaA），并初步搜索其结晶条件。方法采用TMHMM和SignalP．4．1软件预测HpaA蛋白中的跨膜序列和信号肽序列，根据GenBank中登录的编码HpaA的基因序列hp0797去掉预测出的信号肽序列后设计引物，以H．pylori标准株26695基因组为模板，PCR扩增编码HpaA的基因序列，插入原核表达载体pET-22b，构建重组表达质粒pET-22b-HpaA，转化大肠埃希菌（Ecoil）BL21（DE3），IPTG25℃诱导表达，表达的重组蛋白经亲和层析、阴离子交换层析和分子筛层析进行纯化。将纯化产物浓缩至10mg／ml，采用结晶搜索试剂盒，通过悬滴汽相扩散法搜索HpaA的结晶条件，并在此基础上配制条件进行优化。结果去掉序列中编码信号肽区域或跨膜结构域的密码子，选择HpaA的36-260位氨基酸进行克隆，构建的重组原核表达质粒pET．22b-HpaA经双酶切及测序鉴定，证明构建正确；表达的重组蛋白HpaA相对分子质量约27000，表达量约占菌体总蛋白的10％以上，主要以可溶形式表达，纯化后的纯度可达99％以上。在多种条件下，均有结晶生长，晶体多为薄片状、针状或簇状，在20％PEG3350，0．1mol／LHEPES（pH7．0）条件下，晶体形状类似长方体，外形有所改善。结论成功表达了HpaA蛋白，初步掌握其结晶条件，为下一步晶体结构学的研究及其在H．pylori感染与致病中的作用机制奠定了基础。