高效耐用抗菌织物敷料在烧伤创面的临床应用研究

目的了解高效耐用抗菌织物敷料(有效成分为载银磷酸锆)对烧伤后Ⅱ度创面的治疗效果及安全性。方法选择符合入选标准的72例烧伤后Ⅱ度创面患者为受试对象,磺胺嘧啶银作为对照组,观察其创面用高效耐用抗菌织物敷料及磺胺嘧啶银覆盖后治疗、控制伤口感染方面的疗效和安全性。结果高效耐用抗菌织物实验组比对照组创面用药后愈合时间明显提前,平均提前3.39d,两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。实验组用药后6d及12d的细菌累计清除率分别为83.87%、96.77%,较对照组明显提高。高效耐用抗菌织物对血常规和肝、肾功能均无明显影响,未见局部致敏和全身症状。结论高效耐用抗菌敷料能有效促进烧伤后Ⅱ度创面的愈合,抑制创面细菌生长。

Rho激酶对严重烧伤大鼠血清诱导的肠黏膜上皮细胞调控机制的研究

目的：观察烧伤血清刺激下肠黏膜上皮细胞通透性的变化及Rho激酶信号转导通路所起的作用。方法：常规培养肠黏膜上皮CaCO-2细胞,分为正常对照组、烧伤血清组和烧伤血清6 h＋Y27632组,以FITC-albumin荧光强度检测法检测人肠黏膜上皮细胞在未烧伤、1、2、6、12、24 h时相点通透性变化指标;采用Western blot法检测人肠黏膜上皮细胞中肌球蛋白轻链（MLC）、磷酸化MLC（p-MLC）和Rho激酶蛋白水平在6个时相点的变化及烧伤血清6 h＋Y27632组总MLC、p-MLC及Rho激酶蛋白水平表达。结果：严重烧伤后人肠黏膜上皮细胞通透性明显增加,并呈时相依赖性变化,6-12 h达到最高;p-MLC以及Rho激酶蛋白表达均明显增加。上述蛋白表达的增强可在加入Rho激酶特异性抑制剂Y27632后取消。结论：烧伤大鼠血清能诱导肠黏膜上皮细胞内Rho激酶激活、p-MLC表达增加及肠黏膜通透性增加,抑制Rho激酶活性能逆转这一作用。

去甲肾上腺素对严重烧伤大鼠脑水肿的影响

目的观察去甲肾上腺素(norep inephrine,NE)对严重烧伤24 h大鼠脑水肿的影响。方法健康W istar大鼠48只,完全随机分为正常对照组,高、中、低剂量NE组各1组,烧伤组1组,烧伤前腹腔注入高、中、低剂量NE组各1组,共分为8组,每组6只,采用40%TBSAⅢ度烫伤大鼠模型,通过组织病理学观察、血脑屏障通透性观察、脑含水量测量方法,观察脑组织水肿情况。结果病理观察显示烧伤和烧伤应激时脑组织水肿明显,血脑屏障通透性增高,较正常对照组,差异明显,尤以烧伤应激时更加严重。结论NE诱导了严重烧伤24 h大鼠脑水肿,故认为烧伤后机体的应激反应是促进脑水肿形成的一个重要因素。

重症监护病房康复治疗缩短重度烧伤患者ICU住院时间

目的了解烧伤重症监护病房开展康复治疗对重度烧伤患者ICU住院时间、治疗费用的影响。方法回顾性调查2011年1月—2014年12月入住重症监护病房的重度烧伤患者,分析其临床基础资料及ICU住院时间、治疗费用情况。结果康复治疗早期介入下,重度烧伤患者ICU住院时间有逐年减少趋势,尤其在强化站立行走训练后,ICU住院时间显著缩短。ICU患者的康复治疗费用仅占ICU总治疗费用的3%左右。结论 ICU内开展重症烧伤患者康复治疗安全可行,可显著缩短患者的ICU住院时间,而医疗费用并未大幅度增加,值得在临床中推广。

微管损伤与缺氧心肌细胞线粒体损害的关系研究

目的探讨心肌细胞在缺氧条件下微管损伤与线粒体损害的关系。方法常规方法分离培养W istar乳鼠心肌细胞,分为正常对照组、缺氧组及缺氧微管解聚组,分别于缺氧30 m in、1 h对3组进行缺氧处理,并对缺氧微管解聚组进行特异性微管解聚剂秋水仙素解聚微管后采用流式细胞仪定量检测α-微管蛋白荧光强度变化,激光共聚焦显微镜检测α-微管蛋白及线粒体形态、分布及荧光强度变化。结果与正常对照组比较,缺氧组α-微管蛋白免疫荧光强度明显减弱(P<0.01);微管断裂,分布紊乱,线粒体分布亦出现紊乱,规律性基本丧失。与缺氧组比较,缺氧并微管解聚组微管断裂、分布紊乱、荧光强度减弱明显(P<0.01);线粒体分布弥散,完全失去规律性,基质变淡显著,荧光染色强度亦明显降低(P<0.01)。结论心肌细胞缺氧早期(30 m in)即出现微管损伤,说明微管损伤可能是导致心肌细胞线粒体损害的因素。

一种草药氯仿萃取水相提取物止血作用的实验研究

目的:观察一种促凝血草药氯仿萃取水相提取物HB的止血作用。方法:实验于2003-12/2004-12在解放军第三军医大学西南医院全军烧伤研究所国家重点实验室完成。健康家兔18只,体质量2.5～3.0kg;健康雄性Wistar大鼠70只,体质量(250±10)g;雄性昆明种小鼠78只,体质量(25±5)g。制备HB氯仿萃取-水相提取物后给动物腹腔注射。①将70只大鼠随机分为空白对照组(n=10,30mg/kg腹腔注射生理盐水)、阳性对照组(n=10,云南白药按2mg/(kg·d)灌胃)、HB高剂量给药组(n=30,分别选取10只动物按5,10,20mg/kg剂量腹腔注射)、HB低剂量给药组(n=20,分别选取10只动物按0.5,1mg/kg剂量腹腔注射)。观察给药10d后实验动物的血生化指标(凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、纤维蛋白原含量、凝血酶时间)及血小板计数;②将39只小鼠随机分为空白对照组、云南白药对照组(云南白药0.5mg/(kg·d)灌胃)和用药组(HB0.5mg/kg),每组13只。观察给药10d后小鼠的出血时间、同样的分组和干预方法观察小鼠的凝血时间。③将待试药设氯仿萃取水相提取物用药组、云南白药阳性对照组、生理盐水阴性对照组。18只家兔各取6只分别用于观察体表、肝脏及股动脉创面的止血实验,观察局部创面(皮肤、肝脏、股动脉)止血时间。结果:纳入健康家兔18只、健康雄性Wistar大鼠70只、雄性昆明种小鼠78只,均进入结果分析。①氯仿萃取水相提取物对大鼠血凝四项及血小板计数的影响:与空白对照组相比,HB氯仿萃取水相提取物腹腔注射可显著提高大鼠的血小板计数;HB高剂量给药组大鼠的凝血酶原时间明显缩短。②对小鼠出血时间及凝血时间的影响:与云南白药对照组及空白对照组相比,HB氯仿萃取水相提取物可显著缩短小鼠的出血时间[(250.2±53.3),(234.5±61.3),(100.2±27.9)s,P<0.01]及凝血时间[(202.5±50.2),(255.5±27.8),(141.8±37.6)s,P<0.01]。③对家兔局部创面的止血作用:家兔创面止血时间显著短于生理盐水阴性对照组及云南白药阳性对照组[皮肤:(41.20±6.21),(84.10±5.32),(74.80±4.73)s;肝脏:(50.20±3.39),(87.60±6.24),(74.50±5.19)s;股动脉:(62.60±4.50),(103.60±4.35),(98.20±6.07)s;P<0.01)。结论:HB氯仿萃取水相提取物具有良好的体内、外促凝血及创面止血作用。

心肌细胞牵张模型建立的实验研究

目的:机械信号的转导与感受成为生命科学研究的理论前沿,如何对细胞施加机械刺激是进行此领域研究的前提。建立体外培养的心肌细胞牵张模型是研究的目的。方法:实验于2003-11/2004-01在解放军第三军医大学创伤烧伤复合伤国家重点实验完成。采用胰酶消化法分离培养乳鼠心肌细胞,纯化后接种于硅酮膜上,依照10%的牵张强度对心肌细胞施加机械刺激,观察心肌细胞形态、培养液中乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)含量及碘化丙啶染色阳性细胞比例的变化。结果:10%牵张过程中,细胞沿受力方向排列。10%牵张后心肌细胞进一步铺展,伪足数目明显增加。牵张前后培养液中LDH含量犤培养12h(710.6±69.5)IU/L,牵张12h(769.8±66.7)IU/L犦及碘化丙啶染色阳性细胞比(牵张前0.53%,牵张12h后0.54%)无明显变化。结论:建立了较好模拟体内刺激强度的模型,并证实10%牵张对心肌细胞不是一种损伤因素,在某些方向还可能上调细胞功能。

大鼠骨髓间充质干细胞向表皮细胞分化的初步研究

目的 体外分离培养骨髓间充质干细胞，并探索表皮细胞生长因子诱导MSCs分化的潜能及条件。方法 采用直接贴壁法，分离培养大鼠股骨和胫骨骨髓间充质干细胞，应用免疫细胞化学法检测细胞CD44、CD106、CD29、CD90、CD34等，对分离的细胞进行鉴定。以10～40ng／ml的表皮生长因子处理第3代MSCs，观察细胞角蛋白的表达。用Western blot方法摸索integrin β1的表达与MSCs分化状态的关系。结果 原代培养的骨髓间充质细胞CD44、CDl06、CD29、CD90免疫细胞化学染色为阳性，CD34为阴性，符合骨髓间充质干细胞特征。MSCs经不同浓度的EGF体外诱导7d后，免疫细胞化学结果显示，EGF浓度为30ng／ml和40ng／ml时，细胞角蛋白出现阳性表达；体外诱导14d，呈角蛋白染色阳性的细胞比例进一步增加，同时integrin131表达量下降。结论 体外培养的MSCs在EGF诱导下，具有分化为表皮细胞的倾向，同时integrin β1可能在MSCs分化中具有一定的作用。

颗粒状脱细胞真皮基质的形态学特征及理化性能体外研究

目的研究颗粒状脱细胞真皮基质(particulate acellular dermal matrix,PADM)的体外形态学特征与理化性能。方法收集SD大鼠背部皮肤样本,采用本实验室的脱细胞方法制备片状脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)并分析其内胞核和DNA残留情况。将片状ADM切割成不同规格的PADM,并结合大体观察、组织学分析、电镜技术、激光粒度分析仪和傅里叶变换红外光谱仪检测其外观轮廓、形态学、粒径分布和胶原分子结构。并将其复合人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)体外培养24 h,观察PADM与HUVEC的黏附情况。结果脱细胞方法有效降低了ADM的DNA含量[(1.51±0.37)μg/mgvs(0.30±0.09)μg/mg]。制备的PADM为白色颗粒,外形近似于长方体或立方体,显微镜下HE染色观察显示颗粒内部胶原纤维束结构疏松。扫描电镜显示颗粒断面结构疏松,透射电镜显示胶原原纤维周期性横纹结构和均匀分布的胶原原纤维间隙。激光粒度分析仪检测显示其粒度分布集中,例如,规格为0.2 mm的PADM,其80%(d0.1～d0.9)的粒径分布于233～487μm。FTIR结果显示,PADM分别在1 659、1 549、1 239 cm-1处出现的特征吸收峰,表明其保留了胶原分子的α-helix、β-sheet和β-turn二级结构,且体外HUVEC较易黏附于PADM。结论室温条件下,切割法制备的新型PADM形态规则,粒径分布集中,胶原纤维束形态和胶原分子的二级结构保存良好。

溶葡萄球菌酶对创面肉芽组织抗菌效果的临床研究

目的研究溶葡萄球菌酶在体外和创面肉芽组织中对金黄色葡萄球菌等几种有代表性的常见创面感染菌的抗菌效果。方法用体外药敏试验观察了溶葡萄球菌酶对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和铜绿假单孢菌抗菌效果；并用组织细菌定量分析的方法分析了溶葡萄球菌酶对29例Ⅲ度面积10％～30％总体表面积（total body Surface area，TBSA）的烧伤患者残留创面肉芽组织中金黄色葡萄球菌的抗菌效果。结果溶葡萄球菌酶对金黄色葡萄球菌有很强的抗菌效果，对白色念珠菌也有明显的抗菌效果；对铜绿假单孢菌的抗菌效果较差。溶葡萄球菌酶纱布在烧伤残留创面连续使用3d后，能杀死肉芽组织中89．2％的细菌。证明溶葡萄球菌酶能有效控制肉芽组织中的细菌数量。同时，杀菌纱布所含成分是生物酶类，使用后未见全身不良反应。结论溶葡萄球菌酶除了对金黄色葡萄球菌有很强的杀菌作用外，对白色念珠菌也有很好的杀菌作用，溶葡萄球菌酶可以作为控制中晚期烧伤残余创面金黄色葡萄球菌感染非常有效的局部用药。

人CTLA-4Ig融合基因减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体的构建及表达

目的构建能稳定表达人CTLA4 Ig融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体,探讨其在哺乳动物细胞中的表达并对表达产物进行鉴定。方法用touchdown PCR法扩增CTLA-4 Ig融合基因,将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-CTLA-4 Ig,用电穿孔仪转入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207。将表达质粒转染COS-7细胞,SDS-PAGE、W estern b lot检测转染细胞裂解上清中目的蛋白的表达。结果酶切鉴定和基因序列测定显示重组质粒构建成功。在pcDNA3.1(+)-CTLA-4 Ig质粒转染后48 h细胞裂解上清中,检测到CTLA-4 Ig融合蛋白的表达,该蛋白能与抗人CTLA-4单抗特异结合。结论成功构建了能稳定表达人CTLA4 Ig融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体,并在哺乳动物细胞中成功表达有生物学活性的重组人CTLA-4 Ig蛋白。

c-jun反义基因重组体转染对缺氧复合烧伤血清刺激下大鼠心肌细胞的保护作用

目的 观察c jun反义基因重组体转染对缺氧复合烧伤血清刺激下大鼠心肌细胞的保护作用。 方法 培养大鼠心肌细胞 ,分为 :(1)正常对照组 ;(2 )转染组 :构建c jun反义基因重组体并转染入心肌细胞 ,随后进行缺氧复合烧伤血清刺激 ;(3)非转染组 :仅进行缺氧复合烧伤血清刺激 ,不作其他处理。于刺激后 1、3、7h,采用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)检测c junmRNA的表达变化 ;用Westernblot检测c jun蛋白、肌钙蛋白T(TnT)和 β 微管蛋白的表达变化 ;在光镜和电镜下观察心肌细胞形态结构改变。 结果 (1)与正常对照组比较 ,非转染组c junmRNA与蛋白表达显著 ,转染组较非转染组显著下降。 (2 )与正常对照组比较 ,非转染组TnT与 β 微管蛋白表达显著下降 ,转染组较非转染组明显回升。 (3)转染组心肌细胞骨架结构基本保持完好 ,偶见断裂与溶解。非转染组骨架网状结构紊乱、溶解与断裂 ,呈颗粒状。 结论 缺氧复合烧伤血清刺激可使大鼠心肌细胞c jun表达上调 ,进而引起心肌细胞损伤 ,c

烧伤患者应用亚胺培南/西司他丁钠盐或头孢哌酮后部分炎症介质水平的改变

目的 观察应用亚胺培南 /西司他丁钠盐 (IPM)或头孢哌酮 (CPZ)治疗烧伤感染患者后其部分血浆炎症介质水平的变化及差异。 方法 选择 13例革兰阴性杆菌感染的烧伤患者 ,其中7例应用IPM(IPM组 ) ,6例应用CPZ(CPZ组 )。于用药前及用药后 2、12、2 4、4 8、72h抽取静脉血 ,检测血浆内毒素 /脂多糖 (LPS)、肿瘤坏死因子α(TNF α)和白细胞介素 6 (IL 6)水平的变化 ,并进行相关性分析。结果 用药后 2h两组患者血浆LPS水平升高 ,其中CPZ组较用药前升高了 (13.95±10 .2 9)pg/ml( P <0.0 5),升高幅度大于IPM组 ,随后逐渐降低。CPZ组用药后 2hTNF α水平为(0 .86± 0 .16 )ng/ml,明显高于用药前 [(0 .38± 0 .15 )ng/ml]及IPM组 [(0 .4 7± 0 .13)ng/ml](P <0.0 1)。两组患者用药后各时相点血浆IL 6水平与用药前比较及组间比较 ,差异均无显著性意义 (P >0.0 5)。两组患者TNF α水平与LPS、IL 6水平呈显著正相关 (P <0.0 0 1～ 0.0 1)。结论 应用不同种类抗生素治疗革兰阴性杆菌感染的烧伤患者时 ,可诱导细菌释放LPS、TNF α,其释放量存在一定差异。TNF α的产生与LPS、IL 6的释放存在相关性。

冰石愈伤软膏治疗Ⅱ度烧伤患者的Ⅱ期临床试验

目的 观察应用冰石愈伤软膏治疗Ⅱ度烧伤创面及残余小创面的临床有效性与安全性。 方法 采用平行、单盲、完全随机分组方法 ,共观察病例 2 0 0例 ,试验组和对照组各 10 0例。对照组选用京万红软膏 ,试验组选用冰石愈伤软膏。观察用药后的疗效和安全性指标。 结果 (1)浅Ⅱ度创面用药后第 7天愈合率和愈合时间 :试验组分别为 6 7.35 %和 10 .0 8d,对照组分别为 4 5 .0 1%和 12 .6 6d。(2)深Ⅱ度创面用药后第 15天愈合率和愈合时间 :试验组各为 87.75 %和 15 .87d,对照组各为 70 .90 %和 18.81d。试验组和对照组平均愈合时间分别为 12 .5 3d和 15 .11d,试验组未见毒副作用和不良反应。结论 冰石愈伤软膏用于Ⅱ度烧伤创面的治疗是安全、有效的。

hITF毕赤酵母表达载体的构建及分泌表达

目的构建hITF毕赤酵母分泌型表达载体,表达重组hITF,为功能研究奠定基础。方法通过PCR获得hITFcDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pGAPZαA分泌信号下游,得到重组载体pGAPZαA-hITF。BspHⅠ线性化后氯化锂转化进入X-33,Zeoc in筛选转化酵母菌,PCR鉴定目的基因。阳性转化子经摇瓶表达,取上清TCA沉淀后做Tric ine SDS-PAGE分析及W estern b lot检测。结果经测序及PCR证实,hITFcDNA准确插入酵母表达载体pGAPZαA中,氯化锂转化后,重组载体通过同源重组整合进入酵母基因组中。Tric ine SDS-PAGE分析证明hITF的分子量约为10×103,W estern b lot分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性。结论成功构建出酵母表达载体pGAPZαA-hITF,获得重组hITF,为深入研究hITF奠定了基础。