HBV体外感染人胎肝细胞的鉴定方法研究

目的 通过HBV体外感染 2 2周龄原代培养人胎肝细胞 ,比较常用检测指标的敏感性和特异性。方法 利用HBV阳性血清感染体外培养的原代人胎肝细胞。应用ELISA法检测培养上清中的HBsAg和HBeAg ,免疫组化法检测细胞核中的HBcAg ,荧光定量PCR法检测上清和细胞中HBVDNA ,巢式PCR法检测细胞中cccDNA。结果 胎肝细胞核中的HBcAg于感染后第 2天出现阳性 ,培养上清和细胞中HBVDNA定量自第 4天起检出 ,上清中HBsAg和HBeAg于第 5～ 6天出现阳性 ;细胞中HBVcccDNA自第 8～ 9天出现阳性。结论 HBV在原代培养人 2 2周龄的胎肝细胞中能够稳定复制和表达 ,各种检测指标的灵敏性和特异性不一 ,免疫组化法检测细胞核中的HBcAg敏感性好 ,特异性可。

浅议中美研究生教育之现状

本文就中美两国的研究生教育作一简单的对比分析,旨在为我国的研究生教育改革提供一些借鉴。

从福尔马林固定-石蜡包埋淋巴组织抽提RNA的影响因素研究

目的 探讨从福尔马林固定 石蜡包埋 (FFPE)淋巴组织提取RNA的影响因素。方法 以新鲜淋巴组织为对照 ,改变福尔马林固定时间及组织裂解方法 ,采用 2 2对TCRVβCDR3区域特异性引物 ,观察从FFPE淋巴组织提取RNA的产量及其作为RT PCR模板的扩增效率。结果 蛋白酶K法提取效率显著高于Trizol法 ,所提取RNA的可扩增性随福尔马林固定时间的延长而下降 ,TE 70℃孵育 60min去修饰处理可显著提高所提RNA的可扩增性。结论 从FFPE组织提取RNA完全可行 ,尽量短的固定时间、蛋白酶K消化及去修饰处理是必要的。

HBV在宫内传播途径的分子进化特点研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)的宫内传播的分子进化特点。方法选择有乙型肝炎母子无症状携带者两对母子的血清样本分离HBV准种病毒株,进行PCR-克隆-测序后,构建遗传进化树及拓扑结构比较,计算每对母子准种种群内及种群间的进化距离。结果 2个进化树包括2种类型,第1种类型,大部分母亲株聚集为一枝,但新生儿株与小部分母亲株聚集在另一枝,母亲株为新生儿株的起源。第2种类型,母亲株与新生儿株未形成总的单源群,也没形成各自的单源群,有1株新生儿的病毒株为大部分母子序列的起源。结论两组病例的传播途径分别符合"胎盘泄漏"和"细胞途径"特点。

HCV核心区增强和抑制性多肽对小鼠CTL相互作用研究

目的 建立细胞毒性T细胞 (cytotoxicTcell ,CTL)检测体系 ,探讨丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus ,HCV)感染者体内CTL功能缺陷的原因。方法 选择HCV核心区多肽中对CTL有抑制作用和增强作用的多肽各 2条 ,交叉组合后共同皮下注射免疫BALB/c小鼠 ,用乳酸脱氢酶释放实验检测小鼠脾细胞CTL活性。结果 用LDH检测HCV核心区多肽免疫BALB/c小鼠的CTL活性 ,CTL活性可被CPA10 ( 5～ 2 3位氨基酸 )增强及被CPA9( 3 9～ 74位氨基酸 )抑制。CPB2 +CPB8、CPB6+CPB8组中效靶比 10∶1,2 0∶1的CTL活性显著高于对照组 ,CPB2 +CPB7、CPB6+CPB7组与对照组无明显差异 ,双因素方差分析显示HCV核心区抑制性多肽和增强性多肽有交互作用。结论 LDH可稳定检测BALB/c小鼠的CTL活性 ,HCV核心区抑制性和增强性多肽有相互作用。

重型病毒性肝炎并发症与预后的关系

目的 探讨重型病毒性肝炎患者并发症的出现与其预后的关系。方法 分析 5 73例重型病毒性肝炎患者各种并发症的发生率 ,比较出现不同类型并发症的重型病毒性肝炎患者的存活率。结果 77 8%重型病毒性肝炎患者存在并发症 ,其中肝性脑病、感染、脑水肿、消化道出血、肝肾综合征的发生率分别为 5 0 4%、3 4 6%、3 0 2 %、2 2 2 %和 2 1 8%;无并发症的重型病毒性肝炎患者存活率为 78 7%,非常显著高于有并发症者 ( 13 7%) ,P <0 0 1;重型病毒性肝炎患者并发症越多 ,其存活率也越低 ;12 5例出现肝肾综合征的患者全部死亡 ,单纯肝性脑病、单纯感染和单纯消化道出血者的存活率分别为 63 9%、68 4%和 46 2 %。结论 绝大多数重型病毒性肝炎患者存在并发症 ,并发症的出现是重型病毒性肝炎患者病情加重。

慢性乙型肝炎患者HBV DNA YMDD变异的检测及意义

目的 了解慢性乙型肝炎患者HBVDNAYMDD变异的存在情况及意义。方法 检测 90例慢性乙型肝炎患者HBVDNAYMDD变异 ,对发生HBVDNAYMDD变异的 2 0例患者的肝功能、HBeAg、HBVDNA及HBVDNAYMDD变异情况进行分析。结果 90例慢性乙型肝炎患者中检出HBVDNAYMDD变异共 2 0例 (阳性率 12 0 0 % ) ,已服用拉米夫定者 3 6例 ,检出YMDD变异 9例 (2 5 0 0 % ) ,未服用拉米夫定患者 5 4例 ,检出YMDD变异 11例 (阳性率 2 0 3 7% )。在 2 0例YMDD变异患者中有 5例HBeAg阴性 ;2 0例YMDD变异患者HBVDNA在 3 0 2 1× 10 5～ 2 3 69× 10 8(5 41× 10 7± 7 75× 10 7)copies/ml ,ALT 3 4～ 12 16(2 88 2 0± 3 3 8 0 7)IU/L ,TB 8 9～ 3 2 6 7(4 8 74± 72 2 0 ) μmol/L。 结论 YMDD变异株可在拉米夫定治疗过程中出现 ,也可天然存在 ,YMDD变异可与前C基因变异同时存在 ,提示HBV的变异常常是多位点的 ;YMDD变异株HBV复制处于中～高度水平 ;YMDD变异株的致病性轻重不等 ,肝功能可为正常 ,也可是轻度～高度等不同程度异常。

拉米夫定疗程中慢性乙型肝炎患者血清IL-12水平和Th平衡变化及其意义

目的 探讨慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗前后血清IL -12水平和辅助性T细胞 (Th)平衡变化及其临床意义。方法 根据患者对拉米夫定治疗的应答情况分组进行回顾性研究 ,利用双抗体夹心ELISA法检测治疗前后不同时相点血清IL -12、γ干扰素 (IFHγ)、IL -4水平 ,以与正常对照校对后的IFNγ/IL -4作为Th平衡指标 ,取健康献血员作对照。结果 治疗前血清IL -l2水平低于健康对照 ,Th平衡表现为Th2优势应答 ;治疗后HBeAg阳性完全应答组在治疗的第 3个月有明显的血清IL -12水平高峰 ,Th平衡得以恢复并保持Thl优势应答 ,HBeAg阳性部分应答组和HBeAg阴性组Th平衡仍以Th2 为优势应答。结论 拉米夫定治疗应答和血清IL -12水平及Th平衡的恢复程度有关 ,治疗后慢性乙型肝炎患者抗HBV免疫有所恢复 ,血清lL -l2水平可作为早期预测拉米夫定疗效的免疫学指标 ,治疗后Th平衡的恢复是完全应答实现的保证。

醋氨酚对犬的多器官损伤及原因分析

目的 了解醋氨酚对犬的多器官毒性作用及原因。方法 选用普通杂种犬 ,静脉注射醋氨酚 ,首次剂量 10 0mg kg ,之后每隔 1h 5 0mg kg ,持续 11h ,做血液生理生化和心、肺、肝、肾等组织病理学检测。分为 :对照组、空腹 12h组和空腹 2 4h组。结果 首次注药后 2 4h左右空腹 2 4h组全部死亡 ,72h左右空腹 12h组有 2条死亡。血液生理生化白细胞、谷丙转氨酶 (ALT)、谷草转氨酶 (AST)、乳酸脱氢酶、总胆红素、尿素氮、肌酐升高 ,AST ALT >1,红细胞下降。组织病理心、肺、肝、肾、胃、脾均有淤血 ,左右心室皆见心肌断裂和间质组织水肿。结论 醋氨酚对犬可造成多器官损伤 。

丁型肝炎病人肝组织HDAg与bcl-2、bax、bak表达关系

目的 探讨bcl 2、bax、bak在丁型肝炎发病机制中的作用。方法 采用免疫组化单、双标记染色技术等 ,检测77例各型丁肝病人肝组织中HDAg、bcl 2、bax和bak表达。以HDV阴性的 67例乙型肝炎作对照。结果 bcl 2、bax和bak均以肝细胞浆表达为主。HDAg以肝细胞核表达为主。HDAg与bax和bak表达及分布有相关性 ,四成分在各型肝炎中的表达强度有显著性差别 (P <0 .0 5 )。结论 HDAg、bax、bak表达强度和阳性细胞分布均与肝组织炎症活动及病理损害程度相关 ,HDV感染可诱导肝细胞表达bax和bak ,增强肝细胞凋亡 。

肝功能异常,未必是肝炎

肝炎患者通常出现肝功能异常，但肝功能异常并不意味着肝炎，如果盲目进行保肝治疗，不仅延误病情，还会因滥用药物而造成药物性肝炎等肝损害，保肝不成反伤肝。

进行性肌营养不良怎么办

我家宝宝3岁时曾因腹痛就诊,检查肝功示转氨酶升高,考虑肝炎。经过2个月的治疗,宝宝腹痛缓解了,但复查肝功示转氨酶仍升高。后带其到医院检查查肝功仍提示转氨酶提示升高,且巨细胞病毒抗体阳性,诊断为巨细胞病毒性肝炎,给予干扰素肌肉注射、保肝治疗3个月,转氨酶较前略有下降,便请医生开药出院。

基础性研究与应用开发相结合的实践与思考

第三军医大学全军免疫研究所在吴玉章教授带领下成功研制出国家Ⅰ类新药“治疗用(多肽 )乙型肝炎疫苗”。本文通过对该药物研制与开发中创新性管理过程的回顾 ,分析基础性研究与应用开发研究的关系、切入点以及开发前的基础研究积累过程 ,探讨了建立基础性研究与应用开发研究相结合的科技投入自我运行机制、人才培养机制、激励机制、资源共享机制、协作机制。