消化系统肿瘤研究中蛋白质组学的应用

在消化系统肿瘤的研究中,蛋白质组学能直接从分子水平动态定量考察肿瘤发生过程中蛋白质种类、数量的改变,有助于寻找肿瘤早期诊断和预后的特异性标记物以及有效的治疗靶标。蛋白质组的进一步研究将在肿瘤发病机制、诊断和治疗方面取得重大突破,为肿瘤研究、诊断和治疗带来新希望。

谷氨酰胺联合维生素C对军事训练中暑及内毒素血症的预防作用及机制研究

目的观察谷氨酰胺联合维生素C对中暑及肠源性内毒素血症的干预作用,初步探讨其作用机制。方法对48例在高热环境下进行军事训练的士兵按照区组随机化法分为预防组(24例)和对照组(24例),预防组士兵在常规口服补液的基础上加服谷氨酰胺联合维生素C预防中暑,对照组采用相同的常规补液加服安慰剂。比较2组中暑发生率,训练前后氧化应激指标、血浆内毒素、十二指肠粘膜超微结构及十二指肠粘膜热休克蛋白70(HSP70)表达变化。结果药物预防组和对照组中暑的发生率分别为8.3%(2/24)和33.3%(8/24),差异具有统计学意义(P<0.01);药物预防组较对照组血清超氧化物歧化酶(SOD)水平升高,血清丙二醛(MDA)及血清内毒素降低,差异均有统计学意义(P<0.01);透射电镜观察药物预防组十二指肠粘膜微绒毛、细胞器、内质网基本正常,对照组十二指肠粘膜多数微绒毛紊乱,细胞器、内质网均有肿胀,免疫组化结果表明药物预防组HSP70表达较对照组明显升高。结论谷氨酰胺联合维生素C可为小肠修复提供能量来源,提高热休克蛋白对小肠粘膜的保护作用,同时减轻氧化应激反应,从而保护小肠的屏障功能,降低肠源性内毒素血症发生。可用于中暑的预防性治疗。

端粒酶hTERT促进肿瘤细胞侵袭与转移及其机制研究

目的观察hTERT基因修饰对人骨肉瘤细胞系U-2OS生物学行为的影响。方法采用脂质体法将克隆有人全长cDNAhTERT的真核荧光质粒(pIRES2-EGFP-hTERT)转染端粒酶阴性的人骨肉瘤U-2OS细胞,经G418筛选,免疫组化和Westorn Blot鉴定后,检测其端粒酶活性的改变、生长周期以及生物力学的变化。结果成功转染人真核荧光表达载体的U-2OS细胞能有效抵抗G418,并可有效表达hTERT蛋白,细胞内端粒酶活性明显增强,G1期细胞比例下降,S期细胞比例升高,并且还明显增强了对细胞外基质的粘附力。进一步采用Transwell小孔迁移实验检测发现,hTERT/U2OS侵袭能力明显增强。结论转染hTERT基因后,U-2OS细胞内可同时通过端粒酶途径延长端粒。hTERT基因修饰可促进细胞周期进程,促使细胞从G1期→S期。通过替代途径延长端粒的肿瘤细胞在hTERT基因修饰后,增殖能力及侵袭能力明显增强。

504例胃息肉发生相关因素的调查研究

目的探讨胃息肉发生的相关因素,为更有针对性胃息肉的预防提供科学依据。方法收集2016年10月至2017年3月就诊于西南医院各科室的504例行胃镜检查并经病理学证实为胃息肉的患者,以同期健康体检和各科室就诊的504例行胃镜检查未发现胃息肉者作为对照,使用统一设计的调查问卷进行相关因素调查。对调查各因素进行单因素分析,将筛选出有统计学意义的因素纳入多因素Logistic回归分析。结果单因素分析结果显示,质子泵抑制剂使用情况、H.pylori感染史、胃息肉家族史、吸烟、饮酒、喝茶、体育锻炼、进食速度、进食水果、心情状况、精神创伤史及工作生活压力可能与胃息肉发生相关。多因素Logistic回归分析结果显示,使用质子泵抑制剂、H.pylori感染史、胃息肉家族史、长期饮酒、进食速度较快、精神创伤史是胃息肉发生的危险因素,体育锻炼(≥1次/周)、进食水果(≥2次/周)为其保护因素。结论胃息肉的发生与多种因素相关,避免长时间使用质子泵抑制剂及长期饮酒、根除H.pylori感染、适当的体育锻炼与进食水果、保持乐观的心态和养成良好的饮食习惯可能会有效降低胃息肉的发生风险。

高频超声内镜鉴别上消化道黏膜内癌及黏膜下癌

目的探讨高频超声内镜鉴别上消化道黏膜内癌及黏膜下癌的价值。方法129例上消化道早期癌患者术前行高频超声内镜检查,分析上皮内癌、黏膜肌层癌、黏膜下癌的超声影像学特征。34例行内镜下黏膜切除术,5例行内镜下黏膜下剥离术,90例行外科手术。术后标本行病理学检查确定其浸润深度。结果高频超声内镜显示上皮内癌30例,黏膜上皮层增厚,黏膜肌层形态规则;黏膜肌层癌42例,36例黏膜层及黏膜肌层增厚,两层界限不清楚,黏膜下层形态规则,6例黏膜层及黏膜肌层增厚,黏膜下层部分稍增厚,形态规则;黏膜下癌57例,黏膜下层形态改变,变细8例,增粗6例,扭曲5例,不规则10例,部分中断12例,与黏膜肌层分界不清楚16例,固有肌层形态规则。术后病理:黏膜内癌78例,黏膜下癌51例。高频超声内镜判断黏膜内癌特异性为92.2%(47/51),敏感性为87.2%(68/78),黏膜下癌特异性为87.2%(68/78),敏感性为92.2%(47/51),其鉴别黏膜内癌及黏膜下癌准确性为89.1%(115/129)。结论高频超声内镜能较准确鉴别上消化道黏膜内癌及黏膜下癌。

肝素酶:一种新的广谱的肿瘤转移相关抗原在中晚期肿瘤免疫治疗中的作用研究进展

肝素酶(Hpa)是裂解硫酸乙酰肝素蛋白多糖的唯一酶类,能破坏细胞外基质及基底膜,参与肿瘤血管生成,与肿瘤的侵袭转移密切相关．目前的研究表明,Hpa在大多数中晚期肿瘤中都有表达,尤其在转移性肿瘤中强表达,而Hpa表达的下调可以抑制肿瘤细胞的转移,提示Hpa可以作为一种广谱的肿瘤转移相关抗原用于中晚期肿瘤的免疫治疗．Hpa疫苗的开发可望为中晚期肿瘤的治疗开辟新的途径．本文详细综述了Hpa的结构与功能、对肿瘤转移的促进作用及其机制、以及其作为肿瘤转移相关抗原用于中晚期肿瘤免疫治疗的可能性．

上消化道间质瘤的随访及侵袭危险性的相关因素分析

目的通过分析上消化道间质瘤内镜及超声内镜特点与侵袭危险性的关系，及随访上消化道间质瘤患者的临床结果，探讨内镜预测上消化道间质瘤的侵袭危险性的价值及如何选择不同的处理方式。方法回顾性分析2003年3月至2011年12月经超声内镜（endoscopicultrasound，EUS）诊断为上消化道间质瘤的292例患者的临床资料，对手术和内镜切除的标本行病理检查明确其侵袭危险性，并分析其胃镜及超声内镜影像特点与侵袭危险性的关系。对部分上消化道间质瘤患者行胃镜及超声内镜随访观察其肿瘤变化情况。结果肿瘤大小，表面、回声、形态、边界这5个内镜特征与侵袭危险f生相关。肿瘤大于3cm，尤其是肿瘤表面出血溃烂、回声不均、形态不规则、边界不清的内镜和超声特点提示肿瘤有中度和高度侵袭危险性。肿瘤小于3cm，表面光滑、均匀低回声、形态规则、边界清楚的内镜及超声特点提示其侵袭危险性较低。对非手术患者平均随访24个月，≤1cm组、1～2cm组、2—3．5cm组的肿瘤增长率分别为0．8％、8．8％及12．5％。结论内镜与超声内镜可预测上消化道胃肠间质瘤（gastrointestinalstromaltumors，GIST）的侵袭危险性。≤2em的上消化道GIST，其恶性潜能较低，宜选择保守治疗，可定期临床随访，2—3cm的GIST恶性潜能介于低度和中度之间，可进行密切随访或外科及内镜切除，大于3cm的GIST恶性潜能较高，应采取外科或内镜切除。

肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞表位多抗原肽负载的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤免疫效应研究

目的研究肝素酶(heparanase,Hpa)细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位多抗原肽(multi-ple antigen peptides,MAP)疫苗能否诱导更强的Hpa特异性CTL反应。方法 HLA-A2.1限制性肝素酶CTL表位多抗原肽负载正常人外周血来源(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)树突状细胞(dendritic cell,DC),诱导CTL,采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT实验检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的CTL对Hpa阳性且HLA-A2.1匹配的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大效应细胞/靶细胞(effector/target,E/T)时高出率均大于16%;其对HLA-A2.1阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应,但是对MCF-7/Hpa乳腺癌细胞和HepG2/HLA-A2肝癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大E/T时高出率均大于18%;其对自体淋巴细胞和DC不具有杀伤效应。另一方面人肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的IFN-γ分泌水平强于相应的单肽。结论肝素酶CTL表位MAP疫苗能激发较相应单肽更强的特异性和非特异性抗肿瘤效应。

不同剂量利福平致小鼠肝损伤特点的研究

目的观察连续2周给予不同剂量利福平(RIF)引起小鼠肝损伤的现象及特点。方法给予24只小鼠不同剂量的利福平(0、100、200、400 mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续灌胃2周,设为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组4组(每组6只),末次给药后6 h取材,收集小鼠血液和肝组织样品进行血清学检测并观察小鼠肝病理改变。结果所有小鼠实验期均未死亡。高剂量组和对照组比较TBA、DBIL、TBIL均有升高,ALT、AST、ALP无明显变化。中剂量组和对照组比较TBA、DBIL有升高,TBIL、ALT、AST、ALP无明显变化。低剂量组和对照组比较TBA、DBIL、TBIL、ALT、AST、ALP均无明显变化。各实验组小鼠肝均发生明显病理改变;HE染色显示肝细胞水肿、羽毛样变性与脂肪变性,并伴有大量炎性细胞浸润,个别可见散在的胆汁淤积;随着利福平浓度的增大,肝病理改变越明显。电镜照片示各实验组肝组织电镜照片可见肝细胞包浆中充满大量的脂肪滴,部分毛细胆管轻微扩张、其内可见不同电子密度的不规则状胆汁样物质,也是随利福平浓度的增大肝病理改变越明显。结论连续2周给予不同剂量的利福平均可引起小鼠肝损伤,主要表现为肝细胞脂肪变性、炎性细胞浸润和散在胆汁淤积,利福平对小鼠肝的损伤呈浓度依赖性,但其机制有待进一步研究。

内镜下治疗结肠息肉在日间病房与住院病房中的回顾性病例对照研究

目的对比结肠息肉患者在日间病房与住院病房中的治疗效果、患者满意度差别。方法收集我科2013年10月至2014年9月日间病房结肠息肉(病灶≤1.0 cm)患者100例与住院病房同类患者100例,两组患者均行肠镜下治疗。采集两组患者临床基本信息,统计住院时间、住院费用、服务满意率、手术并发症发生率、院内感染发生率、局部复发率、完整切除率,并运用t检验及χ2检验对比。结果两组患者临床基本信息差异无统计学意义,日间病房组较普通病房组的住院时间、住院费用、院内感染率低,服务满意率高,差异有统计学意义(P<0.01),两组患者病灶完整切除率、局部复发率、手术并发症发生率、院内感染率、术后局部复发率差异无统计学意义(P>0.05)。结论日间手术病房模式较住院病房模式治疗效果无差别,但可降低院内感染率、治疗费用,缩短治疗周期,提高患者治疗获益程度。

食管腺癌组织中核干细胞因子表达的研究

目的研究核干细胞因子在食管腺癌中的表达情况,探讨其与食管腺癌临床病理的关系。方法应用RT-PCR和West-ern blotting方法检测40例食管腺癌中核干细胞因子的表达情况。结果核干细胞因子阳性表达率在食管腺癌中为95%(38/40),而癌旁组织无核干细胞因子表达,差异有显著性(P<0.05);核干细胞因子阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期及有无淋巴结转移无关,与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。结论核干细胞因子在食管腺癌中异常表达,有望为食管腺癌的早期诊断和治疗提供新的手段。

卢戈液-美蓝双重染色联合超声小探头诊断食管早期癌及癌前病变的临床研究

目的探讨内镜下卢戈液-美蓝双重染色联合超声小探头诊断食管早期癌及癌前病变的临床价值。方法对食管可疑病变先后用3%卢戈液和0.5%美蓝喷洒病变黏膜,观察病变染色程度及范围。对卢戈液不染或淡染-美蓝染色病变行活组织病理学检查,并用超声小探头探查病变浸润深度。结果卢戈液不染或淡染-美蓝染色217例,病理为食管早期癌89例,不典型增生128例(轻度34例,中度68例,重度26例),卢戈液不染或淡染-美蓝染色诊断食管早期癌及不典型增生准确率为100%。超声小探头显示116例浸润至黏膜上皮层,37例浸润至黏膜肌层,30例浸润至黏膜下层,6例出现淋巴结转移。术后病理:上皮内癌18例,黏膜肌层癌32例,黏膜下癌39例,与其对照,超声小探头鉴别黏膜内癌和黏膜下癌的准确性为89.9%(80/89)。结论卢戈液-美蓝双重染色联合超声小探头有助于提高食管早期癌及癌前病变的检出率和诊断率,对合理选择治疗方法有指导意义。

肝素酶CTL表位负载的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤免疫效应研究

目的研究肝素酶(Hpa)多肽疫苗体外能否诱发肝素酶特异性CTL反应,为肝素酶多肽疫苗的临床应用提供理论依据。方法5条HLA-A2限制性肝素酶抗原表位[Hpa(525-533)(PAFSYSFFV)、Hpa(353-361)(PLLSDTFAA)、Hpa(277-285)(KMLKSFLKA)、Hpa(400-408)(PLPDYWLSL)、Hpa(405-413)(WLSLLFKKL)]分别负载正常人外周血来源(PBMC)的树突状细胞(DC),诱导肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应,采用ELISPOT方法检测肝素酶表位肽负载的DC疫苗刺激的效应细胞IFN-γ的释放。结果5条肝素酶多肽表位中,只有Hpa(525-533)、Hpa(277-285)和Hpa(405-413)体外可以诱导肝素酶表位特异性CTL反应,对Hpa阳性且HLA-A2阳性的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有明显的杀伤效应,对HLA-A2阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应,但对转染了HLA-A2的HepG2细胞和转染了肝素酶质粒的MCF-7细胞恢复杀伤效应,对自体淋巴细胞不具有杀伤效应,进一步研究表明,Hpa(525-533)、Hpa(277-285)和Hpa(405-413)表位肽可以促进CTL细胞IFN-γ的释放。结论人肝素酶特异性抗原表位Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)不仅能激发机体特异性的抗肿瘤效应,而且还能诱导一个非特异性抗肿瘤的良性循环,这种肝素酶多肽疫苗具有广谱、高效、特异、安全的优点,为肝素酶表位多肽疫苗的临床应用提供了理论依据。

端粒酶hTERT亚单位启动子靶向性慢病毒对肿瘤活体实时显像的实验研究

目的构建一种含优化型人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子的慢病毒,结合小动物活体光学成像系统,研究该启动子对端粒酶阳性肿瘤的特异性活体成像作用。方法将文献报道的优化型hTERT启动子克隆到pGL-Basic质粒,对优化型hTERT启动子进行功能检测。确定其驱动活性之后,构建一种含该启动子和GFP的第3代慢病毒表达系统,以含CMV启动子的慢病毒作为对照。采用小动物荧光成像系统体内外研究优化型hTERT启动子在肿瘤实时诊断中的作用。结果启动子功能检测发现hTERT启动子具有严格的端粒酶阳性肿瘤细胞特异性,并且具有很高的报告基因报答水平。第3代慢病毒包装系统获得了高滴度的病毒颗粒并且能高效整合报告基因之宿主细胞。体外研究表明,含有优化型hTERT启动子的慢病毒体外感染细胞后,能够在端粒酶阳性肿瘤细胞内特异表达GFP,并且能维持长达40d的报告基因表达时间。体内实验发现,感染含优化型hTERT启动子的慢病毒之后24h,端粒酶阳性活体肿瘤能够被特异性的实时观察到,并且肿瘤内的GFP信号在存活裸鼠体内维持30d,随肿瘤增大而增强。结论优化后hTERT启动子对报告基因的调控具有严格的端粒酶特异性,第3代慢病毒系统可将该启动子和报告基因整合至细胞基因组,并实现在端粒酶阳性肿瘤细胞内的特异表达。结合小动物活体光学成像系统,荷瘤裸鼠内的端粒酶阳性肿瘤能够被无创的、实时的、特异性的成像,为肿瘤的特异性早期诊断提供新的实验理论基础。

拉曼光谱分析癌变胃黏膜组织中蛋白质改变的研究

目的研究正常和癌变胃黏膜组织中蛋白质的拉曼特征峰的差异及其意义。方法提取12例正常和癌变胃黏膜组织的蛋白质相关特征峰进行对比分析,结合统计学方法,观察癌变胃黏膜组织中蛋白质构型构象、氨基酸组成等改变。结果和正常胃黏膜组织比较,癌变胃黏膜组织中蛋白质相关拉曼特征峰758cm-1、879cm-1、938cm-1、1271cm-1、1660cm-1等发生了不同程度的移位,蛋白质的氨基酸组成及空间构象等出现了改变;结合蛋白质特征峰的相对峰强进行Fisher判别分析,建立判别函数获得了91.7%准确判别率。结论拉曼光谱是研究癌变胃黏膜组织中蛋白质分子的生化改变的新型有效手段,有助于胃癌的基础机制及临床诊疗研究。

胃粘膜正常和癌变细胞基因组DNA的表面增强拉曼光谱研究

通过测试胃粘膜正常上皮细胞、高、中、低和未分化胃癌细胞基因组DNA的表面增强拉曼光潜,分析各自特征性谱峰。结果表明:正常和高分化细胞基因组DNA在1060cm^(-1)被抑制,只在1010cm^(-1)被激活,但后者的谱峰更强且出现"红移",其DNA链结构出现不稳定;中、低、未分化细胞基因组DNA中以上两种振动模式都被激活,说明它们的DNA链出现了断裂,且呈现渐强的趋势。同时也说明了脱氧核糖基在恶性程度越高的细胞基因组DNA中带正电趋势越强。1100-1670cm^(-1)谱带属于dC,dG,dA,dT的综合振动叠加,恶性程度越高的癌细胞中更多的模式被激活。可见,分化越低的胃癌细胞基因组DNA具有更多的振动模式被激活,与正常的差异更明显,并且DNA链整体带正电的趋势也可能越强,提示可能有更多的氧化反应发生。

浅谈医学研究生科研诚信存在的问题及对策

医学研究生的培养对于未来医学的发展至关重要。近年来,学术造假、抄袭他人论文、篡改实验数据等科研诚信缺失的不正之风不断蔓延,在这样的社会大环境影响下,医学研究生的培养也面临巨大挑战。本文结合问卷调查分析目前医学研究生科研诚信存在的问题并分析其原因,提出相应的对策,对医学研究生良好科研品质的培养具有重要意义。