超声内镜在上消化道隆起性病变诊断和治疗中的价值

目的 评估超声内镜在上消化道隆起性病变诊断及治疗中的价值。方法 用超声内镜对 70例上消化道隆起性病变进行检查。结果 息肉 5例 ,平滑肌瘤 2 5例 ,平滑肌肉瘤 3例 ,脂肪瘤 3例 ,异位胰腺 3例 ,静脉曲张 3例 ,并明确了起源层次 ,壁外压迫 2 8例。对起源于粘膜层、粘膜肌层及粘膜下层的部分病变进行内镜治疗 ,对起源于固有肌层的部分病变进行手术治疗 ,其超声内镜与病理诊断一致。结论 超声内镜能对上消化道隆起性病变进行起源和初步定性诊断 ,对粘膜下肿瘤治疗方案的选择具有重要的指导意义。

As_2O_3对胃癌细胞周期及端粒酶活性的影响

目的 探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对SGC 790 1胃癌细胞端粒酶活性及细胞周期的影响及其机制。方法 细胞凋亡、细胞周期分布及相关蛋白的表达采用流式细胞术 ;端粒酶活性的检测采用端粒末端重复序列扩增 ELISA法 (TRAP ELISA) ,端粒酶亚单位mRNA及c mycmRNA的表达采用RT PCR技术。结果 As2 O3 可明显抑制SGC 790 1细胞的生长 ,细胞凋亡率明显增加 ,G0 /G1期细胞减少 ,S和G2 /M期细胞增加 ,Bcl 2、c myc、PCNA蛋白表达减少 ,Bax蛋白表达增加 ,端粒酶活性明显下降 ;端粒酶亚单位hTR和TP1mRNA无明显变化 ,hTRTmRNA表达减少 ,同时 ,c mycmRNA的表达亦减少。结论 As2 O3 对SGC 790 1细胞的抑制作用可能是通过二条途径实现 :一个是诱导细胞凋亡 ,另一个是通过下调hTRTmRNA的表达来下调端粒酶活性 ,其机制有可能与c myc和Bcl 2基因的减少以及Bax基因的增加有关。

人端粒酶蛋白催化亚单位反义基因转染对胃癌细胞恶性表型的逆转作用

目的 探讨人端粒酶蛋白催化亚单位（ｈＴＲＴ）反义基因治疗对胃癌细胞恶性表型的逆转作用。方法 采用基因重组技术，构建ｈＴＲＴ正、反义真核表达载体，采用脂质体法导入ＳＧＣ－７９０１细胞，检测细胞生长曲线、端粒酶活性凋亡、细胞周期、软琼脂中克隆形成率及裸鼠体内成瘤性的变化。结果 成功构建ｈＴＲＴ正、反义真核表达载体，并导入ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞株中，获得稳定表达正、反义基因的细胞系７９０１－Ｓ、７９０１－ＡＳ１和７９０１－ＡＳ２。７９０１－ＡＳ１和７９０１－ＡＳ２出现显著生长抑制现象，端粒酶活性明显下降，细胞凋亡增加，异型性减小，Ｇ０／Ｇ１期细胞增加，Ｓ和Ｇ２Ｍ期细胞减少，增殖指数减小，软琼脂中无克隆形成，裸鼠体内成瘤消失。结论ｈＴＲＴ反义基因治疗可以明显抑制ＳＧＣ－７９０１细胞的增殖，部分逆转肿瘤细胞的恶性表型，其机制可能主要是通过诱导细胞分化而非诱导细胞凋亡途径实现的，提示ｈＴＲＴ基因可以作为肿瘤治疗的靶基因。

大鼠应激性胃粘膜损伤与壁细胞泌酸的关系

目的 探讨应激状态下大鼠胃粘膜损伤与壁细胞泌酸状态的关系。方法 将 48只SD大鼠随机分成对照组、水浸束缚应激 1、2、4h组、奥美拉唑组及生理盐水组。检测胃液pH值、胃粘膜损伤指数 (UI) ,光镜观察胃粘膜组织学改变 ,电镜观察壁细胞超微结构变化。结果 随应激时间延长UI明显增加 ,而胃液pH值明显降低 (P <0 0 1) ,二者之间呈明显负相关 (r=-0 9987,P <0 0 1) ;奥美拉唑组与应激 4h组和生理盐水组比 ,UI明显降低 (P <0 0 1)。电镜示壁细胞在对照组呈静息状态 ,而应激 1h ,2h ,4h组呈不同激活状态 ,以 4h最明显 ,呈泌酸活跃状态。奥美拉唑组壁细胞见分泌小管扩张 ,有绒毛稀少或密集分布的不同表现。

TRAIL蛋白的表达、纯化和抗肿瘤活性

目的 利用大肠杆菌表达出TRAIL蛋白 ,并观察分离纯化后的TRAIL蛋白的抗肿瘤活性。方法 采用CaCl2 法将带有TRAIL(氨基酸 114 -2 81,含六聚组氨酸尾 )基因的pET d质粒转入大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS ,IPTG诱导蛋白表达 ;使用Ni NTA层析柱分离纯化蛋白 ,SDS PAGE和Westernblot法鉴定TRAIL蛋白的表达 ;MTT法检测TRAIL蛋白的抗肿瘤活性。结果 我们分离纯化出分子量为 2 0 .1× 10 3 的蛋白 ,Westernblot法证实为TRAIL蛋白 ,MTT法检测出其有较高的抗肿瘤活性 ,呈现出较好的时效和量效关系。结论 成功地利用大肠杆菌表达、Ni NTA层析柱分离纯化出具有抗肿瘤活性的TRAIL蛋白 。

胃粘膜幽门螺杆菌感染与线粒体DNA微卫星不稳的关系

目的 探讨胃粘膜幽门螺杆菌 (Hp)感染与线粒体DNA微卫星不稳 (mtMSI)的关系。方法 采用改良Giemsa染色、免疫组化染色和PCR方法检测Hp ,并对Hp进行分型 ;采用限制性片段多态性 (PCR SSCP)方法检测胃粘膜细胞mtMSI。结果 30例胃癌检出mtMSI 11例 ( 36 .7% ) ,15例肠化中有 4例 ( 2 6 .7% )检出mtMSI ,10例异型增生胃粘膜有 3例 ( 30 % )检出mtMSI。mtMSI主要发生于D loop闭环区。Hp感染胃粘膜mtMSI发生率显著高于非Hp感染组 (P <0 .0 1)。mtMSI发生与cagA+ Hp似乎没有密切关系(P >0 .0 5 )。结论 Hp感染可能与胃粘膜细胞mtMSI发生有关 ,而mtMSI的发生可能参与了胃癌的发生过程。

表没食子儿茶素没食子酸酯对胃癌细胞端粒酶活性的抑制作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（ＥＧＣＧ）对ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞端粒酶活性的影响。方法 用不同浓度的ＥＧＣＧ处理７９０１细胞，采用ＭＴＴ法和ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ法测定增殖抑制率和端粒酶活性，用ＲＴ－ＰＣＲ法测定端粒酶亚单位ｈＴＲ、ＴＰ１、ｈＥＳＴ２／ｈＴＲＴ和ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ的表达。结果 ＥＧＣＧ在１００μｍｏｌ／Ｌ以下浓度对７９０１细胞增殖无明显抑制作用，而在２００μｍｏｌ／Ｌ以上浓度时对７９０１细胞增殖有明显的抑制作用，其２４ｈ和４８ｈＩＣ５０分别为 ８０５．４μｍｏｌ／Ｌ和４６３．３μｍｏｌ／Ｌ。１２．５ μｍｏｌ／Ｌ以上浓度的 ＥＧＣＧ对７９０１细胞的端粒酶活性有明显的抑制作用，其２４ｈ和４８ｈ ＩＣ５０分别为２７．４μｍｏｌ／Ｌ和１９．５μｍｏｌ／Ｌ。ＥＧＣＧ处理７９０１细胞能显著抑制其ｈＥＳＴ２／ｈＴＲＴ和 ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达，且抑制程度与 ＥＧＣＧ剂量有关，但对 ｈＴＲＲＮＡ和ＴＰ１ ｍＲＮＡ表达无明显影响。结论 ＥＧＣＧ在非细胞毒性剂量时就能有效地抑制肿瘤细胞的端粒酶活性，此可能是其防癌抗癌的机制之一。

反义hTRT转染对SGC-7901胃癌细胞株形态学的影响

目的 探讨人端粒酶蛋白催化亚单位 (hTRT)反义基因转染对SGC 790 1胃癌细胞株形态学的影响 ;方法 采用脂质体法将hTRT正、反义真核表达载体导入SGC 790 1胃癌细胞株中 ,从光镜、电镜水平观察转染细胞形态学的变化。结果 与未转染细胞相比 ,光镜下hTRT反义基因转染的SGC 790 1胞体增大 ,胞浆丰富 ,分裂相减少 ,核浆比增大 ,异型性减小 ;透射电镜下反义基因转染细胞细胞器丰富 ,胞浆内出现分泌泡样结构及胞质内微囊 ;扫描电镜下反义基因转染细胞表面微绒毛增多 ,胞体周围可见大量颗粒样物质 ,根据AB/PAS染色结果 ,这些颗粒样物质有可能是其分泌的粘液颗粒。结论 hTRT反义基因有促进SGC 790 1细胞分化的作用。

幽门螺杆菌感染与胃粘膜炎症反应和IL-8活性的关系

目的 评价幽门螺杆菌 (Hp)感染与胃粘膜炎症反应和组织IL 8活性的关系。方法 采用改良Giemsa染色、Hp免疫组化染色和PCR方法检测Hp感染并对Hp分类 ;组织IL 8含量测定采用ELISA方法。结果 十二指肠溃疡 (DU ,95 % )、胃溃疡(GU ,80 % )和慢性萎缩性胃炎 (CAG ,70 % )组Hp感染率显著高于正常对照组 ( 30 % ) ,而慢性浅表性胃炎 (CSG ,37.5 % )组与正常对照组相比则无显著差异 ;DU( 85 % )、GU( 6 0 % )和CAG( 5 0 % )组cagA+ Hp感染率显著高于正常对照组 ( 15 .0 % ) ,而CSG组 ( 15 .6 % )与对照组相比则无显著差异 ;Hp感染率和IL 8水平随炎症程度的加重而增高。Hp感染和cagA+ Hp感染胃粘膜IL 8水平分别显著高于非Hp感染和cagA-Hp胃粘膜。结论 胃粘膜Hp感染以及HpcagA的表达状态与胃粘膜炎症反应程度以及胃粘膜IL 8含量密切相关。

人胆囊上皮细胞的分离、培养及鉴定

目的 探索人胆囊上皮细胞的较佳分离方法和合适的生长条件 ,为研究胆囊的生理功能和相关疾病打下基础。方法采用IV型胶原酶及钝性擦刮法分离细胞 ,IV型胶原包被培养皿 ,DMEM/HamF12培养基联合培养。结果 每个胆囊可分离得到( 5～ 10 )× 10 7个胆囊上皮细胞 ,接种 1周内生长旺盛 ,第 3、4天达到峰值 ,呈现扁平多角形成片贴壁状态。结论 IV型胶原酶消化法可成功分离人胆囊上皮细胞 ,DMEM/HamF12培养基可提供较为满意的生长条件。

hTRT反义基因转染对肝癌细胞端粒酶亚单位及细胞周期的影响

目的 探讨人端粒酶蛋白催化活性亚单位 (Humantelomerasereversetranscriptase ,hTRT)反义基因转染对HepG2 肝癌细胞株端粒酶亚单位及细胞周期的影响。方法 采用流式细胞仪检测hTRT正义基因转染的HepG2 细胞(HepG2 S)以及hTRT反义基因转染的HepG2 细胞 (HepG2 AS)的细胞周期 ,采用RT PCR法检测上述细胞hTRT、端粒酶RNA(hTR)、端粒酶相关蛋白 1(TP1)以及c myc和bcl 2基因的变化 ,同时采用Westernblot检测hTRT蛋白质的变化。结果 HepG2 AS出现G0 G1 期阻滞 ,增殖指数增加 ,凋亡率亦明显增加 ,进一步研究发现 ,HepG2 AS端粒酶亚单位hTRT在蛋白质和mRNA水平均表达减少 ,而TP1、hTR无明显变化 ,bcl 2和c mycmRNA的表达亦明显下调。结论 hTRT反义基因不仅可以下调HepG2 细胞hTRTmRNA和蛋白质的表达 ,而且可以下调c myc、bcl 2mRNA的表达 ,从而一方面降低端粒酶活性 ,另一方面一定程度增加凋亡细胞的比率 。

多重PCR和DNA测序技术检测胃癌APC基因15外显子突变

目的 探讨APC基因突变在胃癌发生中的作用及与微卫星DNA不稳的关系。方法 采用多重PCR、DGGE电泳和DNA测序技术检测APC15外显子突变 ,采用PCR为基础的方法检测微卫星DNA不稳。结果 6 8例胃癌中检出APC基因 15外显子突变 15例 ( 2 2 .1% ) ,APC基因突变在肠型胃癌的检出率显著高于弥漫型胃癌 (P <0 .0 5 ) ,而与肿瘤大小、分化程度、浸润深度和临床病理分期无显著相关。至少有 1个位点发现MSI者 17例 ( 2 5 .0 % )。将MSI分为高频率MSI(MSI H ,≥ 2个位点 ) 8例、低频率MSI(MSI L ,仅为 1个位点 ) 9例和MSI阴性 (MSS) 5 1例 3组 ,结果APC基因突变均发生于MSI L和MSS组 ,而MSI H未见有突变者。结论 APC基因可能是肠型胃癌的易感基因 ,APC基因突变可能参与了LOH病理途径 ,而与MSI途径无关。

应用放大内镜和普通内镜鉴别瘤性和非瘤性大肠息肉

目的 比较放大内镜和普通内镜对大肠息肉的实时诊断及治疗的价值。方法 对 10 5例大肠息肉进行靛胭脂染色、普通内镜及放大内镜观察其表面结构形态 ,并参照Kudo法进行分类 ,共分七型 :Ⅰ型、Ⅱ型、ⅢL型、ⅢS、Ⅳ型、Ⅴ型和混合型。Ⅰ、Ⅱ型为非瘤性息肉 ,ⅢL、ⅢS、Ⅳ及混合型为腺瘤性息肉 ,Ⅴ型为癌变。比较放大内镜和普通内镜在鉴别瘤性和非瘤性息肉中的价值。结果 放大内镜下炎性及增生性息肉中非瘤性表型为 78 5 7% ,瘤性表型为 2 1 43 % ;腺瘤息肉中非瘤性表型为 3 3 3 % ,瘤性表型为 96 67% ;幼年性息肉均为非瘤性表型。Ⅰ、Ⅱ、ⅢL、ⅢS、Ⅳ、Ⅴ及混合型息肉中腺瘤率分别为 0、13 3 3 %、70 %、75 %、10 0 %、10 0 %和 63 64 %。分型诊断瘤性和非瘤性息肉的敏感性为 96 67%和 80 % ,特异性为 86 5 7%和 94 73 % ,鉴别诊断准确率为 89 5 2 %。普通内镜分型诊断瘤性的敏感性为 88 3 % ,特异性为 81 5 % ;非瘤性息肉的敏感性为 73 3 % ,特异性为 82 5 % ;鉴别诊断准确率为 82 %。结论 用色素放大内镜和普通色素内镜分析大肠息肉表面结构 ,能有效鉴别大肠非瘤性息肉、腺瘤及癌。因此 。

人肝细胞生成素受体的确定及特性

目的 研究人重组肝细胞生成素 (rhHPO)特异性刺激肝细胞增殖的信号转导是否通过特异性受体结合介导。方法 通过受体结合和特异性竞争抑制实验及Scatchard分析原代培养大鼠肝细胞、人胎肝细胞和肝癌细胞的特性。结果 原代培养大鼠肝细胞、人胎肝细胞和肝癌细胞存在HPO受体 ,受体数量分别为 10 0 0 0个 /细胞、2 0 0 0 0个 /细胞和 5 5 0 0 0个 /细胞 ,平衡解离常数(Kd)分别为 2、1.4及 0 .7pmol,HPO与受体结合的复合物分子量约为 90× 10 3 ,推算出HPO与该受体结合具有饱合性和特异性 ,此结合不能被EGF、TGF α和胰岛素所竞争抑制。通过交联反应在SDS PAGE电泳上显示此受体分子量约 75× 10 3 。结论 HPO促肝细胞增殖作用是通过肝细胞表面这种特异性膜受体介导的。

胃癌组织hMLH1和hMSH2基因启动子区甲基化状态研究

目的 探讨hMLH1和hMSH2基因启动子区的甲基化状态与微卫星DNA不稳的关系。方法 采用甲基化特异性PCR方法检测hMLH1和hMSH2基因启动子区的甲基化状态 ,采用PCR为基础的方法检测微卫星DNA不稳。结果 正常胃粘膜未见hMLH1和hMSH2基因启动子区的高甲基化。 6 8例胃癌中检出hMLH1高甲基化 11例 ,占 16 .2 % ,而且均为去甲基化和高甲基化并存 ,未见有hMSH2高甲基化者。将MSI分为高频率MSI(MSI H ,≥ 2个位点 ) 8例、低频率MSI(MSI L ,仅为 1个位点 ) 9例和MSI阴性(MSS) 5 1例 3组 ,结果MSI H组hMLH1高甲基化的检出率显著高于MSI L和MSS组 (P <0 .0 1)。结论 hMLH1高甲基化可能参与了MSI病理途径 ,而hMSH2甲基化状态可能与MSI途径无关。