内镜下血色素指数色图测定对上消化道病变的诊断价值

目的探讨血色素指数(IHb)色图测定对上消化道病变的诊断价值。方法采用OlympusGIF-H260型电子内镜对280例患者进行观察,选择一定区域记录IHb色图,在相应部位取活组织做病理组织学检查,并采用免疫组化染色方法计数微血管密度。结果与正常黏膜相比,炎症浸润重的黏膜IHb值高而萎缩的黏膜IHb值低(P<0.05);中晚期肿瘤的IHb值多明显高于癌周黏膜;分化好的早期癌的IHb值高而分化差的早期癌的IHb值低(P<0.05);黏膜下良性病变的IHb值与周边黏膜相比无明显差异;黏膜层微血管密度(MVD)是影响IHb值的重要因素,IHb高的区域,其MVD也较高(P<0.01)。结论IHb色图对微小病灶的检出、病灶性质的判断以及病灶范围的确定有一定的临床意义,有望拓展内镜的诊断性能。

糖尿病大鼠胃窦SCF-Kit信号改变及其对Cajal间质细胞的影响

目的研究糖尿病胃轻瘫大鼠胃Cajal间质细胞(interstitialcellsofCajal,ICC)的形态学改变,测定干细胞因子(stemcellfactor,SCF)及Kit含量变化,探讨糖尿病大鼠胃窦SCF-Kit信号在Cajal间质细胞受损中作用。方法用链尿佐菌素建立大鼠糖尿病模型,3个月后采用美蓝方法测定胃排空速率,对胃窦组织进行透射电镜观察Cajal间质细胞超微结构变化,采用RT-PCR方法测定胃窦平滑肌组织SCFmRNA的表达,Westernblot法检测胃窦平滑肌组织c-kit蛋白变化结果与正常大鼠相比,糖尿病大鼠胃排空明显延迟,胃Cajal间质细胞与其他细胞间的缝隙连接显著减少、结构破坏、连接松散;细胞器变性、减少;胞质广泛溶解;核周间隙增宽。糖尿病大鼠胃窦平滑肌组织SCFmRNA以及c-kit蛋白表达均明显低于正常大鼠。结论SCF-Kit系统受损与糖尿病大鼠胃窦Cajal间质细胞变性、数量减少以及网络结构破坏有关最终导致胃运动障碍。

树突状细胞扫描电镜样本制备方法

目的 探讨具有特殊结构的悬浮树突状细胞的扫描电镜制样方法。方法 对比观察细胞离心成团与自然沉降法制备扫描电镜样品对细胞形态学的影响。结果 自然沉降法能很好地显示树突状细胞的形态结构。结论 自然沉降法是制作具有特殊结构悬浮细胞的扫描电镜制样方法。

超声内镜指导下内镜治疗胃黏膜下肿瘤

目的评价超声内镜对胃黏膜下肿瘤的诊断价值及在超声内镜辅助下行黏膜下肿瘤内镜治疗的意义。方法怀疑胃黏膜下肿瘤并行超声内镜检查诊断118例。根据黏膜下肿瘤的起源层次及性质决定治疗方案,内镜治疗包括高频电切术、内镜下黏膜切除术、黏膜剥离-肿瘤摘除术、黏膜剥离-肿瘤摘除术+钛夹封闭术。标本行病理学检查。结果16例良性间质瘤起源于黏膜肌层;脂肪瘤9例、异位胰腺17例、胃底静脉曲张5例、囊肿3例起源于黏膜下层;52例良性间质瘤及16例恶性间质瘤起源于固有肌层。14例源于黏膜肌层及3例源于固有肌层的良性间质瘤、8例脂肪瘤及8例异位胰腺经内镜切除,3例囊肿行内镜下穿刺治疗;18例源于固有肌层的良性间质瘤、14例恶性间质瘤、1例脂肪瘤及2例异位胰腺经手术切除。病理符合率为98.53%。结论超声内镜能够对胃黏膜下肿瘤进行起源和定性诊断,对黏膜下肿瘤治疗方案的选择具有重要的指导意义,内镜治疗是消化道黏膜下肿瘤治疗的安全、有效的手段,对拟诊黏膜下肿瘤者术前均应行超声内镜检查。

KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞粘附力的影响

目的探讨KAI1基因对MHCC97-H肝癌细胞粘附力的影响,从而推测KAI1基因影响MHCC97-H肝癌细胞侵袭转移的机制。方法采用微管吸吮技术研究我们前已转染人类KAI1全长正、反义结构基因的人肝癌MHCC97-H细胞粘附力。结果在纤维连接蛋白(fibronectin,FN)裱衬表面,利用微管吸吮系统测得的各组肝癌细胞的粘附力分别为MHCC97-H-S组(678·4±101·8),MHCC97-H-AS组(1083·6±113·8),MHCC97-H-pCI组(853·0±105·4)及MHCC97-H亲本细胞组(834·6±130·5)(单位为10-10N,细胞数为25)。与MHCC97-H亲本细胞组比较,MHCC97-H-S组细胞对FN的粘附力显著下降(P<0·01),MHCC97-H-AS组细胞对FN的粘附力显著增加(P<0·01),而MHCC97-H-pCI组细胞对FN的粘附力无明显变化(P>0·05)。结论KAI1基因可能降低肝癌细胞对细胞外基质FN的粘附力,从而抑制转移的初始步骤,进而抑制MHCC97-H肝癌细胞的侵袭和转移。

人NHE-1基因反义真核表达载体的构建及初步鉴定

目的 构建人Na+ H+ 交换蛋白 1(Na+ H+ exchanger 1,NHE 1)基因反义真核表达载体。方法 采用分子克隆技术 ,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶从NHE 1cDNApEAP切下所需目的片段 ,然后将该片段反向插入真核表达载体pcDNA3 1( ) Zeo的多克隆位点 ,最后对产生重组子进行琼脂糖凝胶电泳鉴定。结果 经琼脂糖凝胶电泳鉴定 ,将目的片段成功的连接到pcDNA3 1( ) Zeo载体上。结论 成功地将NHE 1目的片段反向插入到pcDNA3 1( ) Zeo中 ,构建了人NHE 1反义表达真核载体hNHE 1。

食管鳞状细胞癌P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达及临床意义

目的探讨耐药基因蛋白P-gp、GST-π和TopoⅡ在食管鳞状细胞癌及正常食管组织中的表达及其与临床病理的关系。方法应用免疫组织化学方法检测144例手术切除的食管鳞状细胞癌组织和30例正常食管组织中P-gp、GST-π和TopoⅡ的表达。结果P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达与患者年龄、性别、淋巴结转移、肿瘤大小及浸润深度无关(P>0.05),与肿瘤的分化程度有关,高分化、中分化和低分化鳞癌组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌耐药由多种耐药基因共同参与,联合检测多项耐药相关蛋白表达,对指导临床化疗药物选择具有意义。

便秘大鼠结肠黏膜上调蛋白质的分离及鉴定

目的观察慢传输型便秘大鼠结肠黏膜上调蛋白质的变化特性,并对明确的蛋白质组进行功能分析。方法利用复方苯乙哌啶建立大鼠慢传输型便秘模型,利用高分辨双向电泳(2-DE)对STC大鼠结肠黏膜组织进行蛋白质分离,ImageMaster2D Elite图像分析软件进行分析,应用生物质谱、蛋白质库及文献分析等技术对差异蛋白质中的上调蛋白质组进行鉴定、功能和临床意义分析。结果慢传输型便秘在其发生过程中有显著的蛋白质表达差异。主要差异表达的蛋白质有:类肌钙蛋白Calponin(CaP)(A1),组蛋白H2B(A2),鼠醛酮还原酶蛋白类似物(RAKb蛋白类似物)(A3),A1、A2、A3在便秘大鼠的胶图中表达明显上调。结论CaP与胃肠道的运动状态密切相关,它在胃肠道运动中具有调节作用,可能介导了复方苯乙哌啶的抑制胃肠动力作用,通过表达量的变化来实现对胃肠道运动的调节。

高频与低频胃肠起搏治疗胃肠动力紊乱性疾病疗效的比较

目的 对高频胃肠起搏与低频起搏治疗胃肠动力紊乱性疾病的疗效进行比较。方法 82例胃肠动力紊乱 性疾病患者,完全随机分为2组,低频起搏组50例,采用1.1～1.2IGF(intrinsicgastricslowwavefrequency)的类正弦基波叠加 一系列双极脉冲方波(10Hz)进行起搏;高频起搏组(对照组)32例,采用12.0次/min的类正弦基波叠加一系列双极脉冲方 波(30Hz)进行起搏。胃起搏1次/d,每次45min,共15d。分别记录治疗前、治疗中及治疗后的临床症状变化。结果 治 疗后低频起搏组的总有效率为92%,高频起搏组的总有效率为91%。高频起搏组治疗后“恶心、呕吐”的改善较低频起搏 组更为明显(P<0.05),而低频起搏组“早饱、嗳气”的缓解则较高频起搏组更显著(P<0.05),但2组间症状总积分的比较 差异无显著性(P>0.05)。结论 高频起搏组与低频起搏组比较在消除患者症状方面有一定差异,胃肠起搏的疗效与起 搏参数有关。

阻塞性胆汁淤积大鼠肝细胞膜蛋白MRP3与核受体RXRα蛋白表达关系的研究

目的通过体外细胞培养和建立大鼠胆管结扎(b ile duct ligation,BDL)所致阻塞性胆汁淤积动物模型,在蛋白水平观察多耐药相关蛋白MRP3(mu ltidrug resistance-assoc iated prote in 3,MRP3)和核受体RXRα(retinoid-X receptor al-pha,RXRα)表达的关系。方法用鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic ac id,CDCA)或苯巴比妥(phenobarb ital,PB)分别刺激培养的肝癌细胞HepG2并建立DBL阻塞性胆汁淤积大鼠模型后,分别抽提HepG2细胞总蛋白、核蛋白和大鼠肝脏细胞膜蛋白和核蛋白,W estern b lot方法检测MRP3和RXRα蛋白表达水平的变化。结果在细胞水平,CDCA和PB可诱导HepG2细胞膜MRP3蛋白表达增高,并抑制细胞核RXRα蛋白表达;在动物体内,BDL大鼠肝脏MRP3明显增加,同时RXRα表达明显下降。结论肝细胞膜蛋白MRP3表达的上调可能与核受体RXRα表达抑制有关。

胃癌和胃癌前病变bcl-2基因表达及其对细胞凋亡的调控作用

目的 探讨胃癌前病变及胃癌中bcl 2基因表达状况及其与细胞凋亡的关系。方法 应用原位杂交和免疫组织化学技术检测 10例正常胃粘膜、72例慢性萎缩性胃炎和 5 3例胃癌中bcl 2基因的表达 ,并采用凋亡细胞原位检测方法对组织切片中的凋亡细胞进行观察和比较。结果 bcl 2基因在正常胃粘膜及不同胃粘膜病变中均有不同程度的表达。bcl 2mRNA在胃癌组织中的表达率为 77 3 6%,显著高于正常胃粘膜、萎缩性胃炎及肠化生 ( 2 0 0 0 %,2 5 0 0 %,44 44 %,P<0 0 1) ;异型增生组织bcl 2mRNA表达率为 75 0 0 %,显著高于正常胃粘膜及萎缩性胃炎 (P <0 0 5 )。胃癌组织bcl 2蛋白表达率为 81 13 %,显著高于正常胃粘膜、萎缩性胃炎及肠化生 ( 2 0 0 0 %,3 1 2 5 %,5 2 78%,P <0 0 1) ,异型增生组织bcl 2蛋白表达率为 75 0 0 %,显著高于正常胃粘膜及萎缩性胃炎 (P <0 0 1)。χ2 检验表明两种方法检测阳性率差异无显著性。凋亡细胞原位检测结果显示 ,bcl 2蛋白表达阳性肠化生和胃癌组织中的凋亡细胞指数显著低于bcl 2蛋白阴性组 (P<0 0 5及P <0 0 1) ,bcl 2蛋白表达状态与细胞凋亡指数呈负相关。结论 bcl 2基因对胃癌前组织及胃癌细胞凋亡具有抑制性调控作用 。

NHE1蛋白在胃癌和胃癌前病变中的表达及临床意义

目的 检测NHE1蛋白在胃癌和胃癌前病变中的表达情况 ,初步探讨NHE1蛋白在胃粘膜癌变过程中的变化规律及其临床意义。方法 采用免疫组织化学方法检测NHE1蛋白在胃癌和胃癌前病变中的表达 ,其中正常胃粘膜15例 ,慢性萎缩性胃炎 15例 ,肠上皮化生 15例 ,异型增生 8例 ,胃癌 40例。结果 15例正常胃粘膜无表达 ,15例慢性萎缩性胃炎中有 2例表达 ,阳性率为 13 3 3 % ,15例肠上皮化生中有 3例表达 ,阳性率为 2 0 0 0 % ,8例异型增生中有 2例表达 ,阳性率为 2 5 0 0 % ,40例胃癌中有 3 3例表达 ,阳性率为 82 5 0 % ,胃癌与正常胃粘膜和各型胃癌前病变相比 ,具有显著性差异 (P <0 0 1)。结论 NHE1蛋白在胃癌的表达显著高于正常胃粘膜和胃癌前病变 ,可能与胃癌的发生、生长、转移有着密切的关系。

食管酸灌注对非糜烂性胃食管反流病患者食管内脏敏感性的影响

目的研究酸灌注刺激对非糜烂性胃食管反流病(NERD)患者食管内脏敏感性的影响,探讨内脏感觉异常在NERD发病机制中的作用。方法10例正常健康自愿者和21例NERD患者参与试验;采用Synectics内脏刺激器/电子气压泵和带有低顺应性气囊及多个灌注式压力通道的导管给食管以快速时相性气球扩张性刺激和进行食管酸灌注;利用食道气囊扩张术检测受试者对食管气囊扩张的反应。结果酸灌注前NERD患者食管气囊扩张诱发的初始感觉阈值和最大耐受疼痛阈值均低于健康对照组(P<0.01)。酸灌注后NERD患者初始感觉阈值和最大耐受痛阈均比相应基线值降低(P=0.015);酸灌注后健康对照组初始感觉阈值比相应基线值明显降低(P<0.05),但最大耐受痛阈值无显著变化。NERD患者酸灌注的最大耐受痛阈为(9.70±3.06)ml,显著低于健康志愿者的(22.10±4.91)ml(P<0.01)。食管生理盐水灌注对NERD组和健康对照组的各项内脏敏感性指标均无明显的影响。结论酸灌注致敏食管壁化学感受器可明显增加NERD患者对食道机械刺激的反应,提示酸敏感的化学感受器和压力敏感的机械感受器之间可协同作用共同促进食管内脏高敏感性的形成。

SKP2在食管癌组织中的表达及其临床意义

目的研究细胞S期激酶相关蛋白SKP2(S-PHASE KINASE-ASSOCIATED PROTEIN2)在食管癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化S-P方法检测121例食管癌组织中SKP2蛋白与P27蛋白的表达水平和90例正常食管组织中的SKP2蛋白表达水平。结果SKP2蛋白表达率在食管癌中为64.4%(78/121),而正常食管组织中为13.3%(12/90),差异有显著性(P<0.05)。SKP2蛋白阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移及TNM分期无关(P>0.05),与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。SKP2与P27表达呈显著负相关(P<0.05)。结论从蛋白水平证明SKP2异常表达可促进食管癌的发生发展,并将可能为食管癌的早期诊断和治疗提供新的手段。

致敏树突细胞及exosome对胃癌的免疫治疗作用研究

目的 :了解胃癌组织中树突细胞 (DC)的功能状态 ,探讨DC及其分泌的亚细胞成分exosomes用于防治胃癌的可能性 ,旨在为胃癌的防治探索新的途径。方法 :利用致敏DC及其所分泌的亚细胞成分exosomes对荷胃癌小鼠进行免疫治疗 ,观察其免疫治疗效果。结果 :荷胃癌小鼠经胃癌细胞RNA致敏的DC及其分泌的亚细胞成分exosomes治疗后 ,小鼠腹水产生率、肿瘤转移率、动物存活率、瘤体平均重量等指标均明显优于对照组 (P <0 0 1) ,局部组织中IL 12、IFN γ和IL 18的基因表达水平都明显升高 (P <0 0 1) ,肿瘤局部CD4 + 、CD8+ 细胞数量增加 (P <0 0 5 ) ,TIL细胞毒活性明显增强。结论 :胃癌RNA致敏的DC及其所分泌的亚细胞成分exosomes,能促进胃癌抗原的提呈 ,并启动和增强机体的抗瘤免疫功能 ,改善临床症状和生存质量 ,对荷胃癌小鼠具有一定的免疫治疗效果。

190例急性胰腺炎胰外损害临床分析

目的 探讨急性胰腺炎的胰外损害情况。方法 对 190例急性胰腺炎病例临床资料进行分析 ,统计其胰外损害发生率。结果 190例急性胰腺炎合并肝损害 71例 (37%) ,合并呼吸系统损害 4 4例 (2 4 %) ,并发心肌炎 3例 (1.6 %) ,急性胃粘膜病变 6例 (3.2 %) ,肠梗阻 7例 (3.7%) ,肠穿孔 1例 (0 .5 %) ,肾功能衰竭 1例 (0 .5 %) ,胰性脑病 1例 (0 .5 %)。结论 急性胰腺炎常合并胰腺多种器官损害 。

改良一步法制备人外周血白细胞线粒体DNA

目的 建立从少量外周血中提取白细胞线粒体DNA(mtDNA)的快速、简便方法。方法 5 8份抗凝血静置后取白细胞层 ,采用碱变性法裂解细胞 ,酚 氯仿 异戊醇抽提 ,RNA酶消化后再抽提及沉淀 ,PCR扩增产物电泳鉴定。结果 获得的mtDNA样品不存在蛋白质等污染 ,用特异性mtDNAPCR引物从 5 8例核酸样品中均能扩增出 15 2 8bp的mtDNA基因片段。结论 改良一步法是一种省时、经济、实用、重复性好。

多排螺旋CT仿真结肠镜对结直肠占位性病变诊断价值的研究

目的探讨多排螺旋CT仿真结肠镜(CT virtual colonoscopy,CTVC)对结直肠占位诊断的临床价值。方法41例经结肠镜诊断为结肠占位的患者,经肛门注气后行16排螺旋CT腹盆腔连续薄层扫描,应用多排螺旋CT仿真结肠镜软件对获取的数据进行三维仿真结肠镜图像重建,与结肠镜和临床病理结果进行对照分析。结果结肠镜诊断结肠息肉12例共21枚息肉,仿真结肠镜发现10例共15枚息肉;结肠镜诊断结肠癌29例,仿真结肠镜诊断结肠癌27例,并发现2例肝转移,1例腹膜后淋巴结转移。结论CTVC对结肠占位性病变是一种无创、有效的检查方法,它不仅可以显示结肠占位的部位、大小,而且还可以显示结肠壁及结肠外的转移情况,对结肠癌的临床分期和手术方案的选择具有重要意义。

胃癌细胞NF-κB和survivin的表达对TRAIL抗瘤作用的影响

目的 探讨胃癌细胞NF κB和survivin的表达对TRAIL抗瘤作用的影响。方法 应用细胞培养和流式细胞仪检测的方法 ,观察胃癌细胞SGC 790 1、MKN2 8、AGS、MKN45经TRAIL作用后细胞凋亡率 ,Westernblot方法分析四种胃癌细胞中NF κB和survivin的表达。结果 TRAIL3 0 0ng ml作用于胃癌细胞 2 4h后 ,胃癌细胞MKN2 8、MKN45、AGS和SGC 790 1的凋亡率分别为 3 6 0 5 %、2 0 2 7%、16 5 0 %和 11 80 %。Westernblot结果显示SGC 790 1细胞NF κB、survivin的表达均高于MKN2 8细胞的表达。结论 TRAIL具有选择性诱导肿瘤细胞凋亡的特性 ,肿瘤细胞对TRAIL的耐药现象 ,可能与凋亡抑制因子survivin和NF κB的表达有关。