皮肤混合瘤临床病理分析

目的研究皮肤混合瘤(mixed tumor of the skin,MTS)的临床及组织病理特点。方法回顾性归纳分析本院1980-2007年26例MTS的临床病理资料。结果26例患者中23例为大汗腺性MTS,其中8例出现毛囊和/或皮脂腺分化,5例呈软骨样变,8例出现多少不等的脂肪组织,8例出现浆细胞样细胞,并有1例出现明显软骨及骨样化生;另外4例小汗腺性MTS出现透明细胞,26例MTS肿瘤间质成分均有不同程度的黏液样物质沉积。结论MTS可向毛囊和/或皮脂腺分化,间质表现多样化。

TCF4对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株生物学行为的影响

目的探讨T细胞因子4(T cell factor 4,TCF4)小干扰RNA(siRNA)对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株TCF4基因表达的抑制作用及对细胞增殖、迁移、侵袭及周期的影响。方法转染TCF4 siRNA至A431细胞株。应用RT-PCR检测A431细胞TCF4 mRNA的表达,Western blot检测TCF4蛋白的表达,CCK-8方法检测上述各组细胞增殖率(1、2、3、4 d及5 d),小室迁移实验检测细胞迁移情况,Transwell实验检测侵袭情况,流式细胞仪检测细胞周期(24 h)。结果与未转染A43l细胞株和转染空载体的A431细胞株比较,转染TCF4 siRNA表达载体1、2、3、4 d及5 d的细胞增殖率明显降低(P<0.05);TCF4 siRNA表达载体组细胞迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05);细胞周期分析发现转染TCF4siRNA使得A431细胞株出现明显的G2/M期阻滞现象。结论采用TCF4特异性siRNA能够抑制皮肤鳞状细胞癌TCF4的表达,从而抑制皮肤鳞状细胞癌的增殖。

无血清K-SFM培养条件下大鼠毛囊Bu lge细胞生物学特性的研究

目的研究无血清K-SFM培养条件下,大鼠毛囊Bu lge细胞的生物学特性。方法分离大鼠毛囊Bu lge细胞,分别置于无血清的K-SFM培养基(实验组)及有血清DMEM/F12培养基(对照组)的培养条件下培养。比较Bu lge细胞在两种培养体系中的生长增殖和K19的表达状况。结果无血清培养的Bu lge细胞在克隆形成率及K19的表达率均明显高于对照组(P<0.05)。结论体外培养和扩增大鼠毛囊Bu lge细胞,无血清的K-SFM培养基较有血清DMEM/F12培养基更有利于Bu lge细胞的扩增和表型的维持。

HSPC016基因重组工程菌发酵研究

目的 研究人毛乳头细胞HSPC0 16基因重组工程菌的发酵工艺。方法 采用德国B Brau公司C 10型5L发酵罐批次发酵,通过对能影响工程菌生长和目的蛋白表达的条件如不同培养基、不同葡萄糖浓度、营养物补充、pH及溶氧调节等进行优化,确定合适的培养条件和发酵工艺。结果 在优化条件下,菌体单产可达45 g/L ,目的蛋白表达量约占总蛋白的18%。结论 此发酵工艺可以提高人毛乳头细胞HSPC0 16/pET 2 8a(+ )基因重组工程菌的收获和目的蛋白表达。

PPARγ2表达促毛囊bulge细胞向皮脂腺定向分化的研究

目的探讨毛囊bulge细胞向皮脂腺细胞分化的机制。方法构建携带过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(peroxisomeproliferatoractivationreceptorγ2,PPARγ2)基因的绿色荧光蛋白(GFAP)质粒,通过质脂体转染到体外分离培养毛囊bulge细胞中,以转染空质粒的毛囊bulge细胞为对照,观察细胞的分化情况,运用免疫细胞化学检测细胞PPARγ和上皮膜抗原(epithelialmembraneantigen,EMA)的表达,油红O染色观察细胞脂滴合成情况。结果荧光显微镜下观察到已转染质粒的细胞呈现绿色荧光,能稳定表达PPARγ2mRNA,该细胞分化3周左右,部分细胞胞浆内出现脂滴,PPARγ、EMA及油红O染色阳性,而对照组为阴性,细胞内未见脂滴。结论毛囊bulge细胞可以分化为皮脂腺细胞,PPARγ2基因在其中起着重要作用。

单克隆抗体Mab03.2C1-C2靶抗原性质的初步研究

目的分析抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单抗M ab03.2C1-C2靶抗原的性质,探讨该抗原用于实验室检测的可行性。方法制备单克隆抗体,通过SDS-PAGE及W estern B lotting法分析该单抗所识别的抗原的分子量。体外诱导形成不同长度的芽管,分析其表面靶抗原的形成情况。不同的生化方法处理芽管,采用间接免疫荧光方法,对单抗靶抗原表位性质进行分析。取口腔念珠菌病患者的真菌涂片标本,用IIF方法观察体外诱导培养之芽管与体内白念芽管表面抗原分布异同。结果体外诱导30 m in后白念珠菌芽管表面方可检测到靶抗原。体内白念菌丝与体外诱导菌丝表面靶抗原分布不同。靶抗原表位可能位于N-糖链上。结论M ab03.2C1-C2靶抗原为白念菌丝形成过程中生成的新成分,可能参与白念致病过程。靶抗原为糖蛋白,抗原性显著,对临床应用于系统性白念珠菌感染的检测有意义。

CTLA4Ig抑制银屑病外周血单个核细胞增殖的体外研究

目的 研究CTLA4Ig在银屑病外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells ,PBMCs)增殖中的作用。方法 PBMC标本取自 3 3例寻常型银屑病患者和 2 0名健康献血者 ,利用植物血凝素 (phytohemagglutinin ,PHA)、脂多糖(lipopolyaccharide ,LPS)、金葡菌肠毒素B(staphylococcalenterotoxinB ,SEB)刺激增殖 ,在加入或未加入CTLA4Ig情况下 ,观察细胞形态并检测 3 H TdR掺入量。结果 显示CTLA4Ig对PHA、LPS有抑制作用 ,并呈剂量依赖关系 ;而CTLA4Ig浓度只有高于 5 μg/ml时 ,对SEB才有抑制作用 ,且可完全抑制。 结论 CTLA4Ig对PHA、LPS、SEB刺激下的银屑病PBMC增殖反应有明显的抑制作用 。

雄激素受体在大鼠触须毛囊干细胞中的表达研究

目的探讨在毛囊周期的3个不同时期(生长期、退化期和静止期)中大鼠毛囊干细胞中以及体外培养的毛囊干细胞中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达规律及其意义。方法采用免疫组织化学方法检测AR表达,采用总RNA提取法及RT-PCR检测AR mRNA的表达情况。结果①在体情况下,生长期、退化期和静止期毛囊干细胞中均有AR的表达,AR mRNA在生长期呈强表达,而在退化期和静止期表达微弱;②体外情况下,培养的毛囊干细胞中有AR的表达。结论毛囊干细胞在整个毛囊周期中均有AR的表达,是雄激素作用的靶细胞;AR mRNA在毛囊周期中呈规律性表达,提示雄激素与其受体的相互作用可能对毛囊干细胞的分化具有重要的促进作用。

单抗Mab03.2C1C2影响白念珠菌芽管形成及粘附作用的实验研究

目的 观察抗白念珠菌芽管单抗Mab0 3 .2C1C2在体外对白念珠菌感染的保护性作用。方法 将不同浓度的Mab0 3 .2C1C2分别与白念珠菌孢子悬液、白念珠菌孢子和人口腔粘膜上皮细胞混合液、白念珠菌孢子和胎儿脐静脉内皮细胞混合液共同孵育,观察Mab0 3 .2C1C2对白念珠菌芽管生成的抑制作用及其对白念珠菌对上皮细胞、内皮细胞粘附的抑制作用。结果 Mab0 3 .2C1C2能显著降低白念珠菌芽管生成率及在芽管形成条件下对上皮细胞、内皮细胞的粘附,其抑制作用与该单抗的浓度成正比。结论 Mab0 3 .2C1C2在体外能抑制白念珠菌芽管的形成,通过抑制白念珠菌芽管的形成而抑制白念珠菌对上皮细胞、内皮细胞的粘附,降低白念珠菌的侵袭力。

青藤碱对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞NF-κB的抑制作用

目的观察青藤碱(sinomenine,SN)对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜细胞核因子-κB(NF-κB)的DNA结合活性及核转位的影响,以阐明该药抗炎的可能机制。方法以CIA大鼠为模型,收集膝关节滑膜细胞体外培养,设正常对照组、CIA组、CIA+甲氨喋呤10μmol/L(阳性对照组)、CIA+SN50μmol/L组、CIA+SN500μmol/L组。应用荧光标记与激光共聚焦扫描显微镜检测滑膜细胞NF-κBp65亚基核转位,电泳迁移率改变分析法(EM-SA)检测NF-κB与DNA序列的结合活性。结果与正常对照组相比,CIA大鼠滑膜细胞可见明显的p65亚基核移位,NF-κB的DNA结合活性显著升高(P<0.01),SN在50μmol/L及500μmol/L时可呈浓度依赖性地抑制CIA大鼠滑膜细胞p65亚基核转位及NF-κB的DNA结合活性,甲氨喋呤在10μmol/L时可下调NF-κB的DNA结合活性但未抑制p65亚基的核转位。结论SN抑制滑膜细胞内NF-κBp65核转位和NF-κB的DNA结合活性为其抗炎机制之一。

毛乳头细胞凝集性生长对诱导毛囊样结构形成能力的影响

目的 以细胞外基质成分纤维连接蛋白促进培养的人头皮毛乳头细胞凝集性生长行为 ,观察毛乳头细胞的凝集性生长对诱导毛囊形成能力的影响。方法 传代培养的人头皮毛乳头细胞经细胞外基质纤维连接蛋白预处理后 ,促进形成凝集性生长团 ,再与毛囊上皮细胞共同移植于裸鼠皮下 ,分别于 8、12周进行组织学检查 ,观察毛囊形成及分化程度。结果 8周后纤维连接蛋白预处理的毛乳头细胞组可见有毛囊样结构形成 ,未处理组仅见松散细胞团 ;12周后两组均可见有毛囊样结构形成 ,但纤维连接蛋白预处理组较未处理组诱导形成毛囊样结构分化更成熟 ;真皮成纤维细胞组未见有毛囊样结构形成。结论 毛乳头细胞的凝集性生长特性对其诱导毛囊形成的能力有密切的关系 ,细胞呈凝集性生长后 ,其生物学功能增强。

应激生活事件和斑秃发生风险的相关性调查

目的调查斑秃患者发病和精神因素的相关性,揭示精神因素在斑秃发病中的潜在作用。方法收集2008年3月至2009年3月西南医院皮肤科确诊斑秃患者和健康人群,采用病例对照研究方法,记录研究对象的流行病学情况,采用Thomas Holmes和Richard Rahe社会再适应量表调查斑秃患者发病6个月前应激生活事件及健康对照填表前6个月的应激生活事件,统计学分析斑秃发病和应激生活事件的相关性。结果斑秃患者应激生活事件的发生率与患者性别及斑秃类型无统计学差异(P>0.05)。51.34%的斑秃患者在发病前6个月经历过2项以上应激生活事件,32.05%的对照在填表前6个月经历过2项以上应激生活事件,两者差异有统计学意义(P<0.01)。主要的应激生活事件为睡眠改变、个人习惯改变、居住环境改变、家庭问题、工作问题、学习问题和财政问题。斑秃患者组的SRRS评分高于健康对照组(P<0.01),斑秃患者发病前应激状态明显高于健康对照。经多因素Logistic回归分析,睡眠改变、学习问题、个人习惯改变和家庭问题应激生活事件是斑秃发生的危险因素。结论应激生活事件对斑秃的发生起着一定作用,应激诱发斑秃机制将有助于斑秃防治措施的开发。

复方利多卡因乳膏在白癜风自体表皮移植术中的临床应用

近年来,自体表皮移植术治疗白癜风在临床上已得到广泛应用,已成为治疗稳定期局限型白癜风的有效治疗方法[1]。但在治疗过程中,因负压吸疱及表皮磨削产生的疼痛常常使患者难以忍受,影响治疗的顺利进行。我科术前采用复方利多卡因乳膏表面麻醉的方法,取得满意疗效报告如下。1资料与方法1.1一般资料收集2011年1月至2012年12月于西南医院皮肤科门诊①确诊为白癜风,且为局限型,稳定期（至少3个月无扩大或新发皮损）;②皮损局限于光滑部位,且皮损面积均〈20 cm2;

人毛乳头细胞在不同传代时期某些细胞因子表达的变化

目的观察毛乳头细胞在体外培养条件下的生长特性,为毛囊重建提供参考资料。方法采用二步酶消化法分离正常人头皮毛囊的毛乳头细胞,在体外进行传代培养,用免疫组化方法观察不同传代毛乳头细胞生长因子表达的差异。结果高代培养毛乳头细胞逐渐丧失其凝集性生长的特性,生长因子的表达逐渐消失。结论毛乳头细胞的生长及其特性的保持受许多因素的影响,体外培养的毛乳头细胞与体内有差异。低代毛乳头条件培养基可恢复毛乳头细胞部分生长特性。

正常人黑素细胞体外培养及生物学鉴定

目的体外分离、培养正常人表皮中的黑素细胞并对其进行生物学鉴定。方法在体外黑素细胞常规培养基中以TPA/bFGF/IBMX为基本添加剂,用胰蛋白酶消化法和G418从正常人表皮中纯化黑素细胞,用多巴(Dopa)染色、黑素含量测定、酪氨酸酶活性测定、免疫组化染色等方法对体外培养的黑素细胞的形态、结构和功能进行观察。结果多巴染色、黑素含量测定、酪氨酸酶活性测定及免疫组化染色结果均表明培养黑素细胞的生物学功能正常,保持正常的生物学特性。结论用TPA/bFGF/IBMX作为添加剂可在体外进行正常黑素细胞的纯培养,体外培养的黑素细胞的结构和功能保持正常的生物学特性。

二氢卟吩e6和5-氨基酮戊酸对恶性黑素瘤裸鼠移植瘤的PDT疗效观察

目的在恶性黑素瘤动物模型上观察二氢卟吩e6(Ce6)和5-氨基酮戊酸(5-ALA)的光动力学治疗(PDT)效应。方法于裸鼠的右后肢腋下注射A-375恶性黑素瘤细胞悬液0.1ml(约2×106个细胞),接种部位出现黄白色结节表明动物模型建立成功。共有27只荷瘤裸鼠接受半导体激光(波长652nm)照射,每部位光照剂量均为100J/cm2。实验裸鼠照射前分别用10%5-ALA外敷肿瘤部位2h、Ce6腹腔内给药(7.5mg/kg)1h或5-ALA外敷联合Ce6腹腔内注射进行处理。1周后处死裸鼠,观察各组织器官肿瘤转移情况,剥离肿瘤组织并称量,将各裸鼠的瘤体、肝、脾、肺、肾做组织病理学检查。结果各治疗组肿瘤重量与对照组之间均有显著性差异(P<0.01),而各治疗组之间组间比较无显著性差异(P>0.05)。组织病理学检查显示PDT后1周肿瘤部位出现干燥、结痂、组织坏死,镜下见细胞坏死、崩解、皮下血栓、细胞轮廓模糊。各治疗组中发现有肿瘤转移情况。结论动物实验表明应用Ce6和5-ALA产生的PDT效应能有效杀伤恶性黑素瘤,但不能抑制恶性黑素瘤的转移。

妊娠期梅毒血清学阳性患者的处理与妊娠结局

目的探讨妊娠期梅毒血清学阳性患者的诊治及妊娠结局,降低先天性梅毒发生率。方法回顾性分析我院妇产科2004年1月至2005年9月引产和分娩的3105例孕妇的检查结果。结果在3105例孕妇中,TP(treponemapallidum)阳性者21例,TP阳性率为6.76‰,其中TRUST(梅毒甲苯胺红不加热血清试验)同时阳性者7例(33.33%),TRUST阴性者6例(28.57%),仅2例为Ⅰ期梅毒,出现皮损、溃疡、软下疳等;在孕期发现的18例中,11例(61.11%)TRUST阳性经过驱梅治疗;21例TP阳性孕妇中,引产5例,继续妊娠并分娩的16例中,剖宫产13例,自然分娩3例,平均孕龄(267.44±11.00)d,所有新生儿出生时Apgar评分均为10分;脐血查TP阳性3例和TRUST阳性者2例,均未出现先天性梅毒临床表现,有5例新生儿转儿科诊治(其中2例驱梅治疗,2例早产、1例发绀)均健康出院。结论在妊娠早、中期发现TP阳性患者,如经过正规检查和驱梅治疗,可获得良好的妊娠结局。

人CTLA-4Ig融合基因减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体的构建及表达

目的构建能稳定表达人CTLA4 Ig融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体,探讨其在哺乳动物细胞中的表达并对表达产物进行鉴定。方法用touchdown PCR法扩增CTLA-4 Ig融合基因,将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-CTLA-4 Ig,用电穿孔仪转入减毒鼠伤寒沙门菌SL7207。将表达质粒转染COS-7细胞,SDS-PAGE、W estern b lot检测转染细胞裂解上清中目的蛋白的表达。结果酶切鉴定和基因序列测定显示重组质粒构建成功。在pcDNA3.1(+)-CTLA-4 Ig质粒转染后48 h细胞裂解上清中,检测到CTLA-4 Ig融合蛋白的表达,该蛋白能与抗人CTLA-4单抗特异结合。结论成功构建了能稳定表达人CTLA4 Ig融合基因的减毒鼠伤寒沙门菌真核表达载体,并在哺乳动物细胞中成功表达有生物学活性的重组人CTLA-4 Ig蛋白。