急性呼吸窘迫综合征肺泡上皮屏障损伤的研究进展

肺泡上皮屏障和肺微血管内皮屏障是公认的肺部两大生理屏障。近年来逐渐认识到肺损伤过程中,肺泡上皮屏障比肺微血管内皮屏障具有更强的抵抗力,因此促进肺泡上皮屏障的修复对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者肺损伤的改善极为重要,而这一治疗又必须建立在对ARDS肺泡上皮屏障损伤的具体机制深入研究的基础上。肺表面活性物质、紧密连接、钠水转运系统作为肺泡上皮屏障的主要成分,ARDS时对这些成分的直接破坏以及炎症细胞和介质的活化、释放导致的间接破坏,都造成它们的结构基础、成分以及功能发生改变,肺泡上皮屏障受到严重损害,进而肺水肿液渗出。因此本文将从这几大主要成分着手,对ARDS肺泡上皮屏障的损伤作一简要综述。

油酸和内毒素两次打击大鼠急性肺损伤动物模型研究

目的 采用油酸和内毒素先后两次致伤大鼠 ,建立两次打击急性肺损伤动物模型。方法 油酸 (0 .2ml/kg)经尾静脉注入 ,伤后 1、4、12和 2 4h给予小剂量大肠杆菌脂多糖 (LPS ,2mg/kg)再次打击。结合动脉血气分析、外周血白细胞计数与分类变化及肺组织病理观察 ,评估两次打击大鼠急性肺损伤模型。结果 油酸致伤 4h加LPS 2次打击大鼠 ,PaO2 降低、外周血白细胞数增多和肺组织损伤最严重 ,与对照组比较相差显著。结论 油酸加LPS两次打击大鼠急性肺损伤模型 ,能较好地反映油酸致伤后第二次小剂量内毒素打击引发严重肺损伤的病理变化。

雷公藤对哮喘豚鼠嗜酸性细胞凋亡及IL-5和GM-CSF mRNA表达的研究

目的：探讨雷公藤对哮喘豚鼠嗜酸性细胞（ Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ， Ｅｏｓ）凋亡及与白介素５（ Ｉ Ｌ５）、粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子（ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ）ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达的作用。方法：实验豚鼠分为哮喘组、雷公藤治疗组（处理组）和正常对照组。采用原位细胞凋亡（ Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ）和原位杂交技术分别检测豚鼠支气管肺泡灌洗液（ Ｂ Ａ Ｌ Ｆ）中的 Ｅｏｓ 的凋亡率和肺组织 Ｉ Ｌ５、 Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达。结果：哮喘组 Ｅｏｓ 凋亡率显著低于处理组和对照组（ Ｐ＜ ０．０５）。哮喘组肺组织 Ｉ Ｌ５ 和 Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达强度均显著高于处理组和对照组（ Ｐ＜ ０．０１）。哮喘组 Ｂ Ａ Ｌ Ｆ中 Ｅｏｓ凋亡率与肺组织 Ｉ Ｌ５、 Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达强度呈显著负相关（ｒ＝ － ０．６２ 和－ ０．５６， Ｐ＜０．０５）。结论：哮喘豚鼠肺组织 Ｉ Ｌ５、 Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ表达增强，可能是 Ｅｏｓ 凋亡异常的重要原因。雷公藤甲素能抑制哮喘豚鼠 Ｉ Ｌ５、 Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ表达，诱导 Ｅｏｓ 凋亡，在抗哮喘气道炎症中具有潜在的应用价值。

慢性缺氧大鼠呼吸肌某些代谢酶活性变化

目的：观测慢性缺氧大鼠呼吸肌氧化和酵解酶活性变化，探讨其在慢性缺氧适应中的意义。方法：建立大鼠慢性常压和减压间断缺氧模型，分别测定肋膈肌和脚膈肌已糖激酶（ＨＫ）、柠檬酸合成酶（ＣＳ）、３－羟酰辅酶Ａ脱氢酶（ＨＡＤＨ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活力，并与肢体肌肉比较。结果：肋膈肌氧化酶ＣＳ、ＨＫ和ＨＡＤＨ活性均显著增加，脚膈肌和肋间肌也有不同程度增加，腹直肌和肢体无显著变化。所有肌肉ＬＤＨ活性无显著变化。结论：慢性缺氧适应后，膈肌氧化代谢能力增强，不同肌肉因功能要求不同其适应性变化也有差异。

川芎嗪防治模拟高原犬急性肺损伤的实验研究

目的 探讨川芎嗪对模拟高原犬急性肺损伤的防治作用。方法在模拟4 000 m高原下,将21只犬随机分为对照组、致伤组及川芎嗪治疗组,观察外周血WBC、血气分析、肺含水量及肺组织形态变化。结果川芎嗪可抑制犬伤后外周血WBC下降,减轻肺内炎性细胞浸润及肺水肿,但对动脉血氧分压(PaO2)下降无明显改善。结论川芎嗪可部分改善脂肪栓塞所致的急性肺损伤。

重组LBP真核表达载体免疫制备兔抗人LBP抗体的研究

目的 制备兔抗人脂多糖结合蛋白 (LBP)多抗 ,并研究其生物学特性。方法 用LBP基因的真核表达载体pEFBOS LBP作为抗原免疫制备兔抗人LBP的抗血清。用饱和硫酸铵盐析纯化后 ,通过ELISA检测抗体的效价 ;Westernblot鉴定其特异性 ;流式细胞术观察LBP及其抗体对荧光标记脂多糖 (LPS)与单核细胞结合的影响 ;ELISA检测LBP及其抗体对LPS诱导肺泡巨噬细胞分泌TNFα的影响。结果 用LBP基因免疫制备的兔抗LBP多抗与LBP具有良好的结合活性 ;有较高的效价 ;LBP增强LPS与单核细胞结合的作用能被该抗体阻断 ;LBP增强LPS诱导肺泡巨噬细胞分泌TNFα的作用也能被该抗体阻断。

缺氧性肺动脉高压大鼠血浆3种血管舒张肽的实验研究

目的 探讨缺氧对肾上腺髓质素 (AM)、降钙基因相关肽 (CGRP)和C 型利钠肽 (CNP)合成分泌的影响及它们的相互关系。方法 制备大鼠缺氧性肺动脉高压模型 ,分为缺氧 10、2 0、3 0d组和平原对照组 ,分别测量肺动脉压力和右心室收缩最大上升速率。应用放射免疫法检测血浆中AM、CGRP和CNP含量的动态变化。结果 缺氧促进实验大鼠肺动脉压和右心室最大上升速率升高 ;促进血浆AM、CNP升高和CGRP下降 ,AM与CNP呈正相关 ;与CGRP呈负相关。结论 缺氧导致肺动脉高压形成 ;右心功能随肺动脉高压的变化出现代偿反应 ;AM、CGRP和CNP参与缺氧性肺动脉高压的病理生理过程 ;AM、CGRP和CNP的动态变化可作为判断病情的指标。

低氧性肺动脉高压大鼠肺组织相关凋亡基因表达的研究

目的 探讨bcl 2、bax、Fas、FasL凋亡相关基因在低氧肺动脉高压大鼠肺组织中的表达及其与发病的关系。方法 60只Wistar大鼠随机分为 5组 :正常对照组 ;低氧肺动脉高压组 ;血晶素组 ;锡原卟啉组 ;低浓度CO组 ;每组 12只。采用组织的原位细胞凋亡、DNA片段检测 ,免疫组织化学染色 ,原位杂交等方法进行检测。结果 低浓度CO组和血晶素组肺组织有典型的DNA梯带 ,bcl 2、bax、Fas、FasL免疫组化显示的表达呈强棕黄色 ,比低氧组均显著升高 ,原位杂交可见 ,低浓度CO组和血晶素组肺内支气管和小血管壁细胞胞浆呈强的紫蓝色 ,bcl 2表达呈棕黄色 ,比低氧组降低 ,原位杂交可见呈紫蓝色。结论 CO可以调节bcl 2、bax、Fas和FasL凋亡基因的表达 ,而这些凋亡基因又通过不同途径参与低氧肺动脉高压肺组织的细胞凋亡的调节 ,并在慢性阻塞性肺疾病的发生与发展中发挥重要作用。

CO作用后大鼠肺血管细胞增殖和凋亡状况的研究

目的 通过研究CO和低氧作用后大鼠肺血管细胞增殖和凋亡状况 ,探讨低氧肺动脉高压的发病机制及防治措施。方法 应用免疫组织化学、原位末端标记及Western杂交等方法检测常压低氧大鼠肺血管壁细胞增殖、凋亡及c myc基因的表达状况。结果 正常组、低氧和锡原卟啉组、低浓度CO和血晶素组大鼠肺动脉均存在增殖和凋亡的阳性细胞 ,两类细胞在肺内呈不均匀散在分布。低氧和锡原卟啉组大鼠肺血管增殖细胞数显著升高而凋亡细胞数显著减少 ,细胞增殖凋亡比值分别为对照组的 5倍或 4倍 ,而低浓度CO和血晶素组肺血管增殖细胞和凋亡细胞系数均显著增加 ,细胞增殖凋亡比值均为 1 2。c myc在低氧和锡原卟啉组大鼠肺内表达显著增加 ,在低浓度CO和血晶素组大鼠肺内表达减少。结论 增殖和凋亡现象共存在于正常和处理大鼠的肺血管细胞中 ,也许c myc等基因的异常表达导致了细胞增殖和凋亡的失衡 。

吸入大剂量激素治疗重度哮喘的临床研究

目的 观察大剂量激素吸入治疗慢性重度哮喘的临床疗效及副作用。方法 选择 38例重度哮喘患者随机分为A、B两组 ,分别给大剂量丙酸倍氯米松经储雾罐和不经储雾罐吸入治疗 8～ 14周。在治疗前后观察呼气峰流速 (PEF)和症状记分的改变及副作用的情况。结果 吸入大剂量激素可以显著改善患者的临床症状和气道阻塞。其主要不良反应为口腔霉菌感染、声音嘶哑或咽喉不适等局部副作用。用储雾罐吸入激素可以明显减少局部副作用的出现并增强疗效。

呼吸性酸碱失衡对家兔肾脏内髓集合管细胞碳酸酐酶活性及其mRNA表达的影响

目的 探讨呼吸性酸碱失衡对家兔内髓集合管 (IMCD)细胞碳酸酐酶 (CA)活性及其mRNA表达的影响。方法 采用咪唑 Tris技术测定呼吸性酸碱失衡IMCD细胞的CA活性 ;分别用原位杂交和RT PCR检测这些细胞CAⅣmRNA的表达变化。结果 呼酸组的CA的T1 2 明显缩短 ,而呼碱组显著延长。原位杂交和RT PCR结果均显示呼酸显著上调CAⅣmRNA表达 ;呼碱下调CAⅣmRNA表达 ,但与对照组无显著差别。结论 呼酸显著影响家兔肾脏IMCD细胞CA活性及其mRNA表达 ;呼碱显著降低CA活性 ,而CAⅣ的mRNA表达无明显下调 ,其原因尚等进一步研究。

人肺癌细胞原代培养药敏检测及4种耐药相关蛋白表达的研究

目的 采用MTT法对人肺癌细胞药物敏感性进行研究。方法 对 2 6例外科手术标本进行原代细胞培养 ,用MTT法对培养成功者进行阿霉素 (ADM)、顺铂 (DDP)、长春新碱 (VCR)和足叶乙甙 (VP16) 4种化疗药的药敏实验 ,并应用免疫组化法检测其中 10例肺癌组织TOPOⅡ、p5 3、bcl 2和GST π的表达。结果 2 1例培养成功者药敏检测表明ADM、DDP、VCR和VP164种化疗药的有效率分别为 19 0 %、3 8 1%、2 3 8%和 2 3 8%。 10例对上述 4种化疗药有不同程度耐药的肺癌组织有不同程度TOPOⅡ、p5 3、bcl 2和GST π的表达。结论 用手术切除的肺癌组织进行肿瘤细胞原代培养和MTT法检测细胞对化疗药物的反应性是可行的 ,药敏实验的结果对临床用药具有提示作用。检测手术肺癌组织的TOPOⅡ、p5 3、bcl 2和GST π表达 。

一条新肺腺癌多药耐药细胞cDNA片段在胃癌中表达的研究

目的 我们在前期工作中通过抑制消减杂交技术 (Suppressionsubtractivehybridization ,SSH)在肺腺癌细胞中发现了 1条新的耐药相关基因片段。本研究主要探讨该片段在胃癌及癌旁正常组织中的表达情况。方法 利用随机引物法将新片段用地高辛标记为探针 ,通过组织原位杂交技术 (Insituhybridizationhistochemistry ,ISHH)检测其在胃癌及癌旁正常组织中的表达情况。结果 该片段在大多数 ( 12 16例 )胃腺癌组织中有表达 ,在癌旁正常组织中没有表达 ,二者之间相差非常显著 (P <0 .0 1) ,而印戒细胞癌组织中无该片段表达 ,与腺癌相比较相差非常显著 (P <0 .0 1)。结论 在大多数被检测的胃腺癌组织中有该片段的表达 ;该片段可能是一些肿瘤组织本身所具有的 。

溺海肺损伤的发病机制和治疗的研究进展

溺海肺损伤的发病机制包括低氧血症和酸碱失衡、电解质紊乱、肺泡上皮细胞和肺微血管内皮细胞的直接损伤及水通道和离子通道改变、血流动力学和心功能改变、肺组织中内皮素、降钙素和血红素氧合酶改变、肺泡巨噬细胞和表面活性物质改变、血浆氧自由基、肿瘤坏死因子和白细胞介素-8等细胞因子改变。溺海肺损伤的治疗包括机械通气、糖皮质激素、高压氧治疗、NO吸入、肺灌洗和药物治疗。

小细胞肺癌分子细胞生物学的研究进展

在癌变的过程中,发生了多种遗传变异和生物学改变。遗传变异和生物学改变的结合,则促进肿瘤的恶性发展。小细胞肺癌是一种多基因参与和协同作用的恶性肿瘤,临床表现为早期广泛转移,以及对化疗药物初次敏感但易产生耐药性和复发等。目前,对小细胞肺癌而言,在了解其恶性转化的分子细胞生物学机制基础上,制定新的治疗方案迫在眉睫。小细胞肺癌的分子细胞生物学特征常表现为多种染色体异常,最为常见的是3p缺失,以及癌基因和抑癌基因的变异。伴随着遗传变异,小细胞肺癌还表现出细胞表面受体的过度表达,包括受体酪氨酸激酶、G蛋白耦合受体、整合蛋白及其它受体等。一些被激活的下游分子,例如磷脂酰肌醇激酶,有可能成为新的治疗方案的靶位点。

大鼠肺动脉平滑肌细胞缺氧后STAT3活性变化与细胞增殖关系的研究

目的:探讨信号转导及转录活化因子3(STAT3)对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及作用机制。方法:组织块法原代培养PASMCs,用AG490预孵育后进行缺氧处理,半定量RT-PCR,Western blot法分别检测缺氧2h、6h、12h、16h、24h组STAT3酪氨酸活性水平变化;半定量RT-PCR检测缺氧条件下上述时相点c-myc mRNA水平变化;3H-TdR掺入法观察缺氧条件下细胞增殖变化。结果:Western blot定量分析显示缺氧培养6h组STAT3酪氨酸磷酸化水平升高,12h组达高峰,16h略有下降;缺氧培养2h组c-myc mRNA表达升高,4h达高峰,6h下降,12h恢复至正常水平;3H-TdR掺入法结果显示缺氧6h组细胞3H-TdR掺入量的增加,并随缺氧时间延长变化更为显著。AG490抑制缺氧诱导STAT3酪氨酸磷酸化及c-myc mRNA表达。结论:①STAT3活化和c-myc表达参与缺氧PASMCs增殖;②在缺氧PASMCs增殖过程中STAT3上调c-myc表达。

大鼠γ-干扰素基因转染大鼠肺泡巨噬细胞和气道上皮细胞的实验研究

目的 构建重组大鼠γ 干扰素真核表达载体 ,探讨其转染大鼠肺泡巨噬细胞 (AM)和气道上皮细胞的可行性及表达水平。方法 采用RT PCR技术克隆了大鼠γ 干扰素 ,并将其定向克隆到逆转录病毒载体pLXSN上 ,构成真核表达重组载体。将重组载体转染培养的AM和气道上皮细胞。用PCR法鉴定重组载体整合在细胞基因组DNA中。并检测细胞培养上清中γ 干扰素浓度和活性。结果 DNA测序证明 ,构建的重组载体中γ 干扰素的基因方向正确 ,DNA序列与GeneBank中大鼠的γ 干扰素cDNA序列相同。转染后AM和气道上皮细胞基因组DNA的PCR产物电泳可见转染的重组载体DNA片段条带。pLXSN IFN载体组的AM和气道上皮细胞培养上清中大鼠γ 干扰素浓度和活性显著高于pLXSN空载体组 (P <0 .0 1)。结论 本研究构建的大鼠γ 干扰素重组表达载体可成功地转染大鼠AM和气道上皮细胞 ,整合入基因组DNA ,并分泌有活性的γ 干扰素 。