CD44^+CD24^(-/low)乳腺癌干细胞的流式分选及其肿瘤干细胞特性的初步鉴定

目的:通过表面标志分选法富集乳腺癌干细胞,并初步鉴定其肿瘤干细胞特性。方法:采用流式细胞分选术从人乳腺癌细胞系MCF-7中分选CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞,并进行干细胞比例分析;用免疫荧光法检测、比较分选获得的细胞和对照细胞的干性和分化标记物Oct-4、SOX-2、CK-18和α-SMA的表达状态。结果:分选获得的CD44+CD24-/low乳腺癌干细胞阳性比例达90%以上;免疫荧光检测结果显示,CD44+CD24-/low细胞亚群比non-CD44+CD24-/low细胞亚群高表达干细胞转录因子Oct-4、SOX-2,低表达分化因子CK-18、α-SMA;体外实验表明,CD44+CD24-/low细胞亚群具有更强的成球生长能力,并具有双向分化潜能。结论:CD44+CD24-/low表面标记物分选的方法可以富集高纯度的乳腺癌干细胞,且呈现干性因子Oct-4和SOX-2高表达。

SiRNA干扰技术观察HDAC3对胶质瘤细胞U87-MG的影响

目的探索组蛋白去乙酰化酶3（HDAC3）基因对胶质瘤细胞U87-MG增殖、凋亡、细胞周期以及迁移的作用。方法人胶质瘤细胞株U87-MG，应用siRNA干扰技术分别导入HDAC3干扰质粒和空载对照质粒，蛋白印迹实验（Wesiemblot）检测干扰效果，应用CCK．8增殖实验、成球实验、AnnexinV-FITC细胞凋亡试剂盒、碘化丙啶染色方法、Transwell小室实验和划痕实验，分别检测HDAC3基因干扰后对胶质瘤细胞株增殖、凋亡、细胞周期和迁移等功能的影响。结果Westernblot结果显示，干扰后细胞株U87-MG中的HDAC3表达明显减弱；CCK-8增殖实验和成球实验，与对照组相比较，胶质瘤细胞株中干扰HDAC3后细胞增殖曲线明显下降，U87-MG对照组和U87．MGSi的14d成球总数目分别为23和7（P〈0．05）；细胞凋亡实验，U87-MG对照组和U87-MGSi的早期凋亡率分别为（1．40±0．29）％和（9．26±2．32）％（P=0．004）；周期实验，U87-MG对照组和U87-MGSi的G0／G1期百分率分别为80．34％和88．37％，（t检验，P〈0．05）；Transwell小室实验和划痕实验，胶质瘤细胞株U87-MG中干扰HDAC3后细胞迁移能力明显下降。结论HDAC3作为一种致癌基因，通过调控细胞G0／G1期参与胶质瘤细胞的增殖、凋亡和迁移。