血液系统恶性肿瘤基因治疗的现状及展望

90年代以来,国内外血液系统恶性肿瘤的基因治疗已取得突破性进展。应用理化方法、以病毒或非病毒为载体方法进行基因转移的技术日趋成熟,成功地将肿瘤抑制基因、多药耐药基因、抗肿瘤的细胞因子基因等外源特定基因导入靶细胞,从而调控某些与致病有关的基因表达,发挥抗肿瘤细胞增殖或增强机体免疫应答能力的治疗目的,显示了基因治疗在血液系统恶性肿瘤治疗上的广阔前景。

恶性血液病患者肠道双歧杆菌的定量调查

目的 研究恶性血液病患者化疗前后肠道双歧杆菌 (Bifidobacterium)数及检出率的变化情况。方法 用自制改良BS培养基对 5 2例恶性血液病患者化疗前后大便进行双歧杆菌定量检测。结果 恶性血液病患者肠道双歧杆菌数较正常人明显减少 ,化疗前肠道双歧杆菌检出率为 44 2 % ,化疗后肠道双歧杆菌检出率为 15 4% ,较化疗前检出率显著降低 (P <0 0 1)。结论 恶性血液病患者化疗前后肠道双歧杆菌数有明显的变化 ,调节恶性血液病患者肠道微生态平衡 ,有助于促进恶性血液病患者健康状况的改善。

人参皂甙单体Rb1对多药耐药细胞系K562/HHT细胞内柔红霉素浓度的影响

目的 探讨中药钙离子通道拮抗剂人参皂甙单体Rb1对白血病多药耐药细胞系 (K562 /HHT)细胞内柔红霉素浓度的影响。方法 细胞内柔红霉素浓度荧光测定法、细胞P GP表达常规APAAP测定法、mdr1基因表达RT PCR测定法等实验方法 ,探讨Rb1的逆转机理。结果 Rb1作用后K562 /HHT细胞内DNR浓度增加 (P <0 .0 1 )。结论 K562 /HHT是一种以P GP介导的多药耐药细胞系 ,检测显示K562 /HHTP GP表达阳性率 1 0 0 % ,并有很强的mdr1基因表达 ,提示Rb1通过抑制P GP外排药物功能 ,提高细胞内药物浓度 ,是Rb1逆转耐药作用的主要机理。

CTLA4Ig基因修饰的BMSCs支持CD34^+细胞扩增的实验研究

目的 通过腺病毒介导CTLA4Ig在骨髓基质细胞 (BMSCs)中的表达 ,探讨CTLA4Ig基因修饰的BMSCs支持CD34+ 细胞扩增的功能变化 ,为该基因修饰的BMSCs联合造血干细胞移植 (HSCT) ,达到预防移植物抗宿主病 (GVHD )和纠正预处理损伤的造血微环境 (HIM)积累实验依据。方法 以CTLA4Ig 重组腺病毒按感染复数 (Multiplicityofinfection ,MOI) 5 0转染BMSCs ,以RT PCR检测目的基因转录 ;免疫磁珠 (MACS)阳性选择分选骨髓CD34+ 细胞 ,流式细胞仪检测其纯度 ;通过骨髓基质细胞支持CD34+ 扩增的细胞总数及集落形成细胞数 (CFC)的变化 ,比较转染和未转染BMSCs在支持CD34+ 细胞扩增方面的差异。结果 RT PCR在转染组及转染后传两代BMSCs中检测到CTLA4Ig基因的转录 ;通过观察扩增后细胞总数及CFC数的变化 ,发现CTLA4Ig基因转染组与未转染组BMSCs支持CD34+ 细胞扩增的能力也无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 CTLA4Ig 重组腺病毒有效介导目的基因对BMSCs的转染 ,在MOI为 5

肝细胞癌中p16基因及其甲基化的检测与意义

目的 研究P16、P16甲基化在肝细胞癌 (Hepatocellularcarcinoma ,HCC)与癌旁组织中的表达特点 ,探讨其与HCC生物学行为的关系。方法 分别以免疫组化及PCR技术检测 3 3例人肝细胞癌及其癌旁组织中p16基因表达及其甲基化的水平 ,并结合临床资料进行分析。结果 肝癌的p16基因表达率 (63 64 % )明显低于癌旁组织 (10 0 % ) (P <0 0 5 ) ;p16基因阳性表达率在无转移的肝癌中为 85 7% ,有转移组为 2 5 0 % ;高、中和低分化的肝癌分别为 5 2 4% ,2 8 6%和 19 1%。p16基因阳性表达在肝癌患者高分化与中和低分化比较有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,转移与非转移组比较有非常显著性差异 (P <0 0 1)。 3 3例HCC组织中 11例发生p16甲基化 ,均伴肿瘤转移 ,其中高、中和低分化肿瘤各占 2、4、5例 ;相应癌旁组织中未发现p16基因甲基化。结论 p16基因异常表达及其甲基化在肝细胞癌的发生、发展过程中起重要作用。

CagA基因阳性Hp培养滤液对人胃粘膜上皮细胞系DNA损伤作用

目的 研究 ＣａｇＡ阳性幽门螺杆菌（Ｈｐ）培养滤液对人胃粘膜上皮细胞（ＧＥＳ－１）ＤＮＡ的损伤作用。方法 制备 Ｈｐ培养滤液，ＰＣＲ鉴定ＣａｇＡ基因。采用单细胞微凝胶电泳观察Ｈｐ（ＣａｇＡ＋）培养滤液对ＧＥＳ－Ｉ细胞ＤＮＡ的损伤作用。结果 Ｈｐ（ＣａｇＡ＋）培养滤液可使ＧＥＳ－Ｉ细胞形成彗星现象。结论 ＨＰ（ＣａｇＡ＋）培养滤液可以导致ＧＥＳ－Ｉ细胞的ＤＮＡ损伤。ＤＮＡ损伤可能是ＣａｇＡ诱导 ＧＥＳ－Ｉ细胞恶性转化的机制之－。

自制头颈肿瘤专用定位装置配合三维TPS进行精确放疗定位的应用

目的 探讨应用自制头颈部专用立体定位装置配合三维TPS进行精确定位和放射治疗的方法。方法 采用自制头颈专用CT立体定位装置与STAR 2 0 0 0三维TPS配合应用 ,对模拟靶和 8例头颈癌患者进行了CT定位和治疗计划设计 ,并采用模拟定位机对其进行了对比和验证。结果 模拟靶和患者CT立体定位的结果均在模拟定位机上得到验证 ,达到临床精确定位和精确放射治疗的要求。

人DNA MTase反义基因转染对肝癌细胞DNA MTase基因mRNA表达的影响

目的 观察人DNAMTase反义基因转染对肝癌细胞系SMMC 772 1内源性DNAMTase基因mRNA表达的影响。方法 将构建的包含正、反义DNAMTase基因片段的真核表达载体用脂质体法将其转染入肝癌细胞系SMMC 772 1 ;采用RT PCR法观察DNAMTase基因mRNA表达变化。结果 PCR法扩增外源性NeoR基因证实用脂质体法成功将重组载体转染入细胞 ;RT PCR法检测DNAMTase基因mRNA表达 ,显示转染反义DNAMTase基因片段的SMMC 772 1细胞中DNAMTase基因mRNA表达下调。结论 人DNAMTase反义基因转染是一种有效、可靠的抑制肝癌细胞系SMMC 772 1DNAMTase基因表达的方法。它为更多了解DNAMTase在肝癌发生。

首例中国可视化人体头颈部CT影像三维重建的初步研究

目的 对首例中国可视化人体头颈部CT影像进行三维重建研究。方法 将首例中国可视化人体头颈部的轴位断层CT图像 (层厚 1mm ,连续扫描 ) ,应用SiemensCRT3 .0图像处理软件在SGIGraphics计算机工作站上进行三维重建和观察。结果 头面部结构得到良好重建 ,其面部轮廓包括鼻翼、唇、外耳廓、下颏等均能清晰显示。头颈部骨骼的精细三维重建 ,显示出颅底圆孔、卵圆孔、棘孔等细微结构。头颈部三维剖面观察可使包括垂体、脑干、颈髓、蝶窦、鼻咽等结构获得良好显示。结论 本研究实现了对首例中国可视化人体头颈部CT影像的三维重建和可视化 。

rhGM-CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞增殖及DNA合成的影响

目的 探讨rhGM CSF促进口腔溃疡愈合的作用机制。方法 取体外培养的胎儿口腔粘膜成纤维细胞 ,用rhGM CSF刺激成纤维细胞后第 2、4、6天用细胞计数及3 H 胸腺嘧啶掺入法 (3 H TdR)测定其增殖情况。结果 rhGM CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞增殖及DNA合成有刺激作用 ,在 80～ 10 0ng/ml时 ,细胞生长达到最佳状态 ,过高浓度rhGM CSF的刺激作用反而下降。结论 rhGM

IFN-α逆转白血病细胞耐药性的实验研究

目的：了解干扰素－α（ＩＦＮ－α）逆转白血病细胞多药耐药性（ＭＤＲ）的作用和可能机制。方法：采用链亲和素－胶体金原位杂交（ＳＡＧ－ＩＳＨ）检测了ＩＦＮ－α孵育前后的５２例白血病患者骨髓细胞的多药耐药基因（ＭＤＲ１）表达，用荧光分光光度法测定了ＩＦＮ－α孵育前后的５２例骨髓细胞内柔红霉素（ＤＮＲ）浓度。结果：全部５２例患者中２４例（４６．２％）ＭＤＲ１阳性，初治组与复发难治组相比相差显著。ＭＤＲ１阳性者骨髓细胞内柔红霉素浓度与阴性者相差显著。ＩＦＮ－α孵育后的ＭＤＲ１阳性率与孵育前相差不显著，但经ＩＦＮ－α孵育前后的ＭＤＲ１阳性者的骨髓细胞内ＤＮＲ浓度相差显著，阴性者亦然。结论：ＩＦＮ－α能增加白血病细胞内ＤＮＲ浓度，其逆转ＭＤＲ环节不在ＭＤＲ１基因水平上。

人DNA MTase反义基因转染对诱导肝癌SMMC7-721细胞凋亡的影响

目的 观察人DNAMTase反义基因转染对肝癌细胞系SMMC 772 1凋亡的影响。方法 采用脂质体法将构建的包含正、反义DNAMTase基因片段的真核表达载体转染入肝癌细胞系SMMC 772 1;采用MTT法绘制生长曲线 ;流式细胞法和原位末端标记法检测细胞凋亡改变。结果 PCR法扩增外源性NeoR基因证实用脂质体法成功将重组载体转染入细胞 ;生长曲线显示转染反义DNAMTase基因片段的SMMC 772 1细胞增殖速度减慢 ;流式细胞法测得其凋亡率由 3 1%增加到 13 5 %。末端标记法也显示其凋亡指数增加。结论 人DNAMTase反义基因转染可诱导肝癌细胞系SMMC 772 1凋亡。

川芎嗪对大剂量化疗小鼠骨髓基质细胞损伤的保护作用

目的 观察川芎嗪对大剂量甲氨喋呤 (MTX)化疗所致骨髓基质细胞 (BMSC)损伤的保护作用及其量效关系。方法 建立大剂量MTX化疗损伤BMSC的小鼠模型后 ,按每千克体重腹腔注射川芎嗪 0mg(对照组 )、2 0mg(Ⅰ组 )、40mg(Ⅱ组 ) ,1次 /d ,第2 1天采取骨髓细胞进行体外BMSC培养、成纤维细胞集落 (CFU F)计数、BMSC层粘附率测定和BMSC层上造血细胞混合集落培养。结果 BMSC生长、CFU F计数、BMSC层粘附率、BMSC层上造血细胞混合集落数目均表现为Ⅱ组 >Ⅰ组 >对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论 川芎嗪对大剂量MTX引起的BMSC损伤有明显的保护作用 。

F68及其联合DMSO对脐血造血细胞的低温保护作用

目的研究普鲁兰尼克(F68)及其联合DMSO在-80℃条件下对脐血造血干细胞的低温保护作用,为临床应用提供依据.方法脐血造血细胞冻存30、60、90 d后复苏,应用台盼蓝拒染率、集落形成试验、3H-TdR掺入率等,测定经F68保护体系冻存的脐血活力,并与目前通用的冷冻保护剂二甲亚砜及CP-1进行了对比研究.结果在-80℃条件下,F68对脐血造血细胞具有明显的冷冻保护作用,并与DMSO具有协同保护效果,联合F68及DMSO的保护体系可使MNC、CFU-GM的平均回收率及台盼蓝拒染率在第90天时分别达到(83.4±6.3)%,(68.8±7.9)%, (92.5±5.1)%,优于目前通用的细胞冻害保护液CP-1及DMSO.90 d的冻存期内,脐血细胞活力无明显下降.结论 F68及其与DMSO组成的冻存方案对脐血造血干细胞具有良好的冻存保护效果.

VBMCD方案联合大剂量胸腺肽治疗多发性骨髓瘤的临床研究

目的 :评价VBMCD方案联合大剂量胸腺肽治疗多发性骨髓瘤 (MM)的临床效果。方法 :应用临床实验研究方法 ,按入院顺序采用区组随机分组法将病例分成实验组与对照组 ,实验组采用VBMCD联合大剂量胸腺肽治疗方案 ,对照组采用改良M2 治疗方案。治疗观察 4个疗程后进行近期疗效评价。结果 :实验组与对照组治疗的有效率分别为 95 0 %及 5 5 0 % ,两组差异有极显著性 (P <0 0 1)。两种方案治疗后 ,VBMCD联合大剂量胸腺肽方案各项临床疗效指标变化除尿本周氏蛋白阳性转阴率差异无显著性外 ,均较改良M2 法差异有显著性 (P<0 0 5 ) ;主要毒副作用的比较差异均无显著性 (P >0 0 5 ) ;本治疗未见肾功能损伤 ,未见永久性造血干细胞损害和治疗相关性死亡。结论 :VBMCD方案联合大剂量胸腺肽治疗多发性骨髓瘤在临床上疗程短 ,疗效高 ,可以增强病人的抵抗力及对化疗药物的耐受性 ,化疗间歇延长。是一种经济实用 ,有推广应用价值的方案。

脂质体介导ANG反义核酸对A549细胞作用的研究

目的 研究脂质体介导ANG反义核酸转染A5 49细胞后 ,对其中ANG蛋白表达的影响 ,探讨其作为抗血管生成与抗肿瘤药物的可行性。方法 用人工合成的人ANG反义寡聚核苷酸 ,以脂质体为载体转染人肺癌A5 49细胞 ,研究A5 49细胞在基因转染后 ,其ANG蛋白表达的变化。结果 脂质体转染程序优化后 ,得到最佳转染效率 ;免疫组化显示细胞内ANG蛋白表达明显减少 ;培养基ELISA检测显示每细胞分泌的ANG蛋白量与对照组相比有显著差异。结论 ANG反义寡聚核苷酸抑制A5 49细胞中ANG的表达 。

以发热为主要症状恶性肿瘤的诊断

目的 深入探讨发热与恶性肿瘤的关系 ,提高临床医生对恶性肿瘤临床表现多样化的认识 ,从而提高诊断水平。方法 回顾自 1996年以来国内公开发表讨论“不明原因发热”的文章 2 6篇 ,涉及病例数 12 5 1例 ,其中恶性肿瘤 2 36例。结果 以发热为主要临床表现的肿瘤涉及多系统、各年龄层次 ,热型多样 ,容易误诊。结论 肿瘤在发热性疾病中占有重要的地位 ,并有发病率增高的趋势。重视病史采集、系统查体 ,积极开展活组织检查技术。