重组腺病毒介导反义p38α基因抑制烧伤复合缺氧条件下乳鼠心肌细胞凋亡的研究

目的 探讨烧伤血清复合缺氧条件下乳鼠心肌细胞p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）活化与细胞凋亡之间的关系.方法 采用原代培养的乳鼠心肌细胞,按照处理因素不同分为3组：正常对照组细胞自然生长;烧伤缺氧组细胞给予烧伤血清＋缺氧刺激（含10%的40%总体表面积Ⅲ度烫伤大鼠伤后6 h血清的DMEM/F12培养液＋1%O2、5%CO2和94%N2）;反义阻断组在细胞转染反义p38α重组腺病毒（AD-ASp38α）后给予烧伤血清＋缺氧刺激.细胞培养6 h后,采用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测p38磷酸化水平;采用DNA片断和流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况.结果 与正常对照组比较,烧伤缺氧组p38磷酸化水平（灰度值）明显提高（8.68±0.14比3.21±0.05,P＜0.01）,细胞凋亡率明显增高[（50.367±0.451）%比（2.063±0.111）%,P＜0.01];心肌细胞转染AD-ASp38α后,p38磷酸化水平（灰度值）明显下降（5.46±0.16比8.68±0.14,P＜0.01）,细胞凋亡率明显降低[（13.200±0.121）%比（50.367±0.451）%,P＜0.01].结论 烧伤血清复合缺氧条件下通过促使p38MAPK活化导致心肌细胞凋亡增多;阻断p38MAPK信号转导通路可减轻严重烧伤早期心肌细胞的损伤.

抗内毒素Fab’体外对LPS的拮抗作用

目的探索防治烧伤内毒素血症的新措施。方法通过改良水溶法(water dissolve,WD)从蛋黄中提取、纯化特异性抗内毒素免疫球蛋白IgY,再用胃蛋白酶将IgY酶切为Fab’,采用中和试验检测抗LPS-Fab’对不同细菌来源的LPS的拮抗作用,测定LPS对人体外周单核细胞攻击时TNF-a,IL-6的含量。结果抗LPS-Fab’对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、普通变形杆菌四种临床常见致病菌来源的LPS,均有拮抗作用,通过测定TNF-a,IL-6的变化证实抗内毒素Fab’可以保护LPS对人体外周单核细胞的攻击。结论抗内毒素Fab’体外有明显的拮抗LPS的作用。